Uma vez que estudos anteriores sobre a atividade enzimática da glutationa peroxidase (GSH-Px) divergem acerca da metodologia e dos resultados, este estudo teve por objetivo investigar a influência de diferentes condições de ensaio sobre a atividade da GSH-Px em coxas de frangos, oriundos de diferentes dietas, nas quais se variaram a fonte e a concentração de selênio. As atividades da GSH-Px foram determinadas seis horas após o abate e 120 dias após o armazenamento a -18 ºC. As diferentes condições de ensaio envolveram a pré-incubação (0, 10 e 30 minutos), o meio de reação, os tipos de substratos [H2O2 (0,72 mM, 7,2 mM e 72 mM) e terc-butil hidroperóxido 15 mM] e as concentrações diferentes de tampões [tampão 1 (fosfato de potássio 50 mM pH 7,0 + EDTA 1 mM + mercaptoetanol 1 mM) e tampão 2 (tris-HCl 50 mM pH 7,6 + EDTA 1 mM + mercaptoetanol 5 mM)] no meio de reação. Os resultados mostraram que: i) a maior atividade da GSH-Px foi observada quando a enzima e o substrato foram colocados em contato a 22 ºC sem qualquer pré-incubação; ii) o peróxido de hidrogênio, quando utilizado em concentrações acima de 0,72 mM, saturou a enzima GSH-Px e inibiu sua atividade; iii) a enzima GSH-Px apresentou maior afinidade para o substrato peróxido de hidrogênio, quando comparado ao peróxido de terc-butil, e iv) a adição do tampão mercaptoetanol não promoveu aumento na atividade da enzima GSH-Px. A atividade da GSH-Px também não foi influenciada pela fonte e pela concentração de selênio vindo pela dieta. Os resultados obtidos permitiram definir qual a melhor temperatura de contato entre a enzima e o substrato (22 ºC) e qual a melhor concentração e o tipo de substrato e de tampão a serem utilizados. Essas informações poderão servir de base para a execução de futuros trabalhos envolvendo a determinação da atividade da GSH-Px em carnes, pois há contradições nas poucas informações existentes na literatura.
Due to the fact that previous studies on the enzymatic activity of Glutathione peroxidase (GSH-Px) diverge widely in their methodology and results, this study aimed to investigate the influence of different analytical conditions on GSH-Px activity in chicken thighs from broilers that were fed different diets with different sources and concentrations of selenium. GSH-Px activity was evaluated six hours after slaughter and 120 days after frozen storage at -18 ºC. The different analytical conditions included time of pre-incubation (0, 10 and 30 minutes), reaction medium, types of substrate (H2O2 (0.72 mM, 7.2 mM, and 72 mM) and Terc-butil hydroperoxide 15 mM), and different buffer concentrations (buffer 1, potassium phosphate 50 mM pH 7.0 + EDTA 1 mM + mercaptoethanol 1 mM, and buffer 2, tris-HCl 50 mM pH 7.6 + EDTA 1 mM + mercapthanol 5 mM). The results show that the highest GSH-Px activity was observed when enzyme and substrate were in contact at 22 ºC without any pre-incubation, and that, when used at concentrations above 0.72 mM, hydrogen peroxide saturated the GSH-Px enzyme and inhibited its activity. The enzyme presented higher affinity to hydrogen peroxide when compared to terc-butil peroxide, and the addition of a buffer containing mercaptoethanol did not increase GSH-Px enzymatic activity. The activity of GSH-Px was not influenced by the source and concentration of selenium in the diet either. The obtained results allowed the determination of the best temperature of contact between the enzyme and substrate (22 ºC), the optimum concentration, and the type of substrate and buffer to be used. This information is extremely useful for future studies on GSH-Px activity in meat due to the divergence and little information found in the literature.
