Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a indução de organogênese indireta por concentrações de ácido diclorofenoxiacético (2,4-D) e tidiazurom (TDZ) em explantes de pitaia (Hylocereus undatus), por meio de microscopia eletrônica de varredura e da técnica de citometria de fluxo. Os tratamentos consistiram das concentrações de 0, 2,0 e 4,0 mg L-1 de 2,4-D e TDZ e das combinações desses reguladores. Avaliaram-se as percentagens de cobertura de calos aos 45 e 60 dias. Os explantes submetidos aos tratamentos foram analizados por citometria de fluxo e microscopia eletrônica de varredura. Todos os tratamentos induziram endorreduplicação, e não houve variação somaclonal. Na combinação de 2,0 mg L-1 TDZ e 4,0 mg L-1 2,4-D, calos foram formados em 95% dos explantes, mas foram menores do que os produzidos com 2,4-D separadamente. A concentração de 2,0 mg L-1 de TDZ induz organogênese indireta em explantes de pitaia, comprovada pela presença de vasos condutores por meio da microscopia eletrônica de varredura.

Abstract The objective of this work was to evaluate the induction of indirect organogenesis by concentrations of dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and thidiazuron (TDZ) in pitaya (Hylocereus undatus) explants, using scanning electron microscopy and the flow cytometry technique. The treatments consisted of the concentrations of 0, 2.0, and 4.0 mg L-1 2,4-D and TDZ and of the combinations of these regulators. Percentages of callus coverage at 45 and 60 days were evaluated. The explants subjected to the treatments were analized by flow cytometry and scanning electron microscopy. All treatments induced endoreduplication, and there was no somaclonal variation. Under the combination of 2.0 mg L-1 TDZ and 4.0 mg L-1 2,4-D, calluses were formed in 95% of the explants, but were smaller than those produced with 2,4-D separately. The concentration of 2.0 mg L-1 TDZ induces the indirect organogenesis in pitaya explants, confirmed by the presence of conducting vessels through scanning electron microscopy.

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade da microenxertia de pitaia amarela (Selenicereus megalanthus) sobre diferentes microporta-enxertos, com base em análises de conteúdo de DNA e anatômicas. Os porta-enxertos utilizados foram: pitaia amarela, pitaia branca (Hylocereus undatus), pitaia Saborosa (Selenicereus setaceus), e as variedades Cebra e Orejona de pitaia vermelha (Hylocereus polyrhizus). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com cinco tratamentos e quatro repetições de cinco plantas. Após 30 dias de cultivo, avaliaram-se as seguintes características: comprimento e diâmetro dos microenxertos e dos microporta-enxertos; e comprimento de raízes, percentagem de pegamento e massa fresca dos microenxertos. Realizaram-se análises de citometria de fluxo antes e depois da microenxertia, para verificação da estabilidade genética e da ocorrência de endoreduplicação. Além disso, foram feitos cortes histológicos na região da microenxertia, para verificação das conexões dos vasos e dos tecidos entre o enxerto e o porta-enxerto. Observou-se endoreduplicação em todos os tratamentos. A quantidade de DNA do microenxerto de pitaia amarela aumentou sobre a variedade vermelha Orejona. Verificou-se a presença de conexões de vasos entre os microenxertos e os microporta-enxertos. A pitaia amarela também foi mais vigorosa quando enxertada sobre Orejona. Com base nas análises de conteúdo de DNA e anatômicas, a microenxertia de pitaia amarela in vitro é viável em todos os porta-enxertos utilizados.

Abstract The objective of this work was to evaluate the viability of the micrografting of yellow dragon fruit (Selenicereus megalanthus) on different rootstocks, based on DNA content and anatomical analyses. The used rootstocks were: yellow dragon fruit, white dragon fruit (Hylocereus undatus), Saborosa (Selenicereus setaceus) dragon fruit, and the Cebra and Orejona red dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) varieties. The experimental design was completely randomized with five treatments and four replicates of five plants. After 30 days of cultivation, the following traits were evaluated: length and diameter of the micrografts and microrootstocks; and root length, percentage of setting, and fresh mass of the micrografts. Flow cytometry analyzes were performed before and after micrografting to verify genetic stability and the occurrence of endoreduplication. In addition, histological sections were made in the micrografting region to verify the connections of vessels and tissues between the graft and the rootstock. Endoreduplication was observed in all treatments. The amount of DNA in the yellow dragon fruit micrograft increased on the red Orejona variety. The presence of vessel connections was verified between the micrografts and microrootstocks. The yellow dragon fruit was also more vigorous when grafted on Orejona. Based on DNA content and anatomical analyses, in vitro yellow dragon fruit micrografting is feasible in all used rootstocks.

