Tomato chlorosis virus (ToCV, genus Crinivirus, family Closteroviridae) is a whitefly-transmitted crinivirus with a bipartite RNA genome. This virus is emerging as a serious threat to tomato crops worldwide. To date, only three complete genomic sequences of ToCV have been described from North America, Spain, and Greece isolates. In this study, we present the fourth complete nucleotide sequence of the RNA 1 (8594 nt) and RNA 2 (8242 nt) components of a Brazilian ToCV isolate (ToCV-BR). The complete genome sequences of RNA 1 and RNA 2 have been deposited in the GenBank database under the accession numbers JQ952600 and JQ952601, respectively. The sequences of RNA 1 and RNA 2 shares the highest nucleotide identity of 99.6% and 99.5%, respectively, with the Greek isolate sequences. Phylogenetic analysis confirmed that both RNA 1 and RNA 2 of the Brazilian isolate are most closely related to the Greek isolate of that virus. These results suggest that ToCV may have been recently introduced to Brazil from Europe.

Várias doenças ameaçam a produção de tomate, especialmente aquelas causadas por vírus dos gêneros Begomovirus, Tospovirus e Potyvirus. Uma análise de amostras foliares de tomateiro para detecção dos vírus de maior importância no Distrito Federal foi realizada utilizando-se as técnicas de PCR e DAS-ELISA. Em um total de 54 amostras avaliadas, o vírus mais prevalente foi o Pepper yellow mosaic virus, um potyvírus responsável por sérias perdas em áreas de produção de pimentão no Brasil. Este resultado reforça a crescente importância deste vírus na produção de tomate. Os sintomas causados por PepYMV são muito similares àqueles causados por begomovírus, portanto é recomendada que uma técnica de detecção apropriada seja utilizada em adição à avaliação visual de sintomas.

Various diseases threaten tomato production; especially those caused by viruses of the genera Begomovirus, Tospovirus and Potyvirus. A survey on the major viral diseases occurring on tomatoes in the Federal District was carried out using PCR and DAS-ELISA. Out of 54 evaluated samples, the most prevalent virus was Pepper yellow mosaic virus, a potyvirus responsible for heavy losses in sweetpepper production in Brazil. This result highlights the increasing importance of this virus on the tomato crop. Since the symptoms caused by PepYMV infection are similar to those caused by begomoviruses, the use of a proper detection technique is recommended in addition to visual evaluation of symptoms.

Plantas de alho da cv. Amarante, cultivadas em casa de vegetação para detecção da ocorrência de viroses, foram naturalmente infestadas por afídeos de coloração escura durante a primavera de 2001. Com o objetivo de identificar a espécie em questão foram coletados indivíduos alados, capturados com armadilha constituída por bandeja amarela com água, além de formas ápteras. A identificação da espécie foi feita segundo a chave descritiva elaborada por Blackman & Eastop (1984) e por comparação com espécimes de Neotoxoptera formosana e N. oliveri da coleção do Depto. Fitopatologia da Universidade de Brasília. O afídeo encontrado em alho pertence à espécie Neotoxoptera formosana Takahashi, 1921.

Garlic plants (cv. Amarante) cultivated during the spring in the greenhouse for detection of viruses, were found to be naturally colonized by a dark aphid. For species identification, specimens of the few alatae individuals collected by pan yellow water traps and many apterae individuals were compared to the species descriptions in Blackman & Eastop (1984). The specimens were also compared with Neotoxoptera formosana and N. oliveri from the aphid collection of the Phytopathology Department of the University of Brasília. The aphid found in the garlic plants belongs to the species Neotoxoptera formosana Takahashi, 1921.

A determinação da diversidade de vírus no campo é vital para dar suporte a programas sustentáveis de melhoramento de hortaliças visando a obtenção de resistência genética a esses patógenos. Este estudo objetivou caracterizar quatro isolados de potyvírus encontrados infetando naturalmente plantas de pimentão (Capsicum annuum) Sa66 e Sa115, e tomateiro (Lycopersicon esculentum) IAC3 e Sa21. As características biológicas revelaram diferenças entre os isolados na abilidade de infetar diferentes genótipos de pimentão e tomateiro e na severidade de sintomas causados por estes isolados em comparação com a infecção resultante de um isolado de Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Estudos sorológicos mostraram ausência de reação cruzada dos isolados estudados com anti-soro para Potato virus Y (PVY). Entretanto, todos os isolados reagiram, em intensidades diferentes, com anti-soro para PepYMV. Todos os isolados mostraram alta percentagem de identidade (97 a 99%) de sequência de amino ácidos da capa proteica com PepYMV (accesso AF348610) e baixa (69 a 80%) com outras espécies de potyvírus. A comparação da região 3' não traduzida também confirmou esta similaridade, com identidade de 97 a 98% com PepYMV e de 47 a 71% com outros potyvírus. Os resultados mostraram que os isolados de PepYMV foram facilmente diferenciados de PVY por sorologia, a resposta de hospedeiros a cada isolado pode ser variável e a sequência de nucletídeos da região terminal 3' foi altamente conservada entre os isolados

