Resumo Introdução: Crianças com sobrepeso/obesidade podem ter menores escores de coordenação motora, comparadas às eutróficas. Objetivo: Comparar a coordenação motora grossa entre escolares com sobrepeso/obesidade e eutróficos e analisar os fatores associados aos escores de coordenação motora. Método: Este estudo transversal incluiu crianças de 6-9 anos, de ambos os sexos. Foram excluídas crianças com malformações congênitas, deformidades osteomioarticulares, distúrbios neurológicos ou IMC < -2 escore-z. Avaliou-se a coordenação motora grossa pelos testes Körperkoordinations test für Kinder (KTK). Fatores associados aos escores de coordenação motora foram analisados por regressão linear. Resultado: As médias dos escores na marcha para trás (84,2 ± 13,2 vs. 91,0 ± 15,0), saltos monopedais (127,9 ± 10,1 vs. 132,3 ± 12,1), transferência em plataformas (123,5 ± 23,4 vs. 129,8 ± 14,9) e o escore global dos testes (112,5 ± 14,8 vs. 118,8 ± 11,6) foram significantemente menores (p < 0,05) em crianças com sobrepeso/obesidade, comparadas às eutróficas. A porcentagem de alunos com escore motor deficiente (< 85) foi maior no sobrepeso/obesidade na marcha para trás (60,4% vs. 36,4%, p = 0,004) e semelhantes nos saltos laterais (18,8% vs. 9,9%, p = 0,116) e transferência lateral (6,3% vs. 0,8%, p = 0,070). Na análise de regressão linear múltipla, as variáveis sobrepeso/obesidade e prática de esporte < 2 vezes/semana reduziram significantemente (p < 0,05) o escore motor global em 18,7 e 15,6 pontos, respectivamente. Conclusões: Crianças com sobrepeso/obesidade apresentaram menores escores de coordenação motora que as eutróficas. Sobrepeso/obesidade e baixa frequência de atividade física se associaram a menores escores de coordenação motora grossa.

Abstract Introduction: Overweight and obese children may have lower motor coordination score than normal-weight children. Objective: To compare gross motor coordination between overweight/obese and normal-weight children and investigate the associated factors with the motor coordination scores. Method: This cross-sectional study involved 169 children of both genders, aged 6-9 years. Children with malformations, bone, muscle, and joint or neurological disorders, and BMI z < -2 were excluded. Gross motor coordination was assessed by the “Körperkoordinationstest für Kinder” (KTK). The associated factors with the motor coordination scores were analyzed by linear regression. Results: The mean scores for balancing backwards (84.2 ± 13.2 vs. 91.0 ± 15.0), hopping over on one foot (127.9 ± 10.1 vs. 132.3 ± 12.1), shifting platforms sidewise (123.5 ± 23.4 vs. 129.8 ± 14.9), as well as the overall motor scores (112.5 ± 14.8 vs. 118.8 ± 11.6) were significantly lower (p < 0.05) in overweight/obese children when compared to normal-weight children. The percentage of poor motor scores (< 85) in balancing backwards was higher in overweight/obese children (60.4% vs. 36.4%, p = 0.004) and was similar for jumping sideways (18.8% vs. 9.9%, p = 0.116), as well as for shifting platforms sidewise (6.3% vs. 0.8%, p = 0.070). By multiple linear regression analysis, the variables overweight/obesity and sports practice for less than 2 times/week decreased significantly (p < 0.05) the motor coordination score by -18.7 and -15.6 points, respectively. Conclusion: The overweight/obese children scored lower in the motor coordination tests compared to the normal-weight children. Overweight/obesity and low frequency of physical activity were associated with lower scores of gross motor coordination.