Objetivou-se induzir a formação de calos em Jatropha curcas L., avaliar a ultraestrutura e o comportamento citoquímico dos calos. Os calos foram induzidos com 2,4-D, picloran, cinetina e BAP: (1) testemunha; (2) 4,52 µM 2,4-D; (3) 9,04 µM 2,4-D; (4) 4,14 µM PIC; (5) 8,28 µM PIC; (6) 4,52 µM 2,4-D + 2,32 µM KIN; (7) 9,04 µM 2,4-D + 4,64 µM KIN; (8) 4,14 µM PIC + 2,32 µM KIN; (9) 8,28 µM PIC + 4,64 µM KIN; (10) 4,52 µM 2,4-D + 2,22 µM BAP; (11) 9,04 µM 2,4-D + 4,44 µM BAP; (12) 4,14 µM PIC + 2,22 µM BAP and (13) 8,28 µM PIC + 4,44 µM BAP. Foi avaliado a porcentagem de cobertura dos explantes por calos (%CEC), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e dupla coloração com carmim acético/azul de evans. A calogênese é otimizada em meio MS acrescido de 4,52 µM de 2,4-D, condição em que pela análise de microscopia eletrônica de varredura e dupla coloração carmim acético/azul de evans há expressão de potencial embriogênico nos calos de J. curcas.

This study aimed to induce callus formation in Jatropha curcas L. and to evaluate the ultrastructure and cytochemical behavior of the calli. Calluses were induced with 2,4-D, picloram-PIC, kinetin (Kin) and BAP: (1) control; (2) 4.52 µM 2,4-D; (3) 9.04 µM 2,4-D; (4) 4.14 µM PIC; (5) 8.28 µM PIC; (6) 4.52 µM 2,4-D + 2.32 µM KIN; (7) 9.04 µM 2,4-D + 4.64 µM KIN; (8) 4.14 µM PIC + 2.32 µM KIN; (9) 8.28 µM PIC + 4.64 µM KIN; (10) 4.52 µM 2,4-D + 2.22 µM BAP; (11) 9.04 µM 2,4-D + 4.44 µM BAP; (12) 4.14 µM PIC + 2.22 µM BAP and (13) 8.28 µM PIC + 4.44 µM BAP. It was evaluated the percent coverage of the explants by callus (% CEC) and performed scanning electron microscopy (SEM) and acetocarmine/Evans blue double staining to analyze the embryogenic potential of the calli. As shown by scanning electron microscopy and acetocarmine/Evans blue staining, we found that J. curcas callus formation was optimal with 4.52 µM of 2,4-D.

Determinou-se o tempo de subcultivo de calos de Jatropha curcas. Uma curva de crescimento dos calos foi estruturada por 16 períodos de cultivo e para cada período foi feita análise ultraestrutural em microscopia eletrônica de transmissão e varredura. O padrão de desenvolvimento dos calos de J. curcas é uma sigmóide com cinco fases e é ao final da desaceleração que deve ser realizada a repicagem, em média aos 28 dias de cultivo. No início do cultivo dos calos, na fase exponencial, as células estão desorganizadas subcelularmente; na fase linear é retomado o metabolismo respiratório por reestruturação das primeiras mitocôndrias, e em meados da fase de desaceleração as células estão completamente ativas, podendo se detectar várias organelas. Este nível organizacional se mantém por toda a fase estacionária, durante a qual pré-embriões somáticos foram identificados. Ao final da fase estacionária começa a desestruturação subcelular, as células entram em processo de senescência, caracterizando a fase de declínio da curva de crescimento de calo de J. curcas.

The aimed was characterization and determining the time for Jatropha curcas callus subculture. The pattern of J. curcas callus development is sigmoidal with 5 distinct phases, and transplantation should be performed at the end of the deceleration phase (approximately day 28). During callus development, it was observed that at the onset of growth in the exponential phase the cells were internally disorganized; in the linear phase, respiratory metabolism was resumed through reorganization of the first mitochondria; and by the mid-deceleration phase, the cells were entirely active, and several organelles were detected. This organizational status was maintained throughout the stationary phase during which somatic pre-embryos were identified. At the end of the stationary phase, intracellular disruption began, and the cells entered senescence, which characterized the decline phase for the J. curcas calli growth curve.

O pinhão-manso (Jatropha curcas L.) vem ganhando importância por seu potencial como insumo ao biodiesel. Estudos visam à adequação agronômica e a cultura de tecidos contribui indiretamente com este aspecto, auxiliando em pesquisas aplicadas como em biotecnologia, em situações que visam à regeneração de plantas. Nesse intuito, é fundamental avaliar, durante os períodos de cultivo dos calos, o comportamento dos metabólitos primários. A massa calogênica, por ocasião da inoculação, não apresentou reserva na forma de carboidratos. Aos 42 dias iniciou a absorção da sacarose do meio, enquanto o acúmulo no explante ocorreu a partir dos 98 dias de cultivo. O teor de aminoácidos foi alto no dia da inoculação e, por volta dos 98 dias, tanto os níveis de aminoácidos quanto os de proteínas decresceram.

