Resumo Este trabalho teve como objetivo identificar espécies do complexo Astyanax bimaculatus de quatro afluentes do reservatório de Itaipu (bacia do Rio Paraná) por métodos citogenéticos e moleculares (COI), investigando a possibilidade de ocorrência de diversidade críptica em parte desta bacia. As quatro populações apresentaram apenas uma fórmula cariotípica e AgNORs simples. A FISH com rDNA 18S apresentou alto grau de variação e as sondas de rDNA 5S evidenciaram sítios simples na maioria dos exemplares, embora sítios múltiplos tenham sido evidenciados em dois espécimes. As variações dos cistrons 5S e 18S geraram 13 citótipos. Os dados moleculares não revelaram diversidade críptica nas populações, entretanto, seu agrupamento com 82 sequências de outros trechos da mesma bacia formou três haplogrupos (distâncias de 3,12% e 8,82%) e gerou 33 haplótipos. O DNA Barcode sugere que as variações citogenéticas representam um alto grau de polimorfismo e identificou os espécimes analisados como Astyanax lacustris, confirmando a identificação por caracteres morfológicos. Nossos dados sugerem que a diversidade críptica do grupo nos afluentes da bacia do Rio Paraná é diferente do proposto pelas sinonimizações de A. altiparanae e A. asuncionensis para A. lacustris, reforçando a importância da integração de métodos citogenéticos e moleculares para a taxonomia.

Abstract This study aimed to identify species of Astyanax bimaculatus group from four Itaipu Reservoir tributaries (Paraná River Basin) by cytogenetics and molecular markers (COI) to investigate the possible occurrence of cryptic diversity in part of this basin. The four populations showed only one karyotype formula and simple AgNORs. FISH with 18S rDNA probe showed a high variation, and 5S rDNA probes evidenced simple sites in most of the specimens, although multiple sites are present in two specimens. The variations of 5S and 18S cistrons generated 13 cytotypes. The molecular data did not reveal cryptic diversity in the populations; however, its grouping with 82 sequences from other stretches of the Paraná River Basin originated three haplogroups (distances of 3.12% and 8.82%) and 33 haplotypes were identified. DNA Barcode suggests that cytogenetic variations represent a high polymorphism degree, and it identified the analyzed specimens as Astyanax lacustris, which confirms the morphological identification. Our data suggest that the cryptic diversity of this group in the tributaries of the Paraná River Basin is different than the proposed by the synonymizations of A. altiparanae and A. asuncionensis to A. lacustris. This study reinforces the importance of integrative cytogenetics and molecular methods for taxonomy.

RESUMO Os elementos transponíveis (TE) têm sido amplamente aplicados como marcadores cromossômicos. Contudo, em Loricariidae, há poucas análises de mapeamento físico destes elementos. Considerando a importância de elementos transponíveis para a evolução cromossômica e organização genômica, este trabalho realizou o mapeamento físico cromossômico dos retroelementos (RTEs) Rex1, Rex3 e Rex6 em sete espécies do gênero Harttia e em quatro espécies do gênero Hypostomus, com o intuito de melhor compreender a organização e dinâmica dos genomas das espécies de Loricariidae. Os resultados evidenciaram um intenso acúmulo dos RTEs Rex1, Rex3 e Rex6 e distribuição dispersa em regiões heterocromáticas e eucromáticas no genoma das espécies estudadas. A presença de retroelementos em algumas regiões cromossômicas sugere sua participação em vários rearranjos cromossômicos. Além disso, o intenso acúmulo dos três retroelementos em todas as espécies de Harttia e Hypostomus, especialmente em regiões eucromáticas, pode indicar a participação destes elementos na diversificação e evolução destas espécies através da domesticação molecular pelo genoma dos hospedeiros, com estas sequências sendo co-optadas paras novas funções.