Determination of virus diversity in the field is vital to support a sustainable breeding program for virus resistance of horticultural crops. The present study aimed to characterize four field potyvirus isolates found naturally infecting sweet pepper (Capsicum annuum) (Sa66 and Sa115) and tomato (Lycopersicon esculentum) (IAC3 and Sa21) plants. Their biological characteristics revealed differences among the isolates in their ability to infect distinct Capsicum spp. and tomato genotypes, and in the severity of symptoms caused by these isolates compared to the infection caused by an isolate of Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Absence of cross-reaction was found among the studied isolates with antiserum against Potato virus Y (PVY). However, all isolates reacted, at different intensities, with antiserum against PepYMV. All isolates showed high identity percentage (97 to 99%) of the amino acid sequence of the coat protein with PepYMV (accession AF348610) and low (69 to 80%) with other potyvirus species. The comparison of the 3' untranslated region also confirmed this finding with 97 to 98% identity with PepYMV, and of 47 to 71% with other potyviruses. The results showed that PepYMV isolates were easily differentiated from PVY by serology and that the host response of each isolate could be variable. In addition, the nucleotide sequence of the coat protein and 3' untranslated region was highly conserved among the isolates.

A determinação da gama de hospedeiros de begomovírus isolados de tomateiro (Lycopersicon esculentum) é de elevada importância nos estudos conduzidos com esses patógenos, uma vez que contribui para o entendimento da larga disseminação dos vírus em condições de campo e oferece subsídios para o estudo da variabilidade genética de espécies e estirpes identificadas em diversas regiões do país. Visando a determinação e a comparação da gama de hospedeiros de dois isolados de begomovírus de tomateiro obtidos de lavouras da região de Anápolis-GO (GO-ANPL) e do Distrito Federal (DF-BR2) inocularam-se 31 espécies vegetais pertencentes a oito famílias botânicas, sob duas modalidades de inoculação: mecânica e com a mosca branca, Bemisia tabaci biótipo B. Constatou-se que o GO-ANPL e o DF-BR2 infetaram exclusivamente plantas da família Solanaceae como Datura stramonium, Nicandra physalodes e Nicotiana benthamiana. Para o GO-ANPL, o número de espécies vegetais infetadas com o emprego do inseto vetor foi superior ao obtido pela inoculação mecânica, diferindo dos resultados obtidos para o DF-BR2 em que as plantas hospedeiras foram igualmente infetadas em ambos os métodos de inoculação. A comparação entre as hospedeiras dos dois isolados e destes com as de outros begomovírus de tomateiro da região Nordeste revelaram que há variação tanto nas espécies hospedeiras como na sintomatologia exibida pelas plantas infetadas. Os testes foram todos confirmados com hibridização com sondas moleculares, em "dot blot".

Determination of the begomovirus host range determination in tomato (Lycopersicon esculentum) is an important feature in unveiling the genetic variability of species and strains of the virus and how it spreads under field conditions. In order to determine the host range of two begomoviruses isolated from tomato, denoted GO-ANPL and DF-BR2, 31 plant species of eight botanical families were tested via mechanical and vector inoculation. Both isolates only infected plants of the family Solanaceae as Datura stramonium, Nicandra physalodes e Nicotiana benthamiana. The GO-ANPL isolate infected a higher number of plants when they were inoculated by the insect vector. Results were distinct from those obtained with the DF-BR2 isolate, where both inoculation methods were equally effective. Comparison between these two isolates with other begomoviruses reported in Northeast Brazil revealed different patterns in host range and symptomss. Virus infection was confirmed by dot blot hybridization using specific molecular probes to begomovirus isolates.

