A infecção pela Chlamydophila abortus (C. abortus) em ruminantes domésticos está relacionada com distúrbios reprodutivos. Apesar de ainda pouco estudada em todo o mundo, a infecção já foi identificada em alguns países europeus e também nos EUA. No Brasil, estudos preliminares demonstraram evidências sorológicas da infecção em alguns rebanhos com baixa prevalência de anticorpos. Até o momento ainda não foi possível a identificação de C. abortus a partir de material biológico proveniente de fêmeas com problemas reprodutivos em rebanhos brasileiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença da C. abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal bovino (n=13), ovino (n=90) e caprino (n=20), e em sêmen ovino (n=10) e caprino (n=5). As amostras biológicas (n=243) foram avaliadas por meio de técnica de PCR desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S RNAr da C. abortus. Um controle interno da reação, que amplifica um fragmento do gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino, foi utilizado para a avaliação da eficiência da extração e da amplificação do DNA nas amostras provenientes de abortamento bovino. Todas as amostras biológicas (n=243) incluídas nesse estudo resultaram negativas para a C. abortus na PCR. O controle interno da reação possibilitou a amplificação de um produto do gene ND5 mitocondrial bovino em todas as amostras de aborto bovino (n=85). Apesar de evidências,,sorológicas indicarem a presença da infecção por C. abortus em rebanhos de ruminantes no Brasil, e considerando o número de amostras biológicas avaliadas, a não identificação de C. abortus nesse estudo sugere que a frequência de sinais clínicos nos animais infectados pode ser baixa ou mesmo ausente.

Chlamydophila abortus (C. abortus) infection is related to reproductive failure in domestic ruminants. Although it has not been well characterized worldwide, this pathogen has already been identified in some European countries and in the USA. In Brazil, preliminary studies have shown serological evidence of C. abortus infection in herds with low antibody prevalence. Until now, the identification of C. abortus in biological samples from females presenting reproductive failures has not been described in Brazilian herds of domestic ruminants. The aim of this study was to evaluate the presence of the C. abortus in a collection of abortions from cattle (n=85), sheep (n=12), and goats (n=8), in samples of vaginal mucus from cows (n=13), sheep (n=90), and goats (n=20), and in semen from sheep (n=10) and goats (n=5). The specimens (n=243) were evaluated using a PCR assay developed to amplify the 16S-23S rRNA intergenic space of C. abortus. A PCR assay with an internal control, which amplifies a fragment from the ND5 gene of bovine mitochondrial DNA, was used in order to evaluate the efficiency of the DNA extraction and of the PCR reaction. All biological samples (n=243) included in this study were negative for C. abortus in the PCR assay. The internal control enabled the amplification of a product from the bovine mitochondrial ND5 gene in all cattle abortion samples (n=85). Given the serological evidence indicating the presence of C. abortus infection in Brazilian herds of domestic ruminants, and considering the wide sampling evaluated, the failure to identify C. abortus in this survey suggests that the frequency of clinical signs in infected animals may be low or even absent.

Chlamydophila abortus (C. abortus) é frequentemente associada a distúrbios reprodutivos em bovinos, ovinos e caprinos. Para o diagnóstico, os métodos de cultivo em ovo embrionado de galinha e em células de linhagem contínua apresentam baixa sensibilidade. A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizada em placenta, órgãos fetais, secreção vaginal e sêmen para o diagnóstico da C. abortus. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um sistema de PCR para a amplificação de um fragmento de 856-pb do gene rRNA da família Chlamydiaceae. A PCR foi avaliada em órgãos de 15 camundongos infectados experimentalmente com a estirpe de referência S26/3 da C. abortus. Os resultados foram comparados com os obtidos em outro sistema de PCR, previamente descrito para o gene Omp2 (outer major protein) da família Chlamydiaceae. Dos 15 camundongos inoculados com C. abortus, 13 (K=0,84, erro padrão=0,20) foram positivos na rRNA PCR e nove (K=0,55, erro padrão=0,18) na Omp2 PCR. O limite de detecção da C. abortus na rRNA PCR (1,05 UFI) foi 100 vezes inferior à Omp2 PCR (105 UFI). A maior sensibilidade em comparação ao sistema de PCR anteriormente descrito, bem como a especificidade demonstrada frente a diferentes microrganismos patogênicos do sistema reprodutivo, abrem a perspectiva da utilização da PCR desenvolvida nesse estudo para o diagnóstico molecular da C. abortus em casos de abortamentos e outros distúrbios reprodutivos em bovinos, ovinos e caprinos.

