A determinação da viabilidade de bactérias através da técnica tradicional de plaqueamento em meios seletivos de cultura é considerada um processo longo e demorado. Os métodos baseados na atividade enzimática ou na integridade da membrana citoplasmática são mais rápidos e podem ser considerados como alternativas para acessar a viabilidade de bactérias fitopatogênicas. Este trabalho teve o objetivo de avaliar a viabilidade de suspensões de culturas puras da bactéria Clavibacter michiganensis subsp. michiganenesis (Cmm) usando as sondas fluorescentes "Calcein acetoxy methyl ester" (Calcein AM), "carboxyfluorescein diacetate" (cFDA), e "propidium iodide" (PI), em combinação com o citômetro de fluxo. Células de Cmm tratadas à temperatura de 80 °C por 30 min (não viáveis) e células não tratadas (viáveis), marcadas com Calcein AM, cFDA, PI, ou utilizando a combinação das sondas Calcein AM e cFDA com PI, puderam ser distinguidas baseado na intensidade de fluorescência através da análise do citômetro de fluxo. Células não tratadas mostraram nível elevado de intensidade de fluorescência no espectro verde, devido à coloração das células com Calcein AM ou cFDA, enquanto que as células danificadas (não viáveis) mostraram nível elevado de intensidade de fluorescência no espectro vermelho, devido à coloração com PI. O citômetro de fluxo permitiu também a quantificação rápida das células viáveis de Cmm marcadas com Calcein AM ou cFDA e das células tratadas marcadas com PI. Portanto, a aplicação do citômetro de fluxo, em combinação com sondas fluorescentes, parece ser uma técnica promissora para acessar a viabilidade de células de Cmm, quando estas são marcadas com Calcein AM ou utilizando a combinação de Calcein AM com PI.

Determination of the viability of bacteria by the conventional plating technique is a time-consuming process. Methods based on enzyme activity or membrane integrity are much faster and may be good alternatives. Assessment of the viability of suspensions of the plant pathogenic bacterium Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm) using the fluorescent probes Calcein acetoxy methyl ester (Calcein AM), carboxyfluorescein diacetate (cFDA), and propidium iodide (PI) in combination with flow cytometry was evaluated. Heat-treated and viable (non-treated) Cmm cells labeled with Calcein AM, cFDA, PI, or combinations of Calcein AM and cFDA with PI, could be distinguished based on their fluorescence intensity in flow cytometry analysis. Non-treated cells showed relatively high green fluorescence levels due to staining with either Calcein AM or cFDA, whereas damaged cells (heat-treated) showed high red fluorescence levels due to staining with PI. Flow cytometry also allowed a rapid quantification of viable Cmm cells labeled with Calcein AM or cFDA and heat-treated cells labeled with PI. Therefore, the application of flow cytometry in combination with fluorescent probes appears to be a promising technique for assessing viability of Cmm cells when cells are labeled with Calcein AM or the combination of Calcein AM with PI.