ABSTRACT The transposable elements (TE) have been widely applied as physical chromosome markers. However, in Loricariidae there are few physical mapping analyses of these elements. Considering the importance of transposable elements for chromosomal evolution and genome organization, this study conducted the physical chromosome mapping of retroelements (RTEs) Rex1, Rex3 and Rex6 in seven species of the genus Harttia and four species of the genus Hypostomus, aiming to better understand the organization and dynamics of genomes of Loricariidae species. The results showed an intense accumulation of RTEs Rex1, Rex3 and Rex6 and dispersed distribution in heterochromatic and euchromatic regions in the genomes of the species studied here. The presence of retroelements in some chromosomal regions suggests their participation in various chromosomal rearrangements. In addition, the intense accumulation of three retroelements in all species of Harttia and Hypostomus, especially in euchromatic regions, can indicate the participation of these elements in the diversification and evolution of these species through the molecular domestication by genomes of hosts, with these sequences being a co-option for new functions.

Resumo O rio Iguaçu é um afluente da margem esquerda do rio Paraná, que foi separado desta bacia a aproximadamente 22 milhões de anos com o surgimento das Cataratas do Iguaçu. Esse rio é caracterizado por elevado endemismo, o que se deve a dois fatores: sua acidentada topografia e ao antigo isolamento proporcionado pela formação das cataratas. No presente trabalho foi analisado cromossomicamente uma população de Glanidium ribeiroi coletada em uma região que corresponde ao trecho final desse rio, através de coloração com Giemsa, bandamento-C, impregnação pelo nitrato de prata e FISH com sondas de rDNA 5S, rDNA 18S, sequência telomérica [TTAGGG]n e repetições [GATA]n. O número diploide encontrado foi igual a 58 cromossomos. A heterocromatina se mostrou dispersa na região terminal de quase todos os cromossomos. As Ag-RONs são simples e presentes no braço curto em posição intersticial do par submetacêntrico 14, o que foi confirmado pela FISH com rDNA 18S. O rDNA 5S marcou apenas o par submetacêntrico 16 no braço longo em posição intersticial. A hibridização com sonda [TTAGGG]n revelou todos os telômeros marcados conforme esperado e ausência de Sequência Telomérica Intersticial (ITS). As repetições [GATA]n se apresentaram dispersas no genoma da espécie, com preferencial localização na região terminal de todos os cromossomos. Os dados aqui obtidos são discutidos com os de outras espécies de Auchenipteridae, especialmente de G. ribeiroi anteriormente analisados do rio Iguaçu. Diferenças populacionais são constatadas em decorrência do isolamento geográfico ocasionado pelas inúmeras cachoeiras existentes no curso do rio Iguaçu.

Abstract The Iguazu river is a tributary of the left margin of the Paraná river, isolated from this basin about 22 million years ago with the appearance of the Iguazu Falls. The Iguazu river is characterized by high endemism due to two factors: its rugged topography and the old isolation caused by formation of the Iguazu Falls. This study analyzed cytogenetically a population of Glanidium ribeiroi collected in a region at the final stretch of this basin, by Giemsa staining, C-banding, impregnation by silver nitrate, and FISH with probes of 5S rDNA, 18S rDNA, telomeric sequence [TTAGGG]n, and [GATA]n repeats. The diploid number was equal to 58 chromosomes. The heterochromatin was present in the terminal region of almost all chromosomes. The Ag-NORs were simple and presented interstitially on the short arm of the submetacentric pair 14, which was confirmed by FISH with 18S rDNA probe. The 5S rDNA-FISH marked only the submetacentric pair 16 on the long arm in interstitial position. The FISH with [TTAGGG]n probe presented all telomeres labeled as expected, with an absence of Interstitial Telomeric Sequence (ITS). The repetitive [GATA]n sequence was dispersed throughout the genome, with preferential location in the terminal region of all chromosomes. The data obtained are discussed herein with other species of Auchenipteridae, and other previously analyzed populations of G. ribeiroi from the Iguazu river, verifying differences among these populations, which should be mainly related to the rugged topography of this basin.