O objetivo da presente pesquisa foi avaliar os graus de polimorfismos protéicos entre setenta e cinco linhagens de C. albicans isoladas da cavidade oral de crianças saudáveis provenientes de cinco categorias socioeconômicas e oito escolas (particulares e públicas) do município de Piracicaba, Estado de São Paulo, a fim de identificar subespécies de C. albicans e suas similaridades em grupos de populações infantis e estabelecer suas possíveis rotas de disseminação. Culturas celulares foram desenvolvidas em meio YEPD, coletadas por centrifugação e lavadas com solução salina gelada. As proteínas celulares totais foram extraídas por rompimento celular usando pérolas de vidro e submetidas à técnica de SDS-PAGE. Após a eletroforese, as bandas de proteínas foram coradas com Coomassie-blue e analisadas pelo conjunto de programas estatísticos NTSYS-pc versão 1.70. Matriz de similaridade e dendrograma foram gerados, pela aplicação do coeficiente de similaridade de Dice e do algoritmo UPGMA, respectivamente, os quais permitiram avaliar os graus de polimorfismo ou similaridade intra-específico, baseados nos padrões eletroforéticos de proteínas totais de isolados orais de C. albicans. Um total de 13 principais fenons (grupos) foi analisado de acordo com suas características homogêneas (categoria socioeconômica e/ou escola idênticas) e heterogêneas (categorias socioeconômicas e/ou escolas diferentes). Com relação ao aspecto epidemiológico socioeconômico, as composições dos grupos mostraram alta similaridade (0.788 < S D < 1.0) entre algumas linhagens de C. albicans isoladas de crianças saudáveis independentemente de suas camadas socioeconômicas (alta, média e baixa). Isolados de alta similaridade não foram encontrados nas cavidades orais de crianças saudáveis pertencentes às camadas sociais A e D, B e C, ou C e E. Isto pode ser explicado pela ausência de uma rota de disseminação entre estas crianças. Geograficamente, algumas crianças saudáveis entre escolas idênticas e diferentes (particulares e públicas) também são portadoras de linhagens semelhantes, mas tal similaridade não foi encontrada entre outros de determinadas escolas. Esses dados podem refletir uma rota de disseminação restrita destes microrganismos em alguns grupos de escolares saudáveis, a qual pode ser dependente da categoria socioeconômica ou local geográfico de cada criança. Em contraste à alta similaridade, a baixa similaridade ou alto grau de polimorfismo (0.499 < S D < 0.788) dos perfis protéicos foi demonstrado em 23 (30,6%) isolados orais de C. albicans. Considerando o aspecto epidemiológico social, 42,1%, 41,7%, 26,6%, 23,5% e 16,7% foram isolados de crianças provenientes das categorias socioeconômicas A, D, C, B e E, respectivamente, e geograficamente, 63,6%, 50%, 33,3%, 33,3%, 30%, 25% e 14,3% foram isolados de crianças provenientes das escolas LAE, MA, CS, AV, HF, FMC e MEP, respectivamente. Tais resultados sugerem um maior grau de polimorfismo entre algumas linhagens isoladas de crianças saudáveis independentemente de suas camadas sociais ou locais geográficos. Estudos complementares envolvendo escolares saudáveis e seus familiares, professores, serventes, hábitos nutricionais e de higiene deverão ser realizados a fim de estabelecer as fontes de tais padrões de colonização em grupos de populações de crianças saudáveis. Os perfis de proteínas totais obtidos por SDS-PAGE associados com análise numérica computadorizada podem proporcionar critérios adicionais para os estudos epidemiológicos e taxonômicos de C. albicans.
The aim of this research was to evaluate the protein polymorphism degree among seventy-five C. albicans strains from healthy children oral cavities of five socioeconomic categories from eight schools (private and public) in Piracicaba city, São Paulo State, in order to identify C. albicans subspecies and their similarities in infantile population groups and to establish their possible dissemination route. Cell cultures were grown in YEPD medium, collected by centrifugation, and washed with cold saline solution. The whole-cell proteins were extracted by cell disruption, using glass beads and submitted to SDS-PAGE technique. After electrophoresis, the protein bands were stained with Coomassie-blue and analyzed by statistics package NTSYS-pc version 1.70 software. Similarity matrix and dendrogram were generated by using the Dice similarity coefficient and UPGMA algorithm, respectively, which made it possible to evaluate the similarity or intra-specific polymorphism degrees, based on whole-cell protein fingerprinting of C. albicans oral isolates. A total of 13 major phenons (clusters) were analyzed, according to their homogeneous (socioeconomic category and/or same school) and heterogeneous (distinct socioeconomic categories and/or schools) characteristics. Regarding to the social epidemiological aspect, the cluster composition showed higher similarities (0.788 < S D < 1.0) among C. albicans strains isolated from healthy children independent of their socioeconomic bases (high, medium, or low). Isolates of high similarity were not found in oral cavities from healthy children of social stratum A and D, B and D, or C and E. This may be explained by an absence of a dissemination route among these children. Geographically, some healthy children among identical and different schools (private and public) also are carriers of similar strains but such similarity was not found among other isolates from children from certain schools. These data may reflect a restricted dissemination route of these microorganisms in some groups of healthy scholars, which may be dependent of either socioeconomic categories or geographic site of each child. In contrast to the higher similarity, the lower similarity or higher polymorphism degree (0.499 < S D < 0.788) of protein profiles was shown in 23 (30.6%) C. albicans oral isolates. Considering the social epidemiological aspect, 42.1%, 41.7%, 26.6%, 23.5%, and 16.7% were isolates from children concerning to socioeconomic categories A, D, C, B, and E, respectively, and geographically, 63.6%, 50%, 33.3%, 33.3%, 30%, 25%, and 14.3% were isolates from children from schools LAE (Liceu Colégio Albert Einstein), MA (E.E.P.S.G. "Prof. Elias de Melo Ayres"), CS (E.E.P.G. "Prof. Carlos Sodero"), AV (Alphaville), HF (E.E.P.S.G. "Honorato Faustino), FMC (E.E.P.G. "Prof. Francisco Mariano da Costa"), and MEP (E.E.P.S.G. "Prof. Manasses Ephraim Pereira), respectively. Such results suggest a higher protein polymorphism degree among some strains isolated from healthy children independent of their socioeconomic strata or geographic sites. Complementary studies, involving healthy students and their families, teachers, servants, hygiene and nutritional habits must be done in order to establish the sources of such colonization patterns in population groups of healthy children. The whole-cell protein profile obtained by SDS-PAGE associated with computer-assisted numerical analysis may provide additional criteria for the taxonomic and epidemiological studies of C. albicans.
