RESUMO: A leishmaniose é um grande problema de saúde pública que afeta tanto humanos quanto animais. A doença é causada pelo protozoário Leishmania spp., que possui um ciclo complexo envolvendo um vetor flebotomíneo. O teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), juntamente com um imunoensaio cromatográfico, foi definido pelo Ministério da Saúde do Brasil como protocolo de triagem confirmatória em 2011. A cidade de Uruguaiana fica a 630 km de Porto Alegre, o que dificulta o envio de amostras e o diagnóstico da leishmaniose, além da demora para obter os resultados. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar um método de ELISA indireto in-house comparado ao ensaio de imunofluorescência indireta (IFA) e imunoensaio cromatográfico de plataforma de dupla via (DPP-BioManguinhos®) para a detecção de uma resposta imune contra Leishmania spp. na espécie canina. A avaliação sorológica incluiu 48 caninos da fronteira oeste do Brasil (cidade de Uruguaiana e Barra do Quaraí). Das 48 amostras caninas testadas, 18 foram positivas na técnica de ELISA, 19 foram positivas com IFA e 17 foram positivas com o teste rápido DPP®. A técnica de ELISA apresentou sensibilidade/especificidade de 83,3%/86,7% quando comparada ao IFA e 100%/96,8% em relação ao DPP®. O presente estudo apresentou prevalência de 37,5%, demonstrando que a infecção circula na população estudada. Pode-se concluir que a técnica de ELISA foi valiosa para uso em condições de campo na realização de testes de triagem em áreas endêmicas.

ABSTRACT: Leishmaniosis is a great public health problem affecting both humans and animals. The disease is caused by the protozoan Leishmania spp., which has a complex cycle involving a phlebotomine vector. The ELISA test (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) along with a chromatographic immunoassay was defined by the Brazil Health Ministry as the confirmatory screening protocol in 2011. Uruguaiana city is 630 km away from Porto Alegre, which makes it difficult to send samples and diagnose leishmaniasis, as well as receive quick results. In view of this, the present study evaluated an in-house indirect ELISA method compared to indirect immunofluorescence assay (IFA) and dual-path platform chromatographic immunoassay (DPP-BioManguinhos®) for the detection of an immune response to Leishmania spp. in canine species. The serological evaluation included 48 canines from the western border of Brazil (Uruguaiana and Barra do Quaraí city). Among the 48 canine samples tested, 18 were positive when using the ELISA technique, 19 were positive with IFA, and 17 were positive with rapid test DPP®. The ELISA technique showed a sensitivity/specificity of 83.3%/86.7% when compared to IFA and 100%/96.8% compared to DPP®. The present study showed a prevalence of 37.5%, demonstrating that the infection circulates in the studied population. It can be concluded that the ELISA technique was valuable for use in field conditions when performing screening tests in endemic areas.

Resumo O objetivo deste trabalho foi caracterizar espécies de Leishmania em amostras de caninos e felinos, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase (PCR)- polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP). O estudo foi realizado na região de fronteira no sul do Brasil, divisa com Argentina e Uruguai. Amostras foram coletadas de 116 cães (Canis lupus familiaris) e 89 gatos (Felis catus). A PCR foi realizada com o gene alvo do fragmento LT1 do DNA do cinetoplasto (kDNA) para triagem e, as amostras positivas foram submetidas a uma segunda PCR com alvo ITS1 no DNA ribossomal (rDNA). O RFLP foi realizado com a endonuclease de restrição Haemophilus aegyptius (HAE III) (Fermentas ®). As sequências positivas no PCR-ITS1 foram depositadas no NCBI GenBank, além disso, a análise filogenética foi realizada. Foram detectadas 12,9% (15/116) amostras positivas em cães. Das 89 amostras de gatos todas foram negativas. Cepas de referência de Leishmania, com padrões diferentes na PCR-RFLP, e amostras positivas apresentaram similaridade das bandas com as espécies padrão de Leishmania infantum, o que foi comprovado no sequenciamento e análise filogenética. A técnica de RFLP, sozinha, demonstrou viabilidade para a aplicação prática e a confirmação das espécies de Leishmania spp. envolvidas.