Chlamydophila abortus (C. abortus) is associated with reproductive problems in cattle, sheep, and goats. Diagnosis of C. abortus using embryonated chicken eggs or immortalized cell lines has a very low sensitivity. Polymerase chain reaction (PCR) assays have been used to detect C. abortus infection in clinical specimens and organ fragments, such as placenta, fetal organs, vaginal secretions, and semen. The aim of this study was to develop a PCR assay for the amplification of an 856-bp fragment of the rRNA gene of the Chlamydiaceae family. The PCR assay was evaluated using organs from 15 mice experimentally infected with the S26/3 reference strain of C. abortus. The results of the rRNA PCR were compared to the results from another PCR system (Omp2 PCR) that has been previously described for the Omp2 (outer major protein) gene from the Chlamydiaceae family. From the 15 C. abortus-inoculated mice, 13 (K=0.84, standard error =0.20) tested positive using the rRNA PCR assay and 9 (K=0.55, standard error=0.18) tested positive using the Omp2 PCR assay. The detection limit, measured using inclusion-forming units (IFU), for C. abortus with the rRNA PCR (1.05 IFU) was 100-fold lower than for the Omp2 PCR (105 IFU). The higher sensitivity of the rRNA PCR, as compared to the previously described PCR assay, and the specificity of the assay, demonstrated using different pathogenic microorganisms of the bovine reproductive system, suggest that the new PCR assay developed in this study can be used for the molecular diagnosis of C. abortus in abortion and other reproductive failures in bovines, caprines, and ovines.

No ano de 2001, 698 amostras de urina foram colhidas aleatoriamente, durante o abate em um frigorífico do Estado do Paraná, Brasil. O exame direto em microscópio de campo escuro foi realizado imediatamente após a colheita. As cinco amostras de urina positivas neste exame foram semeadas em meio EMJH modificado, sendo possível o crescimento de leptospiras em duas (LO-14 e LO-10). As estirpes isoladas foram tipificadas, por painel de anticorpos monoclonais, como mais similares ao perfil das amostras de referência dos sorovares Canicola (LO-14) e Copenhageni (LO-10). No Brasil, inquéritos sorológicos utilizando a prova de soroaglutinação microscópica mostram o predomínio de reações para o sorovar Hardjo em bovinos. Roedores e cães são os reservatórios mais comuns dos sorovares Copenhageni e Canicola, respectivamente. A eliminação dos sorovares Canicola e Copenhageni pela espécie bovina pode resultar em um aumento na ocorrência de casos graves de leptospirose humana, principalmente na população rural.

In 2001, 698 urine samples were randomly collected from cattle at a slaughterhouse in the State of Paraná, Brazil. Direct examination using dark field microscopy was carried out immediately after collection. Five putative positive samples were cultured in modified EMJH medium, yielding two positive cultures (LO-14 and LO-10). Typing with monoclonal antibodies revealed that the two isolates were similar to Canicola (LO-14) and Copenhageni (LO-10). Microscopic agglutination test results show that Hardjo is the most common serovar in cattle in Brazil. Rats and dogs are the common maintenance hosts of serovars Copenhageni and Canicola. The excretion of highly pathogenic serovars such as Copenhageni and Canicola by cattle can represent an increasing risk for severe leptospirosis is large populations, mainly living in rural areas.