No estudo da interação de um begomovírus isolado de tomateiro (Lycopersicon esculentum) em Anápolis-GO, denominado GO-ANPL (taxonomicamente relacionado ao Tomato rugose mosaic virus, ToRMV) com o vetor Bemisia tabaci biótipo B, determinaram-se o período de acesso de aquisição do vírus (PAA), o período de acesso de inoculação (PAI), o período de latência (PL), a sua retenção e transmissão à progênie. Nos experimentos empregaram-se plantas de tomateiro 'Santa Clara' e cinco insetos por planta. Constatou-se um PAA mínimo de 15 min com o qual 6% dos tomateiros foram infetados. Este percentual aumentou para 65% quando o PAA foi estendido para 24 h. O PAI mínimo foi de 30 min registrando-se 18% de infecção, o qual foi elevado para 67% com 24 h de PAI. Observou-se o término do PL 16 h após o vetor adquirir o vírus. Na detecção do GO-ANPL no vetor via PCR, testes com mais de 2.500 espécimens constataram o vírus em ninfas desenvolvidas em tomateiro infetado, em adultos com diferentes PAAs, mas não em ovos de fêmeas avirulíferas ovipositados em planta infetada. Observou-se a passagem transestadial em 100% dos adultos testados que transmitiram o vírus em 33% dos casos. Evidenciou-se a transmissão à progênie pela detecção do vírus em ovos, ninfas e adultos provenientes de fêmeas virulíferas, contudo, a transmissão do vírus pelos adultos não foi observada. Os resultados obtidos indicam que a interação vírus-vetor é estabelecida desde a fase inicial do desenvolvimento do inseto e podem ser considerados relevantes para os estudos epidemiológicos dos begomovírus associados ao biótipo B de B. tabaci no país.

A begomovirus named GO-ANPL (taxonomically related to the Tomato rugose mosaic virus, ToRMV), obtained from tomato (Lycopesricon esculentum) plants in Anápolis, state of Goiás, was used to study virus/vector (Bemisia tabaci biotype B) interaction. The acquisition access period (AAP), the inoculation access period (IAP), and the latent period (LP) were determined by transferring five whiteflies per tomato seedling cv. Santa Clara. The minimum AAP was 15 min resulting in 6% infected plants, which reached 65% as the length of AAP increased to 24 h. At a minimum IAP of 30 min, 18% of plants were infected; this increased to 67% after an IAP of 24 h. The end of the LP in the vector occurred 16 h after virus acquisition. To detect the GO-ANPL in the vector by PCR, more than 2,500 specimens were tested. The virus was found in adults under different AAPs from the 1st to the 4th instar grown on infected plants. No virus was found in the eggs that were laid on infected plants by aviruliferous females. The GO-ANPL isolate was transmitted to the progeny of viruliferous females, since the virus was detected in eggs, all instars and adults. However, no virus transmission was observed from these adults. A high frequency of viral detection was observed in newly emerged adults from immature forms reared on virus-infected plants. These adults infected 33% of tomato plants in virus transmission assays. The results indicate that the interaction between begomovirus and B. tabaci biótipo B starts at early stages of insect development. This is important information for epidemiological studies of begomovirus in this country.

A incidência de doenças causadas por molicutes e por vírus foi avaliada em lavouras de milho (Zea mays) nas Províncias de Tucumán e de Córdoba, na Argentina, em fevereiro de 2000. Na Província de Tucumán verificou-se que 44% das lavouras apresentaram altos níveis de incidência de plantas com sintomas de enfezamentos causados por molicutes (50 a 100%), em altitudes variando de 300 a 2.000 m. A presença de fitoplasma e de espiroplasma foi confirmada em amostras de folhas de plantas com sintomas de enfezamentos, através dos testes de PCR e de "Western blotting". Constatou-se, porém, que a eficiência desses testes para detecção destes patógenos, quando os sintomas apresentados pelas plantas eram muito acentuados, foi da ordem de 70%, e de apenas 30% quando os sintomas eram menos acentuados. Na localidade Jesus Maria, foram encontradas plantas apresentando acentuado nanismo, folhas estreitas e com deformações. Dentre quatro amostras destas plantas, submetidas a testes de PCR, em duas foi detectada a presença de fitoplasma, possivelmente d istinto do "Maize Bushy Stunt Phytoplasma". A cigarrinha Dalbulus maidis, inseto vetor dos molicutes, foi encontrada apenas em Tucumán, estando ausente em Córdoba. O Mal de Rio Cuarto virus foi detectado em seis lavouras em Córdoba, e em três em Tucumán. A cigarrinha Delphacodes kuscheli foi detectada em todas as lavouras em Córdoba, e em apenas três lavouras em Tucumán. O Maize dwarf mosaic virus foi detectado em cerca de 60% das lavouras amostradas nas duas Províncias e o Maize rayado fino virus em apenas uma localidade em Tucumán.