Resumen Introducción: Niños con sobrepeso/obesidad pueden tener menores escores de coordinación motora, comparados a las eutróficas. Objetivo: Comparar la coordinación motora gruesa entre escolares con sobrepeso/obesidad y eutróficos, y analizar factores asociados a coordinación motora. Método: Este estudio transversal incluyó niños de 6-9 años, de ambos géneros. Se excluyeron: niños con malformaciones congénitas, deformidades osteomioarticulares, trastornos neurológicos o IMC < -2 escore-z. Se evaluó la coordinación motora gruesa por las pruebas Körperkoordinations test für Kinder (KTK). Factores asociados a los escores de coordinación motora fueron analizados por regresión lineal. Resultado: Las medias de los escores en la marcha hacia atrás (84,2 ± 13,2 vs. 91,0 ± 15,0), saltos monopedales (127,9 ± 10,1 vs. 132,3 ± 12,1, transferencia en plataformas (123,5 ± 23,4 vs. 129,8 ± 14,9) y escore global (112,5 ± 14,8 vs. 118,8 ± 11,6) fueron significativamente menores (p < 0,05) en niños con sobrepeso/obesidad, comparados a las eutróficas. El porcentaje de alumnos con escore motor deficiente (< 85) fue mayor en sobrepeso/obesidad en la marcha hacia atrás (60,4% vs. 36,4%, p = 0,004) y similares en los saltos laterales (18,8% vs. 9,9%, p = 0,116) y transferencia lateral (6,3% vs. 0,8%, p = 0,070). En el análisis de regresión lineal múltiple, las variables sobrepeso/obesidad y práctica de deporte < 2 veces/semana redujeron significantemente (p < 0,05) el puntaje motor global en 18,7 y 15,6 puntos, respectivamente. Conclusiones: Niños con sobrepeso/obesidad presentaron menores escores de coordinación motora que las eutróficas. Sobrepeso/obesidad y baja frecuencia de actividad física se asociaron a menores escores de coordinación motora gruesa.

RESUMO Objetivo: Validar a quantificação de T-cell receptor excision circles (TRECs) e kappa-deleting recombination circles (KRECs) por reação em cadeia de polimerase (polymerase chain reaction, PCR) em tempo real (qRT-PCR), para triagem neonatal de imunodeficiências primárias que cursam com defeitos nas células T e/ou B no Brasil. Métodos: Amostras de sangue de recém-nascidos (RN) e controles foram coletadas em papel-filtro. O DNA foi extraído e os TRECs e KRECs foram quantificados por reação duplex de qRT-PCR. O valor de corte foi determinado pela análise de Receiver Operating Characteristics Curve, utilizando-se o programa Statistical Package for the Social Sciences (SSPS) (IBM®, Armonk, NY, EUA). Resultados: 6.881 amostras de RN foram analisadas quanto à concentração de TRECs e KRECs. Os valores de TRECs variaram entre 1 e 1.006 TRECs/µL, com média e mediana de 160 e 139 TRECs/µL, respectivamente. Três amostras de pacientes diagnosticados com imunodeficiência grave combinada (severe combined immunodeficiency, SCID) apresentaram valores de TRECs abaixo de 4/µL e um paciente com Síndrome de DiGeorge apresentou TRECs indetectáveis. Os valores de KRECs encontraram-se entre 10 e 1.097 KRECs/µL, com média e mediana de 130 e 108 KRECs/µL, e quatro pacientes com diagnóstico de agamaglobulinemia tiveram resultados abaixo de 4 KRECs/µL. Os valores de corte encontrados foram 15 TRECs/µL e 14 KRECs/µL, e foram estabelecidos de acordo com a análise da Receiver Operating Characteristics Curve, com sensibilidade de 100% para detecção de SCID e agamaglobulinemia, respectivamente. Conclusões: A quantificação de TRECs e KRECs foi capaz de diagnosticar crianças com linfopenias T e/ou B em nosso estudo, validando a técnica e dando o primeiro passo para a implementação da triagem neonatal em grande escala no Brasil.

ABSTRACT Objective: To validate the quantification of T-cell receptor excision circles (TRECs) and kappa-deleting recombination excision circles (KRECs) by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) for newborn screening of primary immunodeficiencies with defects in T and/or B cells in Brazil. Methods: Blood samples from newborns and controls were collected on filter paper. DNA was extracted and TRECs, and KRECs were quantified by a duplex real-time PCR. The cutoff values were determined by receiver operating characteristic curve analysis using SPSS software (IBM®, Armonk, NY, USA). Results: Around 6,881 samples from newborns were collected and TRECs and KRECs were quantified. The TRECs values ranged between 1 and 1,006 TRECs/µL, with mean and median of 160 and 139 TRECs/µL, respectively. Three samples from patients with severe combined immunodeficiency (SCID) showed TRECs below 4/µL and a patient with DiGeorge syndrome showed undetectable TRECs. KRECs values ranged from 10 to 1,097 KRECs/µL, with mean and median of 130 and 108 KRECs/µL. Four patients with agammaglobulinemia had results below 4 KRECs/µL. The cutoff values were 15 TRECs/µL and 14 KRECs/µL and were established according to the receiver operating characteristic curve analysis, with 100% sensitivity for SCID and agammaglobulinemia detection, respectively. Conclusions: Quantification of TRECs and KRECs was able to diagnose children with T- and/or B-cell lymphopenia in our study, which validated the technique in Brazil and enabled us to implement the newborn screening program for SCID and agammaglobulinemia.