Abstract The aim of this study was to characterize Leishmania spp. from canine and feline samples using Polymerase Chain Reaction (PCR)- Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). It was conducted in the southern region of Brazil, located at border crossings to Argentina and Uruguay. Samples were collected from 116 dogs (Canis lupus familiaris) and 89 cats (Felis catus). The PCR was performed to screen for an LT1 fragment from kinetoplast DNA (kDNA) target gene, and positive samples were subjected to a second PCR for an internal transcribed spacers (ITS1) region from ribosomal DNA (rDNA) target. RFLP was performed using the Haemophilus aegyptius (HAE III) restriction endonuclease (Fermentas ®). Positive samples by PCR ITS1 were sequenced and deposited in NCBI GenBank, and a phylogenetic analysis was developed. We found that 12.9% (15/116) of the samples from dogs were positive. All the 89 cat samples were negative. Positive samples were tested against Leishmania reference strains presenting different patterns in PCR-RFLP, and these samples showed bands denoting similarity to the standard species of Leishmania infantum, proven through sequencing and phylogenetic analysis. The RFLP technique, alone, was shown to be feasible for practical application and confirmation of the involved Leishmania spp.

O espinilho (Acacia caven (Mol.) Mol.) é uma planta nativa do sudoeste do Rio Grande do Sul, Brasil, e não existe metodologia eficiente para a análise de sementes da espécie. Desta forma o objetivo do trabalho foi avaliar tratamentos para a superação da dormência das sementes e temperaturas para a condução do teste de germinação de A. caven. Foram utilizados cinco tratamentos na superação da dormência: testemunha (T1); imersão das sementes em água a 40 ºC por 24 h (T2); imersão das sementes em hipoclorito de sódio a 0,5% por 24 h (T3); escarificação mecânica com lixa de água nº. 80 (T4) e corte na região oposta à micrópila (T5). Para a germinação utilizaram-se as temperaturas constantes de 20 ºC, 25 ºC e 30 ºC, fotoperíodo de 12 h, em substrato de papel (SP). O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com quatro repetições de 50 sementes. Os dados expressos em porcentagem foram transformados em arcsen <img border=0 src="../../../../../img/revistas/rbs/v32n2/a06car01.gif" align=absmiddle>e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Os tratamentos mais eficientes para superação da dormência foram o T4 e T5. A maior porcentagem de germinação foi obtida a 30 ºC. O teste de germinação pode ser finalizado com 7 dias e a primeira contagem da germinação no 5º dia.

Acacia caven (Mol.) Mol. is a native species from southwest Rio Grande do Sul state, Brazil, and there is no effective methodology for analyzing its seeds. The objective of this study was to evaluate treatments for overcoming dormancy and temperatures for carrying out germination tests for A. cavens seed. Five treatments were used to overcome dormancy: control (T1); immersion of seeds in water at 40 ºC for 24 h (T2); immersion of seeds in 0.5% sodium hypochlorite for 24 h (T3); mechanical scarification with water sandpaper nº. 80 (T4) and incision in the region opposite to the micropyle (T5). The germination tests were carried out at constant temperatures of 20 ºC, 25 ºC and 30 ºC, under artificial light, on a paper substrate. The experimental design was completely randomized with four replications of 50 seeds. The data as percentages were transformed into arcsine <img border=0 src="../../../../../img/revistas/rbs/v32n2/a06car01.gif" align=absmiddle>and the means compared by Tukey's test at the 5% probability level. The most efficient treatments for overcoming dormancy were the T4 and the T5. The highest germination was obtained under a constant temperature of 30 ºC. The germination test can be finalized after seven days and first count on the fifth day.