The incidence of "corn stunt diseases" and maize (Zea mays) viruses was evaluated in maize fields located at the Provinces of Tucumán and Córdoba in Argentina in February 2000. A high number of plants infected with "corn stunt disease" were observed in Tucumán (up 50 to 100%) in 44% of maize crops surveyed in areas varying from up 300 to 2000 m high. The presence of Maize Bushy Stunt Phytoplasma (MBSP) and Corn Stunt Spiroplasma (CSS) was confirmed by PCR and Western blotting tests. In plants showing typical symptoms of MBSP or CSS, the pathogens were detected in 70% of the samples. However, when symptoms were weak, the efficiency of detection dropped to approximately 30%. In Rio Cuarto, Province of Córdoba, the presence of phytoplasma was detected only in three plants showing red leaf symptoms. In Jesus Maria locality, plants showing symptoms different from those caused by MBSP, were demonstrated to be infected by phytoplasma when analyzed by PCR using universal primers. The leafhopper Dalbulus maidis, vector of MBSP and CSS, was found only in Tucumán. The Mal de Rio Cuarto virus (MRCV) was found in six maize fields in Córdoba and in three maize fields located at 1970 to 2.000 m high in Tucumán. The plant hopper Delphacodes kuscheli, vector of MRCV, was found in both provinces sampled. The Maize dwarf mosaic virus (MDMV) was found in 60% of maize crops in both Provinces and the Maize rayado fino virus (MRFV)was found only in one location in Tucumán.

O mosaico comum do milho (Zea mays) destaca-se, atualmente, entre as doenças mais importantes dessa cultura, sendo causada por um complexo de potyvirus transmitido por afídeos. Esse trabalho teve por objetivo a identificação de fatores que podem contribuir para a incidência dessa virose e disseminação do seu agente causal. Plântulas de 115 cultivares dos Ensaios Nacionais de Milho-Centro foram submetidas a quatro inoculações com o complexo viral, utilizando-se, em cada uma, parcelas com cinco plantas de cada cultivar. A maioria das cultivares mostrou-se suscetível, apresentando sintomas da virose, aos 15 dias após a inoculação. Espécies de gramíneas também foram inoculadas e mostraram-se hospedeiras desses vírus. Através do teste dot-ELISA, a presença dos vírus do mosaico comum foi detectada em folhas de milho provenientes de vários municípios dos estados de São Paulo, Minas Gerais e Goiás. No período de mar/97 a fev/98, dois híbridos de milho foram plantados mensalmente, e semanalmente avaliados quanto à incidência do mosaico comum. Observou-se tendência de maior incidência nos plantios de novembro, dezembro e janeiro, coincidindo com as elevadas temperaturas e precipitações pluviométricas do verão. Os resultados obtidos contribuem para a recomendação de medidas para o controle dessa virose.

In recent years, mosaic became one of the most important diseases affecting maize (Zea mays) crops. It is caused by a potyvirus complex transmitted by aphid species. The aim of this work was to identify factors that may contribute to increase the incidence and dissemination of this disease. Seedlings of 115 cultivars from three different National Maize Cultivars Trials were tested for their susceptibility to the virus complex via mechanical inoculation of five plants of each cultivar, between October/97 and February/98. Most cultivars were susceptible and showed mosaic symptoms 15 days after inoculation. Several graminaceous species were also inoculated and showed to be hosts of the potyvirus complex. Using the dot-ELISA test, the virus complex could be detected in maize plants collected from different regions of São Paulo, Minas Gerais and Goias states. Between March/97 and February/98 two maize inbred lines were planted monthly and incidence of mosaic was evaluated weekly. The highest incidence was observed in the summer, coinciding with the increase of temperature and the levels of rainfall. These results may contribute to recommending control measures.

