RESUMO: Erwinia psidii é o agente causal da seca dos ponteiros da goiabeira ( Psidium guajava ), uma importante doença dessa cultura no Brasil. O patógeno afeta folhas, frutos, ramos e brotações, reduzindo significativamente a produtividade da cultura. A disseminação do patógeno ocorre por meio de material propagativo contaminado, porém assintomático. Os objetivos do trabalho foram avaliar o uso da BIO-PCR e da PCR convencional para detectar E. psidii em plantas inoculadas em casa de vegetação e em plantas sintomáticas e assintomáticas em pomares de goiabeira. A estirpe IBSBF 1576 de E. psidii foi inoculada (107UFC mL-1) em brotações novas de mudas de goiabeira e o tecido foi analisado nos tempos 0, 5, 10, e 15 dias após a inoculação. Sintomas foram observados após 5 dias e todas as plantas inoculadas foram positivas por PCR em todos os tempos avaliados, pelos dois métodos (BIO-PCR e PCR convencional). Sob condições de infecção natural em campo, três pomares foram avaliados por BIO-PCR. De cada pomar, foram coletadas 40 amostras, sendo 20 com e 20 sem sintomas. PCR foi positiva para 58 das 60 amostras sintomáticas (96,7%) e para 6,7% das amostras assintomáticas, demonstrando que o método pode ser usado para detectar o patógeno nos estágios iniciais da infecção. Este método poderá ser útil como uma ferramenta para a diagnose e para monitorar a sobrevivência e disseminação da bactéria e, consequentemente, novos focos da doença.

ABSTRACT: Erwinia psidii causes bacterial blight of guava ( Psidium guajava ), an important disease of this crop in Brazil. The pathogen affects branches and twigs of guava trees, reducing yield significantly. Bacterial dissemination often occurs through contaminated but asymptomatic propagating plant material. The objectives of this research were to evaluate the use of BIO-PCR and conventional PCR to detect E. psidii in inoculated guava plants grown in a greenhouse and in symptomatic and asymptomatic trees from guava orchards. Erwinia psidii strain IBSBF 1576 was inoculated (107CFU mL-1) into young guava shoots and plant tissue was analysed at 0, 5, 10, and 15 days after inoculation. Symptoms were observed after 5 days and all inoculated shoots were PCR positive at all times, by both BIO-PCR and conventional PCR. Under natural infection conditions, 40 samples were tested by BIO-PCR from each of three guava orchards, 20 showing symptoms and 20 asymptomatic. PCR was positive for 58 out of 60 symptomatic samples (96.7%) and for 6.7% of asymptomatic samples, showing that the method can be used to detect the pathogen at early stages of infection. This PCR method may be used as a diagnostic tool to assess bacterial survival, dissemination and disease outbreaks.

RESUMO Foram comparados dois sistemas de produção cultural (orgânico = OR; convencional = CO) e seus efeitos no controle da seca dos ponteiros (Erwinia psidii) da goiabeira (Psidium guajava). O delineamento experimental foi o de blocos casualizados, em arranjo de parcelas subsubdivididas, onde foram mensuradas a bacteriose e a produção de frutos nas safras de 2005/2006, 2006/207 e 2007/2008. Nas safras, foram avaliados os efeitos das quatro épocas de poda (setembro, dezembro, março e junho) em ambos os sistemas de produção. Tais sistemas constituíram-se de: OR - tratamentos com composto bioativo (CB), CB líquido e cobertura morta; e CO - adubação química, fungicida e herbicida. Em 2007/2008, a Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença (AACPD) de todos os tratamentos no sistema OR foi menor (~54-107) que em CO (~233-298). Na safra de 2007/2008 o número de frutos por planta para todos os tratamentos em OR foi maior (~146-204) do que aqueles em CO (~57-103). Em todas as safras, considerando todos os tratamentos dentro de cada sistema, houve significativamente menor AACPD (~93-184) e maior produção de frutos (~158-188) em OR do que em CO (AACPD: ~208-476; frutos: ~81-104). Poda induziu maior AACPD e menor produção de frutos em ambos os sistemas de produção.

ABSTRACT In this work, two cultural production systems were compared [conventional (CO) and organic (OR)], and its effects in the guava trees (Psidium guajava) bacterial blight (Erwinia psidii) control. The experimental design was in radomized blocks, in split-split-plot arrangement, where it was measured the bacterial disease and the fruits production on the 2005/06, 2006/07 and 2007/08 harvests. Four pruning seasons effects were evaluated on the harvests (September, December, March and June) in both production systems. Such systems were constituted of: OR – treatment with bioactive compound (BC), liquid BC and dead coverage, and; CO – chemical fertilization, fungicide and herbicide. In 2007/08, the area under the disease progress curve (AUDPC) of all the treatments in the OR system was lower (~54-107) than the CO one(~233-298). In the 2007/08 harvest the number of fruits for each plant for all the OR treatments was higher (~146-204) than the CO ones (~57-103). In all the harvests, considering all the treatments within each system, there was a significantly lower AUDPC (~93-184) and higher fruits production (~158-188) in the OR one than the CO one (AUDPC: ~208-476; fruits ~18-104). The pruning induced a higher AUDPC and lower fruits production in both production sytems.