Doença bacteriana zoonótica, a campilobacteriose é responsável mundialmente por frequentes casos de gastroenterite humana. Campylobacter spp. apresenta fator de virulência associado à diarreia, denominado toxina citoletal distensiva (CDT), sendo codificado pelos genes do complexo cdt. Os objetivos do presente estudo foram: 1) isolar e identificar estirpes de Campylobacter spp. de 102 suabes de carcaças e 102 suabes retais de ovinos (Ovis aries) e de sete amostras de água dos efluentes, antes e depois do tratamento de desinfecção de abatedouro localizado no estado de São Paulo; e 2) detectar, pela técnica de multiplex-PCR, a presença do complexo de genes cdt. Foram isoladas e identificadas, por métodos fenotípicos e genotípicos, sete estirpes de Campylobacter coli provenientes de 4/102 (3,92%) das amostras de suabes retais, 1/102 (0,98%) de suabes de carcaças e 2/7 (28,5%) das águas dos efluentes. Dos isolados de suabes retais, em 2/7 (28,6%) estirpes foi detectada a presença dos genes cdt. Trata-se do primeiro relato de isolamento de estirpes de Campylobacter coli provenientes de abatedouro de ovinos e das estirpes portadoras do complexo de genes cdt nessa espécie animal no Brasil.

A zoonosis and bacterial disease, campylobacteriosis is responsible for frequent cases of human gastroenteritis worldwide. Campylobacter spp. presents the virulence factor called cytolethal distensive toxine (CDT), responsible for diarrhea and codified by the cdt gene. The aims of this study were: 1) to isolate and identify Campylobacter spp. strains from 102 carcass swabs and 102 rectal swabs of sheep (Ovis aries) and seven samples of wastewater, before and after the disinfection treatment, collected from the abattoir of the state of São Paulo; and 2) to detect the presence of cdt gene complex by Multiplex-PCR in strains of Campylobacter spp. Seven strains of Campylobacter coli were isolated and identified by phenotypic and genotypic methods: 4/102 (3.92%) from rectal swabs, 1/102 (0.98%) from carcass swabs and 2/7 (28.5%) from wastewater. From the rectal swab samples 2/7 (28.6%) strains were detected with the cdt gene. This is the first report on the isolation of Campylobacter coli from sheep abattoir, and of strains carrying the cdt gene complex in this animal species in Brazil.

Isolaram-se estirpes de Campylobacter spp. em amostras de carcaças (n=65), fezes (n=65) e linfonodos mesentéricos (n=65) de suínos abatidos em frigoríficos do estado de São Paulo e detectaram, pela técnica da Multiplex-PCR, a presença do complexo de genes cdt, responsáveis pela expressão do fator de virulência da toxina CDT. Do total de 195 amostras de origem suína, Campylobacter spp. foi isolado de 31 (15,9%), sendo 29 (93,6%) de amostras de suabe retal, 1/65 (3,2%) de suabe de carcaça e um (3,2%) de linfonodo. Vinte e oito estirpes de C. coli foram positivas para a detecção dos genes cdt, e três estirpes de C. jejuni foram negativas para a detecção desses genes. Foi detectada, pela primeira vez no estado de São Paulo, a presença dos genes cdt em 100% das estirpes de Campylobacter coli provenientes de suínos abatidos em frigoríficos.

