Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose negligenciada e endêmica presente em todas as regiões do Brasil, mas mesmo assim poucos estudos têm objetivado a detecção inicial da doença. O município de Ourinhos - SP é uma área não receptiva, silenciosa e vulnerável à LV, não havendo até o momento estudos que tenham investigado a soroprevalência no município. Nesse sentido, o presente estudo objetivou determinar a soroprevalência da LV canina em Ourinhos-SP, bem como associar a presença de fatores de risco. Amostras sanguíneas de 604 cães foram obtidas juntamente com a aplicação de questionário socioeconômico, características ambientais e dos animais e conhecimento sobre a doença. As amostras foram submetidas à sorologia por ELISA e novas amostras coletadas de cães reagentes ou suspeitos foram analisadas por método parasitológico direto, hemograma e PCR. Nenhum animal foi considerado positivo na combinação de testes direto e indireto, e as respostas dos tutores indicaram pouco conhecimento sobre a leishmaniose, sendo muitas vezes confundida com outras doenças transmitidas por artrópodes. Dessa forma, de acordo com os métodos propostos, a presença de leishmaniose canina, na cidade de Ourinhos, não foi confirmada. Por isso campanhas de educação em saúde sobre a doença deveriam ser realizadas.

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected and endemic zoonosis that occurs throughout Brazil; nevertheless, few studies have focused on the early detection of the disease. The municipality of Ourinhos is a non-receptive, silent and vulnerable area for VL, where the seroprevalence of this disease has so far not been investigated. The present study aimed to determine the seroprevalence of canine VL in Ourinhos-SP, and to identify the presence of risk factors. Blood samples were obtained from 604 dogs during a rabies vaccination campaign together with application of a socioeconomic questionnaire, environmental and animal characteristics and tutor's knowledge about the disease. The samples were subjected to indirect ELISA and new samples were collected from reactive and suspect animals, including whole blood and lymph node aspiration evaluated by parasitological method, complete blood count and PCR. No animal was diagnosed as positive based on the combination of direct and indirect tests and the tutors' answers indicated little knowledge about leishmaniasis, being often confused with other diseases transmitted by arthropods; hence, according to the proposed methods, the presence of canine leishmaniasis in the city of Ourinhos was not confirmed and health education campaigns about the disease should be carried out.

Resumo Leishmaniose é um grande problema de saúde pública global. Devido à adaptação de Leishmania a novos hospedeiros ou vetores, conhecimentos sobre o agente etiológico atual em cães é importante em áreas endêmicas. Este estudo teve como objetivo identificar as espécies de Leishmania detectadas em 103 amostras de sangue periférico de cães naturalmente infectados com este protozoário. O diagnóstico de leishmaniose foi determinado por exame parasitológico, ensaio imunoenzimático (ELISA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). A identificação das espécies de Leishmania foi realizada por PCR – seguido da análise do polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP). As amostras foram submetidas a PCR utilizando-se iniciadores oligonucleotídicos que amplificam a região intergénica ITS1 do gene de rRNA para identificar as espécies, o DNA amplificado foi digerido com a enzima de restrição HaeIII. Observou-se que 77/103 amostras mostraram um perfil de restrição idênticos a L. amazonensis, 17/103 foram semelhantes para L. infantum; 09/103 mostraram um perfil misto, o que impediu a identificação da espécie. Em conclusão, a infecção nestes cães era predominantemente devido a L. amazonensis, indicando que o diagnóstico de casos de leishmaniose canina precisa ser reexaminada, já que o agente causador não está restrito a L. infantum.

Abstract Leishmaniasis is a major public health problem worldwide. Because Leