RESUMO O presente estudo avaliou o efeito da suplementação com OmniGen-AF® na proliferação de linfócitos e títulos de anticorpos após vacinação em bovinos leiteiros. Amostras de sangue periférico foram coletadas de 32 vacas leiteiras para quantificação dos títulos de anticorpos anti-Leptospira, e amostras de sangue periférico de 16 vacas leiteiras foram também coletadas para avaliação da proliferação de linfócitos. Observou-se que a suplementação com OmniGen-AF® aumentou a proliferação basal de linfócitos (sem estímulos) 21 dias após a vacinação (P=0,03), apesar de reduzir a proliferação de linfócitos B quando estimulada com Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo inativada pelo calor (P=0,03). Ademais, nenhum efeito da suplementação sobre a proliferação de linfócitos no momento imediatamente anterior à vacinação e nos títulos de anticorpos anti-Leptospira foi encontrado. Além disso, a proliferação de linfócitos estimulada com lipopolissacarídeos foi maior em vacas multíparas que em primíparas 21 dias após a vacinação (P=0,03). Desse modo, o presente estudo demonstra que a suplementação com OmniGen-AF® não afetou de forma robusta a proliferação de linfócitos e os títulos de anticorpos anti-Leptospira após vacinação em vacas leiteiras sadias.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.

RESUMO O presente estudo objetivou avaliar o perfil das Ig durante os diferentes tratamentos de vacas com mastite clínica. Para isso, 30 vacas com mastite clínica em um quarto mamário foram utilizadas e divididas em três grupos. O primeiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento combinado com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma após cada ordenha, totalizando três aplicações e administração intramuscular de 2,5mg/kg de enrofloxacina por três dias. O segundo grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento intramamário, com infusão intramamária de 8,5mg de sulfato de cefquinoma, após cada ordenha, totalizando três aplicações. O terceiro grupo foi composto por 10 animais submetidos ao tratamento sistêmico, com 2,5mg/kg de enrofloxacina, durante três dias. As amostras de leite foram coletadas de todos os animais antes dos tratamentos (momento 0), no segundo (momento 1), no quinto (momento 2) e no 12º dia (momento 3) após o término dos tratamentos. Estas foram submetidas à contagem de células somáticas, ao California Mastitis Test (CMT), ao exame bacteriológico e à quantificação das IgG1, IgG2, IgA e IgM. O tratamento combinado foi mais eficaz e precoce na taxa de cura clínica, na redução dos escores de CMT e da contagem de células somáticas. Além disso, os resultados do presente estudo demonstraram que as concentrações lácteas das diferentes classes de Ig, apesar de sua importância biológica, não estão relacionadas ao prognóstico da mastite clínica bovina, ou seja, não podem ser consideradas marcadores robustos associados à cura clínica e/ou bacteriológica da infecção intramamária.

ABSTRACT The present study aimed to evaluate the profile of immunoglobins profile, clinical and bacteriological cure after different treatment routes of clinical bovine mastitis. Here, 30 Holstein cows with clinical mastitis in one quarter were uniformly divided into: 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings and 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 1); 10 dairy cows that received 8.5mg of cefquinome sulphate administrated intramammarily during three consecutive milkings (Group 2); and 10 dairy cows that received 2.5mg/kg of enrofloxacin administrated parenterally during three consecutive days (Group 3). Milk samples for somatic cell count, California Mastitis Test (CMT), bacteriological culture and quantification of IgG1, IgG2, IgM and IgA were collected before antimicrobial treatment, and after two, five and 12 days after the antimicrobial treatment. The combined treatment was more effective in the clinical cure rate, reduction of somatic cell count and CMT scores. Furthermore, the results demonstrated that milk concentration of different Igs classes were not related to prognosis of bovine clinical mastitis, and then cannot be considered as robust markers associated with clinical and bacteriological cures.