The purposes of this study were to isolate and identify Campylobacter spp. strains from the carcasses (n=65), feces (n=65) and mesenteric lymph nodes (n=65) of swine slaughtered in abattoirs in the State of Sao Paulo and to detect the presence of the cdt gene complex - responsible for the expression of the virulence factor cytolethal distensive toxin - in these Campylobacter spp. strains through Multiplex-PCR. From 195 samples analyzed, Campylobacter spp. was isolated in 31 (15.9%): 29 (93,6%) samples of rectal swab, 1 (3.2%) carcass swab and 1 (3.2%) lymph node sample. The 28 strains of isolated C. coli were positive for CDT toxin genes and the three strains of isolated C. jejuni were negative for these genes. It was also the first time that the cdt gene cluster was detected in strains isolated from swine in the state of São Paulo. These findings indicate swine as a potential spreading source of virulent strains of Campylobacter coli, either for slaughterhouse staff or consumers of carcasses and sub products.

Foram coletados 100 suabes retais e 100 suabes de carcaças bovinas em matadouros do estado de São Paulo, e um total de 326 estirpes de E. coli foram identificadas, sendo 163 de amostras retais e 163 de amostras de carcaça. Todos os isolados submetidos à PCR para detecção dos genes das toxinas Stx1 e Stx2 foram identificados como não-O157 e fenotipados pelo teste da citotoxicidade em células Vero. Das 26 estirpes que apresentaram apenas o gene stx1, das 56 que apresentaram apenas o gene stx2 e das 30 estirpes que apresentaram ambos os genes, 17 (65,4%), 42 (75%) e 22 (73,3%), respectivamente, foram positivas ao teste de citotoxicidade. Não houve diferença estatística entre os três perfis genéticos e na positividade ao teste de citotoxicidade. Os resultados mostram a alta frequência de expressão dos fatores de virulência das STEC de bovinos.

In the present study 100 rectal and 100 carcass swabs were collected from bovines at slaughterhouses in São Paulo state, and the total of 326 E. coli strains were identified (163 from rectal samples and 163 from carcass samples). All the isolates were submitted to PCR for Stx1 and Stx2 toxin gene detection and all strains were identified as non-O157 and phenotyped by the citotoxicity test in Vero cells. Out of 26 strains that presented only the stx1 gene, 56 that presented only the stx2 gene and 30 that presented both genes, 17 (65.4%), 42 (75%) and 22 (73.3%), respectively, were positive for the citotoxicity test. There was no statistically significant difference among these three toxinotyping profiles and positivity in the citotoxicity test, but the results show high frequency of virulence factor expression of bovine.

This paper aimed to determine the excretion period of B19 vaccine strain during a complete reproductive cycle (from estrus synchronization, artificial insemination, pregnancy and until 30 days after parturition) of dairy cows from 3 to 9 years old that were previously vaccinated from 3 to 8 months. Three groups were monitored with monthly milk and urine collection during 12 months: G1 with seven cows from 3 to 4 years old; G2 with three cows from 5 to 6 years old; and G3 with four cows from 7 to 9 years old. Urine and milk samples were submitted to bacteriological culture and urine and PCR reactions for detection of Brucella spp. and PCR-multiplex for B19 strain identification. Ring test (RT) was also performed in the milk samples, and serum samples were tested by buffered acidified plate antigen test (BAPA). All animals were serologically negative at BAPA and Brucella spp. was not isolated from both urine and milk samples. RT revealed 13/210 (6.2%) positive milk samples. PCR reactions detected DNA of Brucella spp. in 86/420 (20.5%) samples. In urine it was found a significantly higher frequency (35.2%; 74/210) than in milk (5.7%; 12/210), more frequently from the estrus to 150 days of pregnancy and after parturition (6.7%; 10/150), and from 150 days of pregnancy to parturition (3.4%; 2/60), and they were all identified as B19 strain. In three groups, intermittent excretion of B19 strain was detected mainly in urine samples, which confirmed its multiplication and persistence in cows for until 9 years.

RESUMO A pleuropneumonia suína, causada pelo Actinobacillus pleuropneumoniae, é uma importante doença respiratória, responsável por prejuízos e queda de produtividade nas criações. Este trabalho teve como objetivo determinar a ocorrência de A. pleuropneumoniae em amostras de campo, mediante a adaptação e emprego de uma técnica de nested-PCR dirigida ao gene Apx IV. Definiu-se a sensibilidade analítica das técnicas de PCR e nested-PCR utilizando a amostra padrão A. pleuropneumoniae sorotipo III, em concentrações de DNA variando entre 30 µg/mL a 0,01 ng/ mL. Um total de trinta e sete amostras de campo encaminhadas ao Instituto Biológico entre 1995 a 2007 foram analisadas pelas técnicas de PCR e nested-PCR. A avaliação da sensibilidade analítica revelou que a PCR possui capacidade de gerar sinal a partir de 2 ng/mL de DNA extraído e a nested-PCR a partir de 0,4 ng/mL. Uma vez que a nested-PCR apresentou sensibilidade analítica cinco vezes maior se comparada à PCR para detecção de A. pleuropneumoniae em amostra padrão, o seu emprego pode minimizar a ocorrência de resultados tipo “falso-negativo”. Dentre as amostras testadas, dez foram positivas à nested-PCR, sendo observada a ocorrência de A. pleuropneumoniae em nove diferentes animais, um deles javali. A presente técnica de nested-PCR pode ser utilizada para detecção direta de A. pleuropneumoniae em amostras de campo, mesmo após congelamento da amostra por longos períodos e sem necessidade de isolamento bacteriano prévio.

ABSTRACT Porcine pleuropneumonia, caused by Actinobacillus pleuropneumoniae, is an important respiratory disease, responsible for economic losses and reduced productivity. The aim of this study was to determine occurrence of A. pleuropneumoniae in field samples, using an adapted nested-PCR reaction targeting the Apx IV gene. Different DNA concentrations (from 30 µg/mL to 0.01 ng/mL) of A. pleuropneumoniae serotype III reference strain were used to determine the level of sensitivity of first generation and nested-PCR reactions. Thirty-seven field samples sent to Instituto Biológico from 1995 to 2007 were tested by PCR and nested-PCR. Determination of the level of sensitivity showed that PCR could amplify to 2 ng/mL of extracted DNA and nested-PCR to 0.4 ng/mL. Since the nested reaction exhibited a level of sensitivity 5 times greater than the PCR reaction to detect a reference strain, using nested-PCR could minimize the occurrence of false-negative results. Among tested samples, 10 of them were nested-PCR positive, showing occurrence of A. pleuropneumoniae in 9 different animals (including one wild boar). This nested-PCR reaction can be used for direct detection of A. pleuropneumoniae in field samples, even after frozen storage for long periods, without the need for previous bacterial isolation.

The objectives of the present study were the subtyping of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains obtained from humans and different animal species using PCR-RFLP, and the detection, by means of the same technique, of strains related to serotype PEN O19:LIO 7, the main C. jejuni serotype linked to Guillain-Barré Syndrome (GBS). Seventy C. jejuni strains isolated from human feces (n=33), primates (n=15), dogs (n=5), swine (n=2), bovines (n=1), abortion material from goats (n=2) and poultry carcasses (n=12), all collected in the state of São Paulo, were subtyped by means of PCR-RFLP of fla A gene, using restriction endonucleases Hae III, Afa I and Mbo I. Seven subtypes were observed when using the enzyme Hae III; eight when using Mbo I; and seven when using Afa I. The combination of the three endonucleases led to 16 fla-RFLP subtypes, from which ten subtypes shared strains of human and animal origin. From these, seven subtypes were observed in human and broiler strains. In eight subtypes, the other animal species shared patterns with human strains. It was inferred that, besides broilers, swine, goats, dogs and primates may be sources of infection for human in São Paulo. PCR-RFLP is a highly discriminatory technique that may be applied to molecular epidemiology studies of samples from different origins. Besides, the study also enabled the detection of two human strains and two primate strains related to serotype PEN O19: LIO 7.

RESUMO O presente trabalho descreve um quadro de botulismo em bovino fêmea proveniente do Município de São José dos Campos, SP, que apresentou no pós-parto um quadro de paralisia flácida de membros posteriores seguida de óbito, em propriedade de criação extensiva de corte. Foi possível detectar a toxina botulínica tipos C e D a partir dos conteúdos ruminal e intestinal pela técnica de soroneutralização em camundongo. Surtos de botulismo em bovinos são frequentes no Brasil, geralmente devido ao hábito de osteofagia, que leva à ingestão de toxina produzida pelo bacilo anaeróbio Clostridium botulinum. A falta de suplementação mineral pode ser um fator desencadeador do quadro de botulismo, aliado a ausência de um manejo adequado.

ABSTRACT The present study reports a case of botulism in a female bovine from São José dos Campos, state of São Paulo, Brazil, that presented flaccid paralysis after calving and died, on a property of extensive beef production. It was possible to detect botulinic toxin types C and D from the ruminal and intestinal contents through mouse seroneutralization assay. Cases of bovine botulism are frequent in Brazil, usually associated with the ingestion of carcasses as a result of pica in phosphorus deficient areas, which leads to the ingestion of the toxin produced by the anaerobic bacilli Clostridium botulinum. The lack of mineral supplementation can be a trigger for cases of botulism, together with the absence of adequate management.

Foi detectada presença de Clostridium chauvoei pela reação de PCR a partir de cultivo em cooked meat medium de amostras de fígado, músculo e medula óssea metatarsiana de sete bezerros acometidos de carbúnculo sintomático. O isolamento de uma amostra de músculo sob condições anaeróbias revelou Clostridium perfringens em cultura pura.

C. chauvoei presence was detected by means of polymerase chain reaction (PCR) from supernatant of culture in cooked meat medium of liver, muscle and metatarsian bone marrow samples of seven calves with blackleg symptoms. The isolation under anaerobic conditions of one muscle sample revealed Clostridium perfringens in pure culture.

Postmortem examination of a Boer buck that died peracutely revealed bowel and liver diffusely congested and edematous. Kidney was apparently edematous. Clostridium perfringens type A was isolated from bowel and type D from kidney. Microscopic examination revealed large areas of necrosis in the renal cortex and medulla (pulpy kidney disease), hyperemia and centrilobular necrosis of the liver, necrosis of the small-intestine wall, pulmonary edema and congestion, intense hyperemia of the cerebellum, hyperemia and edema of the brain.

RESUMO O presente trabalho objetivou avaliar o efeito do tratamento com sulfato de estreptomicina sobre o perfil sorológico de um rebanho bovino acometido de um surto de leptospirose pelo sorovar Canicola e avaliar os parâmetros reprodutivos no ciclo reprodutivo subseqüente. Foram formados 2 grupos de 10 fêmeas bovinas: G1-tratado com sulfato de estreptomicina, 25 mg/kg/pv por 3 dias, via IM; G2 sem tratamento. Amostras de soro foram colhidas no início dos abortamentos e posteriormente a cada 15 ou 30 dias num total de 270 dias e examinadas pela reação de soroaglutinação microscópica-SAM. Vinte amostras de urina colhidas no início dos sintomas e 10 -15 dias após tratamento e seis fetos abortados (rins, fígado, pulmão e conteúdo abomasal) foram submetidos ao exame bacteriológico para pesquisa de bactérias causadoras de abortamento e à técnica de PCR para Leptospira spp. Ocorreu soroconversão predominante para Leptospira spp. sorovar Canicola (títulos: 100 a 51.200); 7/20 amostras de urina foram positivas para Leptospira spp. na PCR, sendo todas negativas no exame bacteriológico e nenhuma amostra fetal foi positiva em ambas as técnicas. Os abortamentos cessaram após a antibioticoterapia, e as amostras de urina negativaram-se na PCR. O sulfato de estreptomicina foi eficaz na eliminação da doença, entretanto, não influenciou a evolução dos títulos de anticorpos no perfil sorológico quando comparado ao grupo controle, ambos negativando-se ao redor de 200 dias após o início dos sintomas. Embora não houvesse diferença estatística entre as taxas de prenhez/IA e parto/prenhez do grupo tratado em relação ao não tratado (p > 0,05), talvez devido ao baixo número amostrado, as taxas reprodutivas foram menores no grupo não tratado.

ABSTRACT The objectives of the present trial were to evaluate the reproductive parameters in a Holstein bovine herd affected by leptospirosis during the outbreak of abortion and stillborn fetus and treated with streptomycin sulfate. Animals were divided in 2 groups of 10 cows each: G1, treated with streptomycin sulfate 25 mg/kg/lw for 3 days by IM route; and; G2, untreated control. Serum samples were collected on the onset of abortions and after that every 15 or 30 days until completing 270 days. Samples were analyzed by means of MAT microscopic agglutination test that showed sera conversion to serovar Canicola with titers ranging from 100 to 51,200; 7/20 of the urine samples were positive for Leptospira spp. by PCR After streptomycin sulfate therapy, the outbreak ended and urine samples also got negative to PCR and no fetus samples were positive in either techniques. However, it did not influence the evolution in antibody titers of serological profiles in both groups, which got negative after around 200 days of the onset of symptoms. Although there was no significant difference of the frequency of pregnancy/AI and calving/pregnancy rates between treated and untreated groups (p > 0.05), reproductive rates were lower in the untreated group.

RESUMO O objetivo desse trabalho foi avaliar in vitro a sensibilidade de zigotos murinos à Brucella abortus, a fim de estabelecer um modelo acessível para o estudo de interações embriões-patógenos. Para a coleta dos zigotos, foram utilizados camundongos fêmeas (Swiss Webster) acasaladas com machos inteiros, após superestimulação ovariana. Para a infecção foi utilizada a bactéria B. abortus 1119.3 e a suspensão foi preparada no momento da inoculação (diluição de 106 bactérias/mL). Os zigotos foram separados em controle e infectados (30 µL da suspensão de bactérias), e após 24 e 96h foram analisados quanto à morfologia e taxa de clivagem. No grupo controle não foram verificadas alterações morfológicas, já no infectado foi possível verificar a presença de blastômeros irregulares, falha de divisão, citoplasma com granulação e aspecto degenerativo. As taxas de clivagem após 24h foram de 77,4% (controle) e 59,2% (infectados) (χ2 de 0,001674; p < 0,05) e após 96h de infecção 14,5% (controle) e 7% (infectados) (χ2 de 0,141616; p < 0,05). Considerando os resultados pode-se concluir que os zigotos murinos são sensíveis à B. abortus após exposição in vitro. Provavelmente os zigotos murinos possam ser utilizados como modelo experimental, de baixo custo e fácil acesso, para estudos da interação embrião-B. abortus.

ABSTRACT The aim of this study was evaluate in-vitro the susceptibility of mouse zygotes to Brucella abortus, with the purpose of establishing an accessible model for embryo-pathogen interaction studies. The female mice (Swiss Webster) were superovulated and mated with fertile males of the same strain, and then the zygote retrieval was performed. The bacterial suspension was prepared at the moment of inoculation, and the dilution was 106 brucellas/mL. The zygotes were divided into control and infected groups (30 µL of the bacterial suspension); after 24 and 96h their morphology and viability were analyzed. Morphological changes were not observed in the control group, but the infected one presented irregular blastomers, defective cleavage, granular cytoplasm with degenerative-like morphology. The cleavage rates were 77.4% (control) and 59.2% (infected) (χ2 de 0.001674; p< 0.05) after 24h, and after 96h 14.5% (control) and 7% (infected) (χ2 de 0.141616; p < 0.05). According to the data, mice zygotes are susceptible to B. abortus in-vitro infection. Probably they could be used as an efficient and accessible experimental model for studies of embryo-pathogen interactions.

RESUMO Clostridium chauvoei causa uma infecção conhecida no Brasil como “manqueira” e geralmente desenvolve-se em bovinos entre os 6 meses e 2 anos de idade, raramente acomete animais com menos de 6 meses de vida, sendo que a mortalidade é de quase 100%. Um animal de um ano de idade e sem raça definida, vacinado contra as clostridioses entre 10 a 15 dias antes de ser atendido na Clínica de Bovinos do Centro de Pesquisa e Diagnóstico de Enfermidades de Ruminantes (CPDER), FMVZ-USP, apresentava dificuldade de locomoção do membro anterior direito, sendo que na região acometida observou-se mionecrose com crepitação ao toque, e alterações na temperatura do membro acometido. O animal foi tratado com antibioticoterapia sistêmica e limpeza do local da ferida obtendo cura das lesões após 6 meses do início do tratamento, sendo confirmado o diagnóstico de clostridiose pelo isolamento bacteriano do Clostridium chauvoei.

