Coccidioidomicose é uma doença emergente no Brasil; a manutenção adequada e autenticação de isolados de Coccidioides spp são essenciais para a pesquisa em diversidade genética de micro-organismos, bem como para a compreensão da doença em humanos. Dezessete isolados de Coccidioides preservados em óleo mineral desde 1975 na coleção de culturas do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) foram avaliados com relação à viabilidade, características morfológicas e genéticas, com o objetivo de autenticação das culturas fúngicas. Dos 17 isolados, apenas cinco foram viáveis após quase 30 anos mantidos em óleo mineral, apresentando características morfológicas e moleculares típicas do gênero, o sequenciamento utilizando os oligonucleotídeos Coi-F e Coi-R revelou identidade de 99% com isolados de Coccidioides. Estes cinco isolados foram preservados em nitrogênio líquido e água destilada esterilizada, e permaneceram viáveis após dois anos de armazenamento sob estas condições, mantendo as mesmas características.

Coccidioidomycosis is an emerging fungal disease in Brazil; adequate maintenance and authentication of Coccidioides isolates are essential for research into genetic diversity of the environmental organisms, as well as for understanding the human disease. Seventeen Coccidioides isolates maintained under mineral oil since 1975 in the Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) culture collection, Brazil, were evaluated with respect to their viability, morphological characteristics and genetic features in order to authenticate these fungal cultures. Only five isolates were viable after almost 30 years, showing typical morphological characteristics, and sequencing analysis using Coi-F and Coi-R primers revealed 99% identity with Coccidioides genera. These five isolates were then preserved in liquid nitrogen and sterile water, and remained viable after two years of storage under these conditions, maintaining the same features.

Cryptococcus neoformans is an encapsulated fungal organism that can cause disease in apparently immunocompetent, as well as immunocompromised, hosts. Since 1930, successive subculture has been used to preserve C. neoformans isolates in our Fungus Collection. In the 1970s, some of these Fungus Collection samples were selected to be subjected to a different methods of maintenance - that of lyophilized. Our objective was to analyze C. neoformans isolates in order to make a comparative evaluation between these two methods of preservation. The overall aim of this study was to qualify the preservation technique used in our mycology laboratory since the technique used might affect the survival, stability and purity of the primary isolates in culture. The samples were analyzed using classical mycology methods and using the randomly amplified polymorphic DNA technique In the analysis of phenotypes and genotypes, the typical characteristics of C. neoformans were found to differ in relation to the different methods of preservation employed. The aim of this study was to demonstrate the importance of selecting the appropriate method of preservation for fungus collections. This selection can affect the survival and purity of the cultures, and preserve the stability of their physiological, biochemical, and genetic characteristics.

Cromoblastomicose (CBM) é infecção subcutânea causada por vários fungos demáceos. O agente mais importante no Brasil é Fonsecaea pedrosoi, que se apresenta nas lesões como células de coloração acastanhada, com divisão transversal e longitudinal, originando as denominadas "células muriformes". Esta infecção apresenta caráter universal, mas países como Madagascar e Brasil apresentam alta incidência. O diagnóstico é realizado através dos exames clínico, direto e histopatológico, acompanhado de cultura e identificação do agente etiológico. Os testes sorológicos foram aplicados para identificar anticorpos específicos frente a antígenos de Fonsecaea pedrosoi e várias metodologias têm sido empregadas para identificação sorológica e o diagnóstico da CBM. Neste estudo, avaliamos reações de imunodifusão dupla (DID), contraimunoeletroforese (CIE) e teste imunoenzimático (ELISA) para avaliar a resposta imune humoral na CBM causada por F. pedrosoi. Utilizamos antígeno metabólico para DID e CIE e antígeno somático para ELISA. Nossos dados revelaram 53% e 68% de sensibilidade e 96% e 90,5% de especificidade, respectivamente. O teste de ELISA demonstrou 78% de sensibilidade e 83% de especificidade. Estes resultados indicam que as reações sorológicas podem ser uma ferramenta útil no auxílio diagnóstico desta infecção, quando a cultura do agente não for possível.

Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic subcutaneous infection caused by several dematiaceous fungi. The most commonly etiological agent found in Brazil is Fonsecaea pedrosoi, which appears as thick walled, brownish colored cells with transverse and longitudinal division in the lesions, called "muriform cells". This disease is found worldwide but countries like Madagascar and Brazil have highest incidence. Diagnosis is made by clinical, direct and histopathologic examination and culture of specimens. Serological tests have been used to identify specific antibodies against Fonsecaea pedrosoi antigens, as well as immunotechniques have been used for CBM serological identification and diagnosis. In the present study double immunodiffusion (DID), counterimmunoelectrophoresis (CIE) and immunoenzymatic test (ELISA) have been used to evaluate humoral immune response in patients with CBM caused by F. pedrosoi. Metabolic antigen was used for immunoprecipitation tests (DID and CIE) while somatic antigen for ELISA. Our results demonstrated 53% sensitivity and 96% specificity for DID, while CIE presented 68% sensitivity and 90.5% specificity. ELISA demonstrated 78% sensibility and 83% specificity. Serological tests can be a useful tool to study different aspects of CBM, such as helping differential diagnosis, when culture of the pathogenic agent is impossible.