RESUMO O presente estudo avaliou o impacto que a orquiectomia, uma intervenção dolorosa comumente realizada durante a criação de bovinos, pode causar na imunidade pulmonar. Para tanto, foram realizadas dosagens de cortisol sérico, bem como a análise de macrófagos alveolares e suas funções (fagocitose e metabolismo oxidativo) de 16 bovinos da raça Holandesa preto e branco (sete meses de idade, 250±50kg de peso vivo). Esses animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos homogêneos - grupo castrado e grupo controle - e foram avaliados nos dias -7, 1 e 7, relativos ao dia do procedimento cirúrgico, que foi realizado no dia 0. A concentração de cortisol sérico aumentou estatisticamente nos dias 1 e 7 em relação ao grupo controle (D-7: 4,97±1,28ng/mL; D1: 6,35 ±1,10ng/mL; D7: 8,28±1,94ng/mL). Notou-se diminuição de macrófagos alveolares no D1 (D-7: 76,86±3,44%; D1: 60,92±2,44%; D7: 74,17±2,56%) e de suas funções de fagocitose (F) e metabolismo oxidativo (MO) nos dias 1 e 7 (F D-7: 56,25±15,63 valores arbitrários; D1: 54,75±14,07 valores arbitrários; D7: 31,77±8,44 valores arbitrários; e MO D-7: 222,34±39,52 valores arbitrários; D1: 135,25±37,68 valores arbitrários, D7: 117,73±18,17 valores arbitrários) para o grupo castrado. Esses resultados demonstram que a orquiectomia afeta as defesas pulmonares por até sete dias após a prática, período superior ao relatado pela literatura.

ABSTRACT The present study evaluated the impact that orchiectomy, a routine but painful intervention in bovine husbandry, can cause on pulmonary immunity. To identify whether orchiectomy can impair lung defense, analyses of serum cortisol concentration and of alveolar macrophage and their function (phagocytosis and respiratory burst) were evaluated. Sixteen Holstein bulls (7 mo old, 250±50kg of body weight BW) were divided in two homogeneous groups - the castrated group and the sham group - and the sample were collected on Days -7, 1 and 7 relative to the day of the procedure. Serum cortisol concentration statistically increased on Days 1 and 7 (D-7: 4,97±1,28ng/ml; D1: 6,35 ±1,10ng/ml; D7: 8,28±1,94ng/ml) after castration and these variables seem to impact the alveolar macrophage percentage on D1 (D-7: 76,86±3,44%; D1: 60,92±2,44%; D7: 74,17±2,56%) and their respective function of phagocytosis (P) and the oxidative burst (OB) on Days 1 and 7 for the castrated group (P D-7: 56,25±15,63 arbitrary values; D1: 54,75±14,07 arbitrary values; D7: 31,77±8,44 arbitrary values; and OB D-7: 222,34±39,52 arbitrary values; D1: 135,25±37,68 arbitrary values; D7: 117,73±18,17 arbitrary values). These results indicate that surgical castration affected lung defense until seven days after the practice, so the pulmonary cell function was impaired for a period higher than that reported in the literature.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a correlação entre a contagem automática de células somáticas (CCS) com a porcentagem de neutrófilos pela técnica de citocentrifugação e pela citometria de fluxo. Para tal, 102 amostras de leite proveniente de 28 vacas da raça Holandesa foram coletadas e submetidas ao isolamento de células do leite e posterior identificação da população de neutrófilos. Após citocentrifugação, os neutrófilos foram identificados por microscopia óptica utilizando-se o corante de Rosenfeld. Os neutrófilos lácteos foram identificados por citometria de fluxo utilizando anticorpo monoclonal específico (CH138A) e anticorpo monoclonal secundário conjugado à ficoeritrina. O presente estudo demonstrou correlação positiva entre a CCS e a porcentagem de neutrófilos por citometria de fluxo (r= 0,625) e pela técnica de citocentrifugação (r= 0,267). Observou-se também correlação positiva entre a porcentagem de neutrófilos pela citometria de fluxo e pela técnica de citocentrifugação (r = 0,496), embora a porcentagem de neutrófilos no leite tenha sido maior pela técnica de citocentrifugação quando comparada com a citometria de fluxo. Deste modo, o presente estudo indica que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico e controle da mastite bovina.