Infecções virais em alho são normalmente causadas por um complexo viral. Neste estudo, um complexo viral de alho, coletado em campo, foi purificado. Procedeu-se à amplificação por RT-PCR usando oligonucleotídeos desenhados para regiões-consenso dos genes das proteínas capsidiais de Onion yellow dwarf virus, estirpe do alho e de Leek yellow stripe virus. cDNA de Garlic common latent virus foi sintetizado usando oligo-dT e oligonucleotídeos aleatórios. Por estes procedimentos clones de diferentes espécies virais foram isolados e sequenciados. A análise das sequências nucleotídicas e os resultados sorológicos revelaram a presença dos Potyvirus OYDV-G e LYSV e do Carlavirus GCLV, simultaneamente infetando plantas de alho. As seqüências de aminoácidos deduzidos dos isolados brasileiros foram comparadas com aquelas de vírus relacionados, relatados em diferentes regiões do mundo. A análise mostrou pequena variabilidade em relação aos isolados brasileiros de OYDV-G e GCLV, e maior divergência em relação ao isolado de LYSV. A detecção destas espécies virais também foi obtida por reações específicas observadas quando o gene da proteína capsídica dos isolados brasileiros foi usado como sonda em ensaios de hibridização do tipo dot-blot e Southern blot. Em campo, a re-infecção natural de alho livre de vírus foi avaliada.

Garlic viruses often occur in complex infections in nature. In this study, a garlic virus complex, collected in fields in Brazil, was purified. RT-PCR was performed using specific primers designed from the consensus regions of the coat protein genes of Onion yellow dwarf virus, a garlic strain (OYDV-G) and Leek yellow stripe virus (LYSV). cDNA of Garlic common latent virus (GCLV) was synthesized using oligo-dT and random primers. By these procedures individual garlic virus genomes were isolated and sequenced. The nucleotide sequence analysis associated with serological data reveals the presence of two Potyvirus OYDV-G and LYSV, and GCLV, a Carlavirus, simultaneously infecting garlic plants. Deduced amino acid sequences of the Brazilian isolates were compared with related viruses reported in different geographical regions of the world. The analysis showed closed relations considering the Brazilian isolates of OYDV-G and GCLV, and large divergence considering LYSV isolate. The detection of these virus species was confirmed by specific reactions observed when coat protein genes of the Brazilian isolates were used as probes in dot-blot and Southern blot hybridization assays. In field natural viral re-infection of virus-free garlic was evaluated.

Visando a um método para a detecção universal de tospovírus, utilizaram-se as técnicas de "Transcriptase reverse - polymerase chain reaction" (RT-PCR) e hibridização com sondas marcadas com digoxigenina. As espécies de tospovirus testadas foram: Tomato spotted wilt virus, Tomato chlorotic spot virus, Groundnut ringspot virus, Chrysanthemum stem necrosis virus, Impatiens necrotic spot virus, Zucchini lethal chlorosis virus, Iris yellow spot virus. Os oligonucleotídeos foram sintetizados para anelar em regiões conservadas do genoma viral, sendo os produtos de PCR utilizados como sondas para hibridização através de "dot blot". Através de RT-PCR, utilizando-se diferentes combinações de oligonucleotídeos, somente foi possível a amplificação de todas as espécies quando se utilizou RNA de vírus purificado, sendo que, para a detecção a partir de RNA total, a RT-PCR apresentou problemas para a detecção das espécies ZLCV e IYSV. Sob condições de baixa adstringência, os testes de hibridização por "dot blot" com a sonda M (correspondente ao gene G1/G2) detectaram todas as espécies testadas, exceto IYSV. Com a sonda L, também sob condições de baixa adstringência, pôde-se detectar todas as espécies de tospovirus testadas simultaneamente em um único ensaio. Este método de detecção pode ser utilizado em serviços de quarentena e para indexação de germoplasma in vitro.

Transcriptase reverse - polymerase chain reaction (RT-PCR) and dot blot hybridization with digoxigenin-labeled probes were applied for the universal detection of Tospovirus species. The virus species tested were Tomato spotted wilt virus, Tomato chlorotic spot virus, Groundnut ringspot virus, Chrysanthemum stem necrosis virus, Impatiens necrotic spot virus, Zucchini lethal chlorosis virus, Iris yellow spot virus. Primers for PCR amplification were designed to match conserved regions of the tospovirus genome. RT-PCR using distinct primer combinations was unable to simultaneously amplify all tospovirus species and consistently failed to detect ZLCV and IYSV in total RNA extracts. However, all tospovirus species were detected by RT-PCR when viral RNA was used as template. RNA-specific PCR products were used as probes for dot hybridization. This assay with a M probe (directed to the G1/G2 gene) detected at low stringency conditions all Tospovirus species, except IYSV. At low stringency conditions, the L non-radioactive probe detected the seven Tospovirus species in a single assay. This method for broad spectrum detection can be potentially employed in quarantine services for indexing in vitro germplasm.