Foram estudados 320 eqüinos, machos e fêmeas com idade entre dois a 17 anos, utilizados para tração de carroças na área urbana do município de Londrina (PR). Estes animais eram mantidos, após a jornada diária de serviço, em áreas ou terrenos baldios, localizados na periferia da área urbana do município. Por ocasião do atendimento, realizado entre 1996 e 2005, no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina, nenhum dos animais apresentou sintomas sugestivos de leptospirose, sendo os motivos mais freqüentes, o emagrecimento, a indisposição para o trabalho, a verminose, problemas no sistema locomotor e feridas. A prova de soroaglutinação microscópica (SAM), com 22 sorovares de Leptospira, foi realizada em amostra de soro de todos os animais. O objetivo deste trabalho foi investigar a ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em eqüinos da área urbana do município de Londrina. Foram consideradas positivas 214 (66,88%) amostras de soros com títulos entre 100 e 3200, sendo em 49 (22,90%) detectadas anticorpos contra um único sorovar de Leptospira e em 165 (77,10%) amostras com anticorpos contra dois ou mais sorovares simultâneamente, sendo em 88 (53,33%) destes caracterizado o sorovar mais provável. Anticorpos contra o sorovar Icterohaemorrhagiae foram detectados em 32 (23,36%) animais.

A total of 320 horses were studied in this paper, both male and female, between two and 17 years of age, which were used for traction of wagons in the urban area of the municipality of Londrina (PR). These animals were kept, after their daily work, in abandoned areas or plots, in the outskirts of the urban area of the city. When these animals were attended by the veterinarians, between 1996 and 2005, none of them presented symptoms suggesting leptospirosis. The most frequent reasons for the visit were loss of weight, unwillingness for work, parasitism, laminess, and wounds. Microscopic Seroagglutination Test (SAM), with 22 Leptospira serovars, was performed in sera sample from all these animals. The aim of this study was to investigate the occurrence of antibodies against Leptospira spp. in horses from the urban area of Londrina (PR). From the samples tested, 214 (66.88%) were considered positive, with titers between 100 and 3200, being that 49 (22.90%) presented antibodies against a single serovar of Leptospira, and 165 (77.10%) samples presented antibodies against two or more serovars simultaneously, where in 88 (53.33%) it was possible to characterize the most likely probable serovar. Antibodies against the serovar Icterohaemorrhagiae were detected in 32 (23.36%) animals.

A Chlamydophila abortus (anteriormente classificada como Chlamydia psittaci sorotipo 1) tem sido descrita em muitos países, associada principalmente com distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos. O aborto enzoótico dos ovinos e caprinos e o aborto epizoótico dos bovinos são as doenças mais importantes causadas por esta bactéria. No Brasil, as pesquisas com C. abortus são praticamente inexistentes. O objetivo desta revisão é apresentar informações sobre modificações taxonômicas, ciclo de vida, epidemiologia, patogenia, sinais clínicos e diagnóstico da infecção por C. abortus principalmente em ovinos, bovinos e caprinos.

Chlamydophila abortus (previously known as Chlamydia psittaci serovar 1) has been reported in many countries, associated with reproductive disorders in sheep, cattle, and goats. The enzootic abortion of sheep and goats and the epizootic bovine abortion are the most important diseases produced by this bacterium. In Brazil, there is scarce information about C. abortus. The objective of this review is to show information about taxonomic changes, life cycle, epidemiology, pathogenesis, clinical signs and diagnosis of C. abortus in sheep, cattle and goats.