The purpose of the present study was to assess the correlation between the automatic somatic cell count (SCC) and the percentage of neutrophils through cytocentrifugation technique and flow cytometry. Thus, 102 milk samples from 28 Holstein dairy cows were collected and submitted to milk cell isolation procedures, and afterwards, the neutrophils were identified. After cytocentrigugation, the neutrophils were microscopically identified using the rosenfeld dye. The milk neutrophils were recognized by flow cytometry using primary mouse IgM monoclonal antibody (CH138A) and phycoerytrin (PE) goat anti-mouse IgM antibody. This study found a positive correlation between SCC and the percentage of neutrophils through cytocentrifugation (r= 0.267) and flow cytometry (r= 0.625). A positive correlation was also encountered between the percentage of neutrophils through cytocentrifugation and flow cytometry (r= 0.496), although the percentage of neutrophils was higher in samples submitted to cytocentrifugation. In conclusion, flow cytometry can be a useful tool in the diagnosis and control of mastitis.

A apoptose de leucócitos polimorfonucleares (PMN) é um evento central no processo de resolução da inflamação. Sendo a contagem de células somáticas (CCS) um indicador da situação imunológica da glândula mamária, o presente estudo buscou esclarecer a influência que esses fatores têm um sobre o outro e sobre a evolução do processo inflamatório. Marcaram-se as amostras de leite com anexina-V, iodeto de propídeo (PI), anticorpo anti-CH138A. Encontrou-se correlação negativa entre apoptose de PMN e CCS, além de diferença estatística entre um grupo de alta CCS e um grupo de baixa CCS quanto à taxa de PMN viáveis, em apoptose, em necrose e em necrose e/ou apoptose. De modo geral, o grupo de alta celularidade apresentou menos CH138+ em apoptose e mais células em necrose ou viáveis do que o grupo de baixa celularidade. Conclui-se que apoptose de PMN e CCS estão relacionados, e que em mamas com CCS elevada este evento está diminuído. Apesar de haver maior disponibilidade de fagócitos para a defesa nessa situação, os efeitos anti-inflamatórios da apoptose também estão diminuídos, enquanto os efeitos pró-inflamatórios da necrose estão aumentados, o que pode colaborar com a cronificação da inflamação.

Polymorphonuclear leukocyte (PMNL) apoptosis is central to the successful resolution of inflammation. Since Somatic Cell Count (SCC) is an indicator of the mammary gland's immune status, this study sought to clarify the influence that these factors have on each other and on the evolution of the inflammatory process. Milk samples were stained with annexin-V, propidium iodide (PI), primary antibody anti-CH138A. Negative correlation between SCC and PMNL apoptosis was found, and a statistical difference between high SCC group and low SCC group was observed concerning the rate of viable PMNL, apoptotic PMNL, necrotic PMNL and necrotic and/or apoptotic PMNL. Overall, the high cellularity group presented lower proportions of CH138 + cells undergoing apoptosis and higher proportions of viable and necrotic CH138+ cells. Thus, it can be concluded that PMNL apoptosis and SCC are related factors, and that in high SCC, milk apoptosis is delayed. Although there is a greater amount of active phagocytes in this situation, apoptosis' anti-inflammatory effects are decreased, while necrosis' pro-inflammatory effects are increased, which can contribute to chronic inflammation.

Avaliou-se o risco de infecção em diferentes fases da lactação em 33 ovelhas da raça Santa Inês. Inicialmente a glândula foi submetida ao exame físico e à prova de fundo escuro. Posteriormente, amostras de leite foram coletadas assepticamente para a realização de exame bacteriológico - California Mastitis teste -, e contagens microscópica e automática de células somáticas. Nenhuma diferença foi observada entre as distintas fases de lactação. Observou-se alta persistência de infecções intramamárias, e tendência a maior contagem de células somáticas no último período de lactação, que pode ser oriunda da maior resistência a infecções neste período.

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar diferentes indicadores inflamatórios no diagnóstico da mastite em bovinos. Desta forma, a contagem de células somáticas (CCS) o California Mastitis Test (CMT), a concentração hidrogeniônica (pH), a condutividade elétrica (CE), e o conteúdo de cloretos de 321 amostras de leite provenientes de quartos mamários negativos à prova de fundo escuro e sem nenhuma alteração clínica evidente foram analisadas. Os valores preditivos foram calculados pela sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e razão de probabi lidades utilizando diferentes valores de corte, e considerando o exame bacteriológico como “padrão ouro”. O exame bacteriológico resultou em 46,73% das amostras positivas, sendo o Staphylococcus sp. o principal gênero isolado. A CCS e o CMT apresentaram-se como os melhores testes para o diagnóstico indireto da mastite. No entanto, o pH, a condutividade elétrica e o conteúdo de cloretos não se mostraram como métodos diagnóstico seguros quando utilizados isoladamente.

ABSTRACT The aim of this trial was to evaluate and compare the distinct indictors of inflammation in the diagnosis of mastitis. The somatic cell count (SCC), the California Mastitis Test score, the electrical conductivity, the hydrogen ion concentration (pH), the chloride content and the bacteriological status of 321 milk samples from mammary glands without any clinical signs were analyzed. Their predictor value as an indicator of inflammation was calculated considering the bacteriologic examination as the gold standard test. Then, the sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and likelihood ratio at various cut-off values were established. The bacteriologic exam resulted in 46.73% of the samples being positive, with Staphylococcus sp. the main genus isolated. The SCC and CMT proved to be the best predictors. On the other hand, pH, electrical conductivity and chloride content did not prove to be reliable diagnostic indicators when used in isolation.

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar diferentes indicadores inflamatórios no diagnóstico da mamite em ovinos da raça Santa Inês. Após a realização do exame físico das mamas e a prova de fundo escuro, foram coletadas e analisadas 390 amostras de leite, sendo as metades mamárias divididas de acordo com o exame bacteriológico e a prova de fundo escuro, resultando em 290 amostras negativas em ambos os exames, 90 amostras negativas à prova de fundo escuro e positivas na cultura bacteriológica, 5 amostras positivas à prova de fundo escuro e negativas ao exame bacteriológico e 3 amostras positivas em ambos os testes. Nestas amostras foram realizadas a contagem automática de células somáticas (CCS), o California Mastitis Test (CMT), a determinação da concentração hidrogeniônica (pH) e dos teores de cloreto e lactose, e ainda a avaliação do índice de cloreto-lactose. Os maiores valores preditivos foram observados para a CCS, CMT e teor de cloreto; o pH, o teor de lactose e o índice cloreto-lactose apresentaram-se como marcadores inflamatórios menos sensíveis, onde se considerou o resultado da cultura bacteriológica como padrão ouro. O exame físico não se mostrou como método diagnóstico seguro quando utilizado isoladamente, exaltando a importância da associação de outros meios diagnósticos indiretos.

ABSTRACT The aim of this trial was to evaluate distinct indictors of inflammation in the diagnosis of mastitis in Santa Ines ewes. The physical examination and the dark bottom cup test were performed. Afterwards, the bacteriologic samples of 390 milk samples were analyzed. The samples were divided according to the bacteriological examination and the dark cup bottom test, resulting in 290 samples negative in both tests, 90 samples positive in the bacteriological examination and negative in the dark cup bottom test, 5 samples positive in the dark cup bottom test and negative in bacteriological culture, and 3 samples positive in both tests. The automatic somatic cell count (SSC), the California mastitis test (CMT), the pH, the chloride and lactose content, and the chloride-lactose number were established. Then, their predictive value as a indicator of inflammation was calculated assuming the bacteriologic examination as the gold standard test. The CCS, CMT and chloride content proved to be the best predictors, while the pH, the lactose content and chloride-lactose number were the least sensitive tests. The physical examination was revealed to be a nonsensitive diagnostic procedure when used as the only procedure to detect the disease, showing that other diagnostics tests are required.

RESUMO Relata-se o caso de uma fêmea caprina nulípara da raça Toggembourg, com 1 ano de idade, que após ser submetida à superovulação com gonadotrofina da menopausa humana (hMG) apresentou mamogênese e lactogênese. Ambas as mamas neoformadas foram naturalmente infectadas com Staphylococcus aureus β-hemolítico e evoluíram clinicamente de formas distintas. A glândula mamária esquerda evoluiu para uma mastite catarral aguda que respondeu positivamente ao tratamento com cloxacilina sódica, enquanto a mama direita evoluiu para mastite flegmonosa gangrenosa, com desprendimento do teto, sendo o tecido mamário restante removido cirurgicamente. O presente relato salienta a importância de não desconsiderar o efeito multitecidual que a terapia hormonal apresenta, o potencial risco da mamogênese induzida em nulíparas e a diversidade nosológica que a mastite pode apresentar, uma vez que o agente etiológico e o hospedeiro eram os mesmos, com resposta inflamatória distinta das mamas.

ABSTRACT This is a case report on a nulliparous Toggenbourg goat, one year of age that, after being submitted to superovulation with human menopause gonadotrophin, presented mammogenesis and lactogenesis. Both neoformed mammary glands were naturally infected with β-hemolytic Staphylococcus aureus and evolved clinically in different forms. The left half evolved to acute catarrhal mastitis that responded positively to treatment using sodium cloxacillin, whereas right mammary gland evolved to phlegmonous gangrenous mastitis, with teat loss. The mammary tissue remaining had to be surgically removed. The present report emphasizes that multi-tissue effect should not be ignored when hormonal therapy is used. The potential risk of induced mammogenesis in nulliparous animals and the nosological diversity that mastitis may present should be considered, once the etiological agent and host were the same, and different inflammatory responses were observed in the two halves.

O papel dos macrófagos alveolares (MA) nos mecanismos de defesa pulmonar foi estudado em cavalos infectados pelo herpesvírus eqüino tipo 1 (EHV-1). Cinco cavalos adultos foram inoculados com 10(6,6) TCID50 do EHV-1, por instilação intranasal. A citologia do lavado broncoalveolar (LBA) foi feita usando-se citocentrifugação das amostras e confecção de lâminas coradas por Rosenfeld. A concentração celular foi ajustada para 2<FONT FACE=Symbol>´</FONT>10(6) células/ml, para mensuração da atividade macrofágica - espraiamento, fagocitose de partículas de zymosan e liberação de peróxido de hidrogênio (H2O2). Observou-se soroconversão no 14º dia pós-inoculação (DPI) e isolamento viral positivo no segundo, terceiro e quinto DPI. Na citologia do LBA observou-se linfocitose no 16º DPI. Os testes de mensuração da atividade macrofágica demonstraram aumento significativo nos índices de espraiamento no 23º e 30º DPI e diminuição no índice de fagocitose no segundo DPI, retornando a valores semelhantes aos observados antes da inoculação a partir do 23º DPI. Houve diminuição na liberação de H2O2 no segundo DPI, e no 16º DPI esses valores retornaram aos observados antes da inoculação. O declínio da atividade fagocítica dos MA, na fase aguda da infecção, indicou que essas células atuam de forma importante nos mecanismos de defesa pulmonar contra esse agente.

The role of the pulmonary alveolar macrophages (PAM) in the lung defense mechanism was evaluated in horses infected with equine hespesvirus-1 (EHV-1). Five adult horses were exposed to 10(6.6) TCID50 EHV-1 by intranasal instillation. Cytology of bronchoalveolar lavage (BAL) was performed using cytocentrifugation of samples and slides stained by Rosenfeld. Cell concentration was adjusted to 2<FONT FACE=Symbol>´</FONT>10(6) cells/ml, for the measurement of macrophage activity - spreading, phagocytosis of zymosan particles and release of hydrogen peroxide (H2O2). All animals were positive in virus isolation on the second, third and fifth days post-inoculation (DPI). Seroconversion was observed on the 14th DPI. Lymphocytosis was observed by BAL cytology on the 16th DPI. Measurement of macrophage activity demonstrated a marked increase in the spreading rate, on the 23rd and 30th DPI. Phagocytosis was decreased on the second DPI, and returned to levels similar to those observed before inoculation on the 23rd DPI. The amount of H2O2 released by PAM declined on day 2, but, by day 16, they returned to values similar to those observed before inoculation. The decline in PAM activity in the acute phase of disease is indirect evidence that these cells have an important role in lung defense mechanisms against this agent.