Resumo Introdução: A infecção pelo vírus BK (BKV) em pacientes de transplante renal pode levar a disfunção do aloenxerto renal e perda do enxerto. A determinação precisa da carga viral do BKV é fundamental para prevenir a nefropatia associada ao BKV (BKVAN), mas o ponto de corte de melhor valor preditivo para BKVAN ainda é foco de debates. Objetivo: Avaliar o desempenho de um teste de qPCR comercial e outro desenvolvido internamente para detecção quantitativa de vírus BK em receptores de transplante renal. Métodos: O presente estudo prospectivo incluiu receptores de transplante renal de dois grandes hospitais universitários no Brasil. Os pacientes foram testados para infecção por BKV a cada três meses no primeiro ano pós-transplante com um teste comercial de reação em cadeia de polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e outro desenvolvido internamente. A presença de BKVAN foi confirmada com base na histopatologia. A área sob a curva para o qPCR plasmático foi determinada a partir da análise da característica de operação do receptor. Resultados: Um total de 200 pacientes foram incluídos. Cinquenta e oito por cento eram do sexo masculino, 19,5% tinham diabetes mellitus e 82% tiveram seus rins transplantados de doadores falecidos. Viremia de BKV foi detectada em 32,5% dos pacientes e oito (4%) foram diagnosticados com BKVAN. BKVAN foi associada a viremia de 4,1 log cópias/mL usando o kit comercial. O corte para o ensaio interno foi de 6,1 log cópias/mL. A linearidade entre o kit comercial e o ensaio interno foi R2 = 0,83. Conclusão: Nosso estudo demonstrou uma acentuada variabilidade na carga viral de BKV quando diferentes metodologias de qPCR foram utilizadas. O ensaio interno de qPCR mostrou-se clinicamente útil, além de ser uma opção menos onerosa em relação aos kits comerciais de qPCR. Há uma necessidade urgente de se definir padrões de BKV para a comunidade internacional.

Abstract Introduction: BK virus (BKV) infection in renal transplant patients may cause kidney allograft dysfunction and graft loss. Accurate determination of BKV viral load is critical to prevent BKV-associated nephropathy (BKVAN) but the cut-off that best predicts BKVAN remains controversial. Objective: To evaluate the performance of a commercial and an in-house qPCR test for quantitative detection of BK virus in kidney transplant recipients. Methods: This was a prospective study with kidney transplant recipients from two large university hospitals in Brazil. Patients were screened for BKV infection every 3 months in the first year post-transplant with a commercial and an in-house real time polymerase chain reaction (qPCR) test. BKVAN was confirmed based on histopathology. The area under the curve for plasma qPCR was determined from receiver operating characteristic analysis. Results: A total of 200 patients were enrolled. Fifty-eight percent were male, 19.5% had diabetes mellitus, and 82% had the kidney transplanted from a deceased donor. BKV viremia was detected in 32.5% and BKVAN was diagnosed in 8 patients (4%). BKVAN was associated with viremia of 4.1 log copies/mL, using a commercial kit. The cut-off for the in-house assay was 6.1 log copies/mL. The linearity between the commercial kit and the in-house assay was R2=0.83. Conclusion: Our study shows that marked variability occurs in BKV viral load when different qPCR methodologies are used. The in-house qPCR assay proved clinically useful, a cheaper option in comparison to commercial qPCR kits. There is an urgent need to make BKV standards available to the international community.

Uncaria tomentosa (Willd.) DC. e Uncaria guianensis (Aubl.) Gmel., conhecidas comercialmente como unha-de-gato, são trepadeiras lenhosas nativas das florestas tropicais amazônica e central-americana. Essas espécies de Rubiaceae enfrentam ultimamente um eminente risco de extinção devido tanto ao extrativismo indiscriminado quanto ao desflorestamento de seus habitats naturais. Esse trabalho descreve métodos de cultivo in vitro para as duas espécies, analisando o perfil e o teor dos alcalóides oxindólicos pentacíclicos marcadores por CLAE no material vegetal obtido. Os resultados mostraram que os métodos desenvolvidos foram capazes de produzir plantas com perfil e teor dos alcalóides alvos similares à plantas nativas e cultivadas in vivo, com a vantagem adicional de produção em menor tempo de mudas próprias para plantio no campo. Os dados evidenciaram que o cultivo in vitro pode ser uma ferramenta viável para a produção das duas espécies com impacto na sua comercialização e na preservação das florestas.

Uncaria tomentosa (Willd.) DC. and Uncaria guianensis (Aubl.) Gmel., commercially known as cat's claw, are large woody vines native of the Amazon and Central America rainforests. These Rubiaceae species face nowadays an imminent risk of extinction due to indiscriminate harvesting in the wild as well as to increasing deforestation of their natural habitat. This work describes in vitro cultivation methods for both species with determination, by HPLC, of the pentacyclic oxindole alkaloid contents and profiles of the plant material. The results have proved that the methods we developed were able to produce plants with alkaloid profiles and contents similar to the wild and in vivo cultivated species, and with the additional advantage of producing suitable young plants in a shorter period of time. The data showed that the in vitro technique can be a feasible tool for the growth of the species, and may thus be important for their commercialization and for their conservation as a forest resource.