The physic nut (Jatropha curcas L.) is gaining importance because of its potential as raw material for biodiesel. Studies aiming the adequacy of agronomic techniques and tissue culture contribute, indirectly, to this aspect, helping applied research as biotechnology, in situations that aim plant regeneration. Therefore, it is essential to evaluate, the behavior of primary metabolites during the callus growing season. The callus mass at the inoculation time showed no carbohydrates reserve. At the 42nd day the sucrose absorption started in the medium, while the accumulation in the explant occurred from the 98th day of cultivation. Amino acid content was high at the inoculation's day and around the 98th day, both amino acids and protein levels decreased.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar aspectos morfológicos externos do fruto, semente, processo germinativo e plântula de Jatropha curcas. Em frutos e sementes foram avaliadas as características: dimensões, tipo, cor, textura, deiscência e número de sementes por fruto, presença de carúncula, formato do embrião e presença do endosperma. No estudo do desenvolvimento pós-seminal e diferenciação das plântulas, as sementes foram colocadas para germinar em meio de cultura MS (Murashige & Skoog). O fruto de Jatropha curcas é seco deiscente, capsular, tricoca, geralmente com três sementes e endocarpo lenhoso. A semente é ovalada, endospérmica, com envoltório liso e presença de carúncula. O embrião possui um par de cotilédones e eixo hipocótilo-radícula cilíndrico e reto. A germinação é epígea.

The objective of this work was to characterize the external morphology of the fruit, seeds, germination process and seedlings of Jatropha curcas. The fruits and seeds had the following characteristics evaluated: size, type, color, texture, dehiscence and number of seeds, presence of caruncle, form of the embryo and presence of the endosperm. To study the post-seminal development and differentiation of seedlings, seeds were placed to germinate in the MS (Murashige & Skoog) culture medium. The fruit of Jatropha curcas is of dry, dehiscent capsular type, generally presenting three seeds and woody endocarp. The seed is oval, endospermic, with smooth coat and the presence of caruncle. The embryo is composed of a pair of cotyledons and the hypocotylradicle axis is cylindrical and straight, with epigeal germination.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do estádio de maturação dos frutos, no desenvolvimento de embriões de pinhão-manso (Jatropha curcas), cultivados em meio MS com diferentes suplementos: sacarose, água de coco e carvão ativado. Os frutos foram coletados, e os embriões de suas sementes extraídos assepticamente. Utilizaram-se duas condições experimentais: embriões oriundos de frutos em três estádios de desenvolvimento (imaturo, maduro e seco), colocados em meio de cultivo MS acrescido de sacarose (0, 15, 30 e 60 g L-1); embriões oriundos de frutos secos, colocados em meio MS acrescido de: 30 g L-1de sacarose, carvão ativado (0, 1, 2 e 3 g L-1) e de água de coco (0, 50, 100, 150, 200 e 250 mL L-1). O material foi mantido por 30 dias em sala de crescimento, sob condições ambientais controladas. Apenas os embriões zigóticos provenientes de frutos imaturos necessitam da suplementação de sacarose para sustentar sua germinação. O melhor desenvolvimento de embriões ocorre em meio MS suplementado com 60 g L-1 de sacarose. A associação de carvão ativado e água de coco proporcionam melhor crescimento de plântulas oriundas de embriões de sementes retiradas de frutos secos.

The objective of this work was to evaluate the influence of maturation stages of physic nut fruits on the development of their embryos cultivated in MS medium supplemented with sucrose, coconut water and activated carbon. Fruits were collected, and their embryos were extracted aseptically. They were submitted to two experimental conditions: embryos from fruits in three development stages (immature, mature and dry) were put into MS medium, supplemented with sucrose (0, 15, 30 and 60 g L-1); embryos derived from dry fruits were put into MS medium supplemented with sucrose 30 g L-1, activated carbon (0, 1, 2 and 3 g L-1), and coconut water (0, 50, 100, 150, 200 e 250 mL L-1). Explants were kept in a growth chamber under controlled conditions during 30 days. Only the zygotic embryos from immature fruits needed sucrose supplementation in the culture medium to sustain germination. Better embryos development occurs in MS medium supplemented with 60 g L-1 of sucrose. The association of activated carbon and coconut water provides better growth of seedlings derived from embryos extracted from seeds of dry fruits.