O objetivo deste trabalho foi detectar leptospiras em fragmentos de rim, fígado e útero de 96 fêmeas bovinas com histórico sanitário desconhecido, escolhidas aleatoriamente durante o abate em um frigorífico no Estado do Paraná, Brasil. Todas as 96 amostras de urina foram submetidas ao exame direto em microscópio de campo escuro. As amostras positivas neste exame e todos os fragmentos de rim, fígado e útero foram semeados nos meios de cultura EMJH modificado e Tween 80/40/LH. Os cortes histológicos de rim, fígado e útero foram submetidos à coloração de Hematoxilina-Eosina (HE) e a prova de imunoperoxidase indireta com soros hiperimunes contra o sorovar Hardjo (Hardjoprajitno) e contra a estirpe Londrina (LO14), do sorovar Canicola, isolada no norte do Paraná, Brasil, utilizados como anticorpo primário. O exame direto detectou leptospiras na urina de quatro animais. Todas as tentativas de isolamento das urinas e fragmentos de rim, fígado e útero foram negativas após 16 semanas de incubação. No exame histopatológico foi observado infiltrado focal de células mononucleares no interstício renal da maioria dos animais. Na prova de imunoperoxidase indireta com o soro hiperimune contra a estirpe LO14, o rim de um animal foi o único a apresentar resultado positivo. Todos os fragmentos de rim, fígado e útero testados com o soro hiperimune contra o sorovar Hardjo foram negativos.

The objective of this trial was to detect leptospires in fragments of kidney, liver and uterus of 96 cows with unknown sanitary status, randomly chosen at slaughter in Paraná, Brazil. All 96 urine samples were submitted to direct examination using dark field microscopy. Positive samples in the direct examination and all kidney, liver and uterus fragments were cultured in EMJH modified medium and Tween 80/40/LH. Sections cut of kidney, liver and uterus were stained by Hematoxylin-Eosin (HE) and indirect immunoperoxidase with hyperimmune serum against serovar Hardjo (Hardjoprajitno) and strain Londrina 14 (LO14), from serovar Canicola, which was isolated in the northern region of Paraná state, Brazil, used as primary antibodies. Direct examination detected leptospires in the urine of four animals. All attempts to isolate leptospires from urine and kidney, liver and uterus fragments were negative after 16 weeks of incubation. In the HE stain, focal infiltrate of mononuclear inflammatory cells was observed in the renal interstitial area of most animals. In the indirect immunoperoxidase assay using hyperimmune serum against LO14 strain, the kidney of only one animal presented positive results. All fragments of kidney, liver and uterus tested with hyperimmune serum against serovar Hardjo were negative.

O isolamento da Leptospira permite o diagnóstico definitivo da infecção. Um dos inconvenientes do cultivo é a contaminação por microrganismos. O objetivo deste trabalho foi descrever o isolamento de Leptospiras de cães, bovinos e suínos naturalmente infectados. Foram utilizadas amostras de urina de 14 cães, três bovinos, e amostras de rim, fígado, ovário e corpo de útero de 36 matrizes suínas de descarte sem histórico sanitário. As amostras de urina e tecidos foram semeadas em meio de cultura. Foi utilizado o meio de cultura Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH) modificado acrescido de 5-fluorouracil, cloranfenicol, vancomicina, ácido nalidíxico e neomicina. A incubação foi realizada a 28°C por 24 horas, seguida de subcultura em EMJH modificado sem antibiótico. Com esta metodologia, foi possível o isolamento de Leptospira spp da urina de 11 cães e dois bovinos e de fragmentos de fígado de dois suínos.

Leptospira isolation allows definitive diagnosis of the infection. Contamination by microorganisms is one of the inconveniences of the culture. The objective of this study was to describe the isolation of Leptospira from dogs, bovine and swine naturally infected. Urine samples from 14 dogs and three bovines, and kidney, liver, ovary, and uterus body samples from 36 slaughtered sows with unknown health history, were used. The urine and organ samples were cultured in culture medium. Modified Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris medium (EMJH) culture medium was used with addition of 5-fluorouracil, chloramphenicol, vancomycin, nalidixic acid and neomycin. Incubation was performed at 28oC for 24 hours, followed by subculture in modified EMJH without antibiotics. The cultures were assessed weekly for up to eight weeks for the dog and swine samples and for up to 16 weeks for the bovine samples. With this methodology, Leptospira spp could be isolated from 11 dogs, two bovines and liver fragments from two sows.