O presente trabalho registra caso de histoplasmose em paciente de 5 anos, HIV negativo, natural e procedente da cidade de São Paulo, com lesões cutâneas não diagnosticadas clinicamente. Exame histopatológico negativo para infecção fúngica. Cultivos em duas ocasiões, positivos para Histoplasma capsulatum var. capsulatum (amostras 361 e 387). Sorologia negativa para anticorpos anti-Histoplasma capsulatum e Paracoccidioides brasiliensis pelas provas de Imunodifusão dupla e Contraimunoeletroforese. Ensaio imunoenzimático pesquisando o antígeno polissacarídico específico, negativo. A obtenção do exoantígeno de uma das amostras permitiu, através de provas de Imunodifusão, com soro de coelho anti-Histoplasma capsulatum var. capsulatum, detectar duas bandas de precipitação. Registre-se a negatividade da reação de Imunodifusão dupla do soro do paciente face ao exoantígeno produzido com a amostra dele isolada. Através da reação de Immunoblotting foi identificada uma fração com peso molecular de aproximadamente 94 kDa, além de outras. Os dois cultivos foram enviados ao Prof. Leo Kaufman, CDC, Atlanta, USA, o qual identificou as duas amostras como Histoplasma capsulatum var. capsulatum, através de provas de Imunodifusão dupla com os respectivos exoantígenos e sonda específica do fungo (DNA-probe). As colorações específicas para fungos, nos tecidos, foram negativas, incluindo prova de Imunoperoxidase para Histoplasma capsulatum var.capsulatum, a negatividade das provas sorológicas para histoplasmose clássica e o próprio aspecto clínico das lesões cutâneas eritêmato-violáceas infiltradas, mostram que o caso em apreço é realmente inusitado, correspondendo o cultivo a uma "variante aberrante" do Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Face ao diagnóstico micológico de histoplasmose clássica, o paciente foi tratado com itraconazol 100 mg/dia, durante três meses, com regressão total das lesões.

A case of atypical disseminated cutaneous histoplasmosis in a five-year old, otherwise healthy child, native and resident in São Paulo metropolitan area is reported. Cutaneous lesions were clinically atypical. Histologic examination disclosed a granulomatous reaction but no fungal structures could be demonstrated by specific staining nor by immunohistochemical reaction. The fungus was isolated from biopsy material on two different occasions, confirming diagnosis of an unusual fungal infection. The fungus, originally thought to be a Sepedonium sp. due to the large sized, hyaline or brownish colored tuberculated macroconidia and to lack of dimorphism (yeast form at 37 °C) produce H and M antigens, visualized by the immunodiffusion with rabbit anti-Histoplasma capsulatum hyperimmune serum. Patient’s serum sample was non reactive with H. capsulatum antigen by immunodiffusion, counterimmunoelectrophoresis and complement fixation tests, and immunoenzymatic assay failed to detect the specific circulating antigen. This serum was tested negative by double immunodiffusion when antigen obtained from one of the isolated samples was used. Both cultures were sent to Dr. Leo Kaufman, Ph.D. (Mycoses Immunodiagnostic Laboratory, CDC-Atlanta/USA), who identified them as H. capsulatum by the exoantigen and gen-probe tests. Both clinic and mycologic characteristics of the present case were atypical, suggesting the fungus isolated is an “aberrant variant” of H. capsulatum var. capsulatum, as described by SUTTON et al. in 199719. Treatment with itraconazole 100 mg/day led to cure within 90 days

Os Autores estudaram do ponto de vista micológico, imunoquímico e de sua biologia molecular, duas amostras de Paracoccidioides brasiliensis, uma isolada do solo, no município de IBIÁ (MG) por Silva-Vergara et al. (l996,1998)20,21 denominada IBIÁ e outra, BAT, cultivada de um caso humano de paracoccidioidomicose em Ribeirão Preto (SP) por Freitas da Silva (l996)6. Tais amostras apresentam colônias cotonosa (M) e leveduriforme (L ou Y), sendo patogênicas para cobaios inoculados por via testicular, produzindo orquite granulomatosa e/ou supurativa. Do ponto de vista imunoquímico, através de provas de Imunodifusão dupla, Imunoeletroforese e Western Blotting, foi demonstrada a presença da gp43. A sequência de nucleotídeos do DNA de tais amostras, através do seqüenciamento de 761 bases, revelou homologia de 100% com amostra padrão de P. brasiliensis, o mesmo ocorrendo com três amostras humanas, uma isolada de fezes de pinguim e outra de ração alimentar para cães contaminada com terra. São discutidos vários aspectos dos resultados obtidos, comparando-os com alguns dados da literatura.

The authors conducted a mycologic, immunochemical and molecular biology study on two strains of Paracoccidioides brasiliensis, one of them, called IBIÁ, isolated from soil in the municipality of IBIÁ (Minas Gerais) by Silva-Vergara et al. (l996,1998)20,21, and the other, BAT, cultivated from a human case of paracoccidioidomycosis in Ribeirão Preto (São Paulo/Brazil) by Freitas da Silva (l996)6. Both strains showed cotton-like (M) and yeast-like (Y) forms and were pathogenic for testicularly inoculated guinea pigs, producing granulomatous and/or suppurative orchitis. Immunochemically was demonstrated the presence of gp43 by double immunodiffusion, immunoelectrophoresis and immunoblotting.

Paracoccidioides cerebriformis Moore, 1935. Estudo micológico e imunoquímico O presente estudo trata dos resultados obtidos, do ponto de vista micológico e imunoquímico, de duas amostras de Paracoccidioides consideradas como pertencentes à espécie cerebriformis, criada por MOORE in 1935 e mantidas desde aquela época, através de repiques em ágar-Sabouraud, na Micoteca do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo. Após cerca de 60 anos, tais amostras conservavam as mesmas características descritas por MOORE (1935). Não foram registradas lesões experimentais em cobaios inoculados por via intratesticular, não se demonstrando, também, pelas técnicas de SDS PAGE e Western blotting, o antígeno dominante do Paracoccidioides brasiliensis, representado pela glicoproteína de 43 kDa (gp43). A imunoeletroforese também não revelou o arco E de migração catódica, utilizando-se um soro policlonal anti-gp43. Em vista desses resultados, concluímos que Paracoccidioides cerebriformis não pertence àquele gênero, devendo-se considerar a paracoccidioidomicose como infecção fúngica causada por uma única espécie de Paracoccidioides - Paracoccidioides brasiliensis (SPLENDORE, 1912) Almeida, 1930. No futuro, através de métodos de biologia molecular, talvez possamos identificar este fungo

The present study concern on mycologic and immunochemical data obtained from two samples of a fungus considered as belonging to the species Paracoccidioides cerebriformis described by Moore in 1935, and maintained since then on Sabouraud’s agar in the mycology collection of the Instituto de Medicina Tropical de São Paulo. After 60 years, the samples exhibited the same characteristics described by Moore (1935). However, experimental lesions did not resulted in guinea-pigs inoculated intratesticularly. The dominant antigen in Paracoccidioides brasiliensis, 43 kDa glicoprotein (gp43), could not be demonstrated by SDS PAGE and Western blotting. Immunoelectrophoresis did not demonstrated the E arch of cathodic migration using a policlonal anti gp43 serum. According to these findings, it is concluded that the fungus described by Moore (1935) as P. cerebriformis does not belong to the genus Paracoccidioides. Paracoccidioidomycosis should therefore be considered as resulting from infection by a single species, Paracoccidioides brasiliensis (Splendore, 1912) as asserted by Almeida (1930). Further studies, through molecular biology methods, could identify the mentioned fungus

Através de várias provas imunoquímicas foi demonstrada a presença da GP-43 em extratos de lesões cutâneas da doença de Jorge Lobo. A glicoproteína de 43 kDa é um dos antígenos dominantes do Paracoccidioides brasiliensis, permitindo a identificação desta espécie fúngica. A demonstração da GP-43 em tecidos infectados com o agente da doença de Jorge Lobo, constitui mais um argumento para colocá-lo no gênero Paracoccidioides, espécie loboi

We demonstrated through several immunochemical tests the presence of GP-43 from P. brasiliensis in extracts of cutaneous lesions from Jorge Lobo's disease. This glicoprotein is one of the immunodominant antigens in this species, and is used to identify it. The demonstration of GP-43 tissues infected by the agent of Jorge Lobo's disease is an additional evidence for classifying it in the genera Paracoccidioides, species loboi

Amostra de Paracoccidioides brasiliensis isolada de vísceras (baço e fígado) de um tatu (Dasipus novencinctus) foi estudada do ponto de vista micológico e imunoquímico. O tatu havia sido capturado em área da usina hidroelétrica de Tucuruí (Estado do Pará). Este já havia sido considerado como reservatório enzoótico do Paracoccidioides brasiliensis naquela região. Esta amostra, conservada na Micoteca do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo sob o número 135, apresenta todas as características de Paracoccidioides brasiliensis, com elevado poder antigênico e baixa virulência para cobaios e ratos Wistar. A demonstração do exo-antígeno específico do P. brasiliensis, representado pela glicoproteína de peso molecular 43 kDa, foi evidente através das técnicas de Imunodifusão Dupla, Imunoeletroforese, SDS-PAGE e Imunoblotting.

A sample of P. brasiliensis isolated from the spleen and the liver of an armadillo (Dasipus novencinctus) has been analysed under a mycological and immunochemical viewpoint. The armadillo was captured in an area of Tucuruí (State of Pará, Brazil), the animal being already established as an enzootic reservoir of P. brasiliensis at that region of the country. This sample maintained in the fungal collection of the Tropical Medicine Institute of São Paulo (Brazil) numbered 135, has got all the characteristics of P. brasiliensis, with a strong antigenic power and low virulence for guinea-pigs and Wistar rats. The specific exoantigen of P. brasiliensis - the glycoprotein with a molecular weight of 43 kDa - was easily demonstrated with double immunodiffusion, immunoelectrophoresis, SDS-PAGE and immunobloting techniques.