Com o objetivo de desenvolver um método molecular para detecção e identificação de Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv), agente causal do cancro bacteriano da videira, oligonucleotídeos (primers) foram desenhados com base na seqüência parcial do gene hrpB. As combinações de primers Xcv1F/Xcv3R e RST2/Xcv3R que amplificaram fragmentos de 243 e 340 pb, respectivamente, foram testadas quanto à especificidade e sensibilidade para detecção do DNA de Xcv. Com os dois pares de primers, amplificação foi positiva com o DNA de 44 isolados de Xcv, mas também com quatro isolados de X.c. pv. mangiferaeindicae e cinco de X. axonopodis pv. passiflorae. Contudo, a digestão dos produtos de PCR permitiu diferenciar Xcv dos isolados desses patovares. Nenhum dos dois pares de primers amplificou o DNA de videira, nem de 20 bactérias não patogênicas isoladas da flora da videira, ou de 10 isolados de outros seis gêneros de bactérias fitopatogênicas. A sensibilidade dos primers Xcv1F/Xcv3R e RST2/Xcv3R foi de 10 pg e 1 pg de DNA purificado de Xcv, respectivamente. O limite de detecção de RST2/Xcv3R foi de 10(4) UFC/ml, mas empregando-se uma segunda rodada de amplificação com o primer interno Xcv1F, esse limite foi de 10² UFC/ml. Não foi possível detectar por PCR a presença de Xcv usando-se, diretamente na reação, o extrato do macerado de pecíolos de videira previamente inoculados. Entretanto, amplificações foram positivas quando se utilizou uma etapa de enriquecimento em meio de cultura antes da PCR. Detectou-se Xcv em 1 µl da suspensão obtida do lavado das placas e em uma suspensão obtida a partir de uma única colônia. A identidade da bactéria foi confirmada pela análise de RFLP dos produtos de amplificação dos primers RST2/Xcv3R com HaeIII.

In order to develop a molecular method for detection and identification of Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) the causal agent of grapevine bacterial canker, primers were designed based on the partial sequence of the hrpB gene. Primer pairs Xcv1F/Xcv3R and RST2/Xcv3R, which amplified 243- and 340-bp fragments, respectively, were tested for specificity and sensitivity in detecting DNA from Xcv. Amplification was positive with DNA from 44 Xcv strains and with DNA from four strains of X. campestris pv. mangiferaeindicae and five strains of X. axonopodis pv. passiflorae, with both primer pairs. However, the enzymatic digestion of PCR products could differentiate Xcv strains from the others. None of the primer pairs amplified DNA from grapevine, from 20 strains of nonpathogenic bacteria from grape leaves and 10 strains from six representative genera of plant pathogenic bacteria. Sensitivity of primers Xcv1F/Xcv3R and RST2/Xcv3R was 10 pg and 1 pg of purified Xcv DNA, respectively. Detection limit of primers RST2/Xcv3R was 10(4) CFU/ml, but this limit could be lowered to 10² CFU/ml with a second round of amplification using the internal primer Xcv1F. Presence of Xcv in tissues of grapevine petioles previously inoculated with Xcv could not be detected by PCR using macerated extract added directly in the reaction. However, amplification was positive with the introduction of an agar plating step prior to PCR. Xcv could be detected in 1 µl of the plate wash and from a cell suspension obtained from a single colony. Bacterium identity was confirmed by RFLP analysis of the RST2/Xcv3R amplification products digested with Hae III.

Um dos fatores limitantes ao cultivo da goiabeira no Brasil é a 'seca dos ponteiros', causada por Erwinia psidii, presente nas regiões Sudeste e Centro-Oeste, onde se concentram grandes áreas produtoras. Considerando a pequena disponibilidade de informações sobre a epidemiologia e níveis de incidência dessa bacteriose, este estudo teve como objetivos: confirmar a distribuição e verificar a dispersão da seca dos ponteiros da goiabeira no Distrito Federal; investigar o efeito da temperatura sobre a multiplicação in vitro de E. psidii; desenvolver um teste de patogenicidade prático e eficiente e avaliar a sobrevivência in vitro da bactéria em diferentes substratos. A doença foi identificada em 56% das propriedades produtoras avaliadas no DF, com 81,9% de correlação entre a presença de sintomas e o diagnóstico laboratorial. A melhor faixa de temperatura para multiplicação de E. psidii foi de 24 a 33 ºC, e a bactéria permaneceu viável por até 120 dias em suspensão em água. A inoculação da bactéria em folhas ou hastes destacadas levou ao aparecimento de sintomas a partir do sétimo dia e mostrou-se eficiente como um teste rápido para se avaliar a patogenicidade de isolados.

A major disease that affects guava is 'bacterial blight', caused by Erwinia psidii, which has been reported in Southeastern and Central Regions of Brazil where the major producing areas are located. Considering the lack of information on epidemiology and incidence levels of this disease, the objectives of this study were to confirm the presence and to verify the spread of the disease in Distrito Federal (DF); to determine optimal temperature for in vitro multiplication of E. psidii; to develop a simple and effective method for pathogenicity testing and to evaluate in vitro bacterial survival on different substrates. The disease was detected in 56% of producing orchards evaluated in DF, with a correlation of 81, 9% between presence of symptoms and positive laboratorial diagnosis. The best temperature range for E. psidii growth was from 24 to 33 ºC, and the best method for short term preservation (up to 120 days) was in water suspension. Inoculation of the pathogen on detached leaves or stems allowed symptom development in seven days and it was shown to be a quick and suitable method for testing isolate pathogenicity.