ABSTRACT Clostridium chauvoei infection typically develops in young cattle between 6 months and 2 years of age, and is rarely found affecting calves younger than 6 months of age. Mortality is nearly 100%. In the Clinic of Bovines and Small Ruminants of the FMVZ-USP, assistance was given to a one-year old beef calf with no definite race, vaccinated against Clostridium sp. The animal showed movement troubles of the right anterior member, gas presence with volume and temperature increase on the affected area. The animal was submitted to aseptical cleanliness on the affected region and treated with penicillin against C. chauvoei. Six months later the lesion was reduced and the animal showed only a moderate limp.

RESUMO Com o objetivo de aprimorar os métodos diagnósticos em micoplasmoses foi realizado um estudo utilizando-se muco prepucial e sêmen innatura de touros de monta natural e de uma central de inseminação artificial com o objetivo de reduzir o tempo necessário para a emissão de resultados e aumentar os níveis de detecção, assumindo o isolamento bacteriano, técnica dependente da viabilidade microbiana, como teste gold standard. Cento e setenta e cinco amostras de muco prepucial e 143 amostras de sêmen fresco foram estudadas. Através da técnica de PCR (Reação da Polimerase em Cadeia), uma triagem prévia das amostras foi realizada para detecção de Mollicutes, utilizando-se o sistema MGSP/GPO-1. Primers espécie-específicos para Mycoplasma bovigenitalium e Ureaplasma diversum foram posteriormente utilizados. Ao isolamento, foram observados 45,1% (79/175) de positivos para Mollicutes e 66,5% (115/173) para U. diversum em muco de prepucial. Comparativamente, a PCR revelou 63,7% (109/171) de amostras positivas através de sistema de MGSP/GPO-1, 42,6% (72/169) de amostras positivas para M. bovigenitalium e 72,9% (124/170) para U. diversum. O estudo das amostras de sêmen apresentou 22,5% (32/142) de positivos para Mollicutes e 51,7% (74/143) para U. diversum, através do isolamento. Pela PCR, foram detectadas 24,1% (33/137) de amostras positivas no sistema MGSP/GPO-1, 27,4% (34/124) de amostras positivas para M. bovigenitalium e 56,6% (73/129) para U. diversum. O teste de McNemar para presença de Mollicutes em muco de prepucial (p = 0,57), mostrou que o sistema MGSP/GPO-1 pode ter um valor considerável quando associado à detecção específica de U. diversum, apresentando uma boa sensibilidade (75,2%), porém baixa especificidade (58,9%). A análise estatística mostrou que o sistema MGSP/GPO-1 de triagem poderia substituir o isolamento preliminar para Mycoplasma spp. em amostras de sêmen (p = 0,86).

ABSTRACT With the objective of improving the diagnostic methods in mycoplasmosis, a study was carried out using bovine prepucial mucus and fresh semen from natural breeding and one Artificial Insemination Center with the aim to reduce the time necessary for the emission of results and to increase the detection levels, assuming bacterial isolation, on technique that depends on microbial viability, as the gold standard test. One hundred and seventy-five prepucial mucus samples and 143 fresh semen samples were studied. By PCR (Polymerase Chain Reaction) technique, a previous screening using the MGSP/GPO-1 system was tested for Mollicutes detection. Species-specific primers for Mycoplasma bovigenitalium and Ureaplasma diversumwere used subsequently. By isolation there were observed 45.1% (79/175) of positivity for Mollicutes and 66.5% (115/173) for U. diversum in prepucial mucus. Comparatively, PCR revealed 63.7% (109/171) of positive samples by MGSP/GPO-1, 42.6% (72/169) of positive samples for M. bovigenitalium and 72.9% (124/170) for U. diversum. The semen samples study presented 22.5% (32/142) of positivity for Mollicutes and 51.7% (74/143) for U. diversum, by isolation. By PCR, 24.1% of positive samples were detected (33/137) using the MGSP/GPO-1 system, 27.4% (34/124) of positive samples for M. bovigenitalium and 56.6% (73/129) for U. diversum. The McNemar test for the Mollicutes presence in prepucial mucus (p = 0.57) showed that theMGSP/GPO-1 system can have a considerable value when associated with specific detection of U. diversum, showing good sensitivity (75.2%), however lower specificity (58.9%). The statistical analysis showed that the screening by MGSP/GPO-1 system could substitute the preliminary isolation of Mycoplasma spp. in semen samples (p = 0.86).