O gênero Uncaria (Rubiaceae) é representado na América do Sul e Central por duas espécies: U. tomentosa (Willd.) DC. e U. guianensis (Aubl.) Gmel., conhecidas popularmente como unha-de-gato. Ambas são trepadeiras perenes, sendo empregadas na prevenção e cura de várias doenças. Nessas plantas são encontrados alcalóides oxindólicos e indólicos, triterpenos glicosilados, taninos e flavonóides. Seis alcalóides oxindólicos pentacíclicos, considerados seus marcadores: especiofilina, mitrafilina, uncarina F, isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina, são usados na padronização do material vegetal e fitoterápicos derivados. O presente trabalho descreve o desenvolvimento de metodologia analítica qualitativa utilizando cromatografia em camada delgada (CCD) para determinação do perfil dos seis alcalóides oxindólicos pentacíclicos marcadores das espécies. O desenvolvimento do método incluiu a comparação entre o uso do extrato metanólico bruto, e de frações enriquecidas obtidas por partição ácido-base clássica ou pelo uso de resina básica Poliamida 6. Utilizou-se gel de sílica como fase estacionária, e variaram-se alguns parâmetros como: eluentes, concentração da amostra, espaço de eluição e tipos de reveladores. O método desenvolvido em CCD mostrou-se confiável, reprodutível e seletivo para os alcalóides alvos, sendo aplicado na análise de amostras de folhas e caule das duas espécies e também de fitoterápicos comerciais à base de U. tomentosa.

The species Uncaria tomentosa (Willd.) DC. and U. guianensis Gmel. (Rubiaceae), known as cat's claw, are large woody vines occurring in the Amazon rain forest and other tropical areas of South and Central America. It has been used medicinally by indigenous peoples for at least 2,000 years for several diseases. Tetra- and pentacyclic oxindole alkaloids, triterpenoid glycosides, sterols and flavonoids are found in these plants. Among these metabolites, six pentacyclic oxindole alkaloids, speciophylline, mitraphylline, pteropodine, uncarine F, isopteropodine and isomitraphylline, are considered to be the biochemical markers and are used to standardize commercial herbal medicines. The present study describes the development of an analytical methodology to determine the profile of these alkaloid markers through thin layer chromatography (TLC). This development has also included a comparison among the use of the crude methanol extract and fractions obtained through the classical acid-base partition or by using the basic resin Polyamide 6. Silica gel was used as stationary phase with the variation of some parameters such as solvent systems, sample concentration, distance of development and detection method. The TLC method developed was shown to be reliable, reproducible and selective for the target alkaloids. It has been applied to the analysis of leaves and stems from both species as well as phytopharmaceutical derivatives based on U. tomentosa.

Este experimento foi realizado para verificar o efeito da aplicação de diferentes doses de um análogo de GnRH (buserelina) sobre a emergência de nova onda de crescimento folicular e o número de folículos recrutados dessa onda, a formação de corpo lúteo acessório, o diâmetro do folículo dominante e do corpo lúteo espontâneo no dia da aplicação do luteolítico e subseqüente taxa de sincronização e o intervalo da aplicação de PGF2α à manifestação do estro. Vinte fêmeas bovinas em diestro, mestiças Holandês x Zebu e Simental x Zebu foram, distribuídas em quatro tratamentos contendo cinco animais cada. No tratamento 1, os animais receberam 4 mg IM de buserelina no dia z 0 (dia em que se iniciou o tratamento) e 150 mg de D(+) cloprostenol no dia 6. Nos tratamentos 2, 3 e 4, receberam, respectivamente, 6, 8 e 10 mg de buserelina, pela mesma via de aplicação, e 150mg de D(+) cloprostenol no dia 6. A atividade ovariana foi monitorada diariamente, com auxílio do aparelho de ultra-sonografia, do dia 0 ao estro, ou até o dia 11 pós-tratamento, naqueles animais que não responderam à prostaglandina. A aplicação de 8 ou 10 mg de buserelina em fase indeterminada do diestro, nas fêmeas bovinas mestiças, promoveu emergência de nova onda de crescimento folicular mais rápida que aplicações de 4 ou 6 mg do mesmo hormônio; enquanto os outros parâmetros avaliados não diferiram entre os animais dos tratamentos.

This experiment was carried out to verify the effect of the administration of different doses of GnRH (buserelin) analogue on the emergence of a new follicular growth wave and the number of recruited follicles from this wave, accessory corpus luteum formation, the dominant follicle diameter and the spontaneous corpus luteum on the luteolitic administration day and subsequent synchronization rate and the interval between the PGF2α application and the estrus manifestation. Twenty crossbreed female cattle in diestrus, crossbred Holstein x Zebu and Simental x Zebu were allotted to four treatment groups, each containing five animals. In the treatment 1 the animals received 4 mg IM. of buserelin at day 0 (day in which the treatment began) and 150 mg of D (+) Cloprostenol at day 6. In treatments 2, 3 and 4, the animals received 6, 8 and 10 mg of buserelin, respectively, by the same application way, and 150 mg of D (+) Cloprostenol at day 6. The ovarian activity was daily monitored, with the help of an ultra-sound machine, from day 0 to estrus or until day 11 on those animals, which did not answer to prostaglandin. The application of 8 or 10 mg of buserelin at an unknown phase of diestrus, in female crossbred cattle, promoted an emergence of a new follicular growth wave faster than the applications of 4 or 6 mg of the same hormones, while the other evaluated parameters did not differ among treatments.