RESUMO O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

ABSTRACT The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

RESUMO: O hábito de pastejo praticado pelos bovinos pode ser positiva ou negativamente influenciado pela estrutura da pastagem onde esse animal está inserido. Vários são os fatores que determinam a estrutura da pastagem, e a presença de plantas daninhas pode ser considerada um dos principais. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de espécies com e sem estruturas contundentes sobre o comportamento de pastejo de bovinos em áreas de pastagens. O experimento foi conduzido em faixa no delineamento de blocos completos casualizados com quatro repetições, onde os tratamentos foram dispostos em faixas 4 x 3: quatro espécies de plantas daninhas (Zanthoxylum rhoifolium, Cnidoscolus urens, Dasyphyllum brasiliensis e Luehea divaricata) associados a três faixas de proximidade das plantas daninhas: 0-50, 50-100 e 100-150 cm de distância em relação ao caule principal da planta daninha estudada. O consumo de forragem pelos animais foi mensurado determinando-se a oferta real de forragem aos 0, 3, 6, 9 e 15 dias após o início de pastejo animal (DAP). A presença de arbustos nocivos influencia o comportamento de pastejo de bovinos. A influência no consumo é mais evidente quando existem plantas que promovem desconforto animal. Z. rhoifolium, C. urens e D. brasiliensis e foram as daninhas de maior influência negativa sobre o acesso ao alimento entre as espécies que possuem unidades contundentes. A influência negativa no pastejo é maior na faixa mais próxima à planta, ou seja, 0-50 cm de distância do caule principal da daninha.

ABSTRACT: The grazing behavior practice by bovines can be positive or negatively influenced by the pasture structure where the animal is inserted. Several factors determine the pasture structure and the presence of weeds is considered one of the most important. This study aimed to assess the effect of species with and without stiff structures over the grazing behavior of bovines in pasture areas. The experimental design was a split block design with four replications, in which treatments were arranged in a 4 x 3 factorial design: four weed species (Zanthoxylum rhoifolium, Cnidoscolus urens, Dasyphyllum brasiliensis, and Luehea divaricata) associated with three proximity strips of weeds: 0-50, 50-100, and 100-150 cm in relation to the main stem of the studied weed. Forage intake by animals was measured by determining the real forage offers at 0, 3, 6, 9, and 15 days after the beginning of animal grazing (DAP). The presence of noxious shrubs influenced bovine grazing behavior. The influence on the intake is most evident in the presence of plants that promote animal discomfort. The species Z. rhoifolium, C. urens, and D. brasiliensis were the weeds with the greatest influence on feed access among the species that have stiff structures. The negative influence on grazing behavior is higher in the proximity strip closest to the plant, i.e. 0-50 cm from the main stem of the weed.

Avaliou-se o efeito da adição de diferentes tipos e concentrações de soro sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos in vitro. Além disso, verificou-se a relação entre as concentrações de nitrito presentes no meio de cultivo e a viabilidade folicular. Cada par ovariano foi dividido em 29 fragmentos, sendo um destinado ao controle. Os fragmentos foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo suplementado (MEM+) ou MEM+ com diferentes concentrações (10 ou 20%) de soro fetal bovino (SFB), soro de cabra em estro (SCE) ou soro de cabra em diestro (SCD). Na análise morfológica após sete dias, apenas o tratamento com 10% de SFB apresentou percentual de FOPA normais similar ao MEM+ (P>0,05). A análise ultra-estrutural dos folículos cultivados por sete dias com MEM+ ou MEM+ com 10% de SFB mostrou danos oocitários, porém células da granulosa normais. A análise do meio de cultivo revelou correlação positiva entre a viabilidade folicular e a produção de nitrito. A suplementação com soro não melhorou a viabilidade de FOPA e a concentração de nitrito no meio de cultivo funcionou como um indicador da viabilidade das células da granulosa de FOPA caprinos cultivados in vitro.

The effect of the addition of different types and concentrations of sera on the viability and development of caprine preantal follicles (PAF) in vitro cultured was analyzed. In addition, it was evaluated the correlation between nitrite concentrations in culture medium and folicular viability. Each ovarian pair was divided in 29 fragments and one was used as control. The fragments were cultured for one or seven days in minimal essential medium (MEM+) or MEM+ with different concentrations of (10 or 20%) bovine fetal serum (BFS), estrous goat serum (EGS), or diestrous goat serum (DGS). After seven days, the morphological analysis showed that only the treatment with 10% BFS maintained the percentage of normal PAF similar to MEM+ (P>0.05). The ultrastructural analysis of follicles cultured for seven days in MEM+ or MEM+ with 10% BFS showed some oocyte damage, although the granulosa cells were normal. Analysis of culture medium revealed a positive correlation between follicular viability and nitrite production. Supplementation with serum did not improve the viability of PAF and nitrite levels in culture medium served as an indicator of viability of granulose cells from caprine PAF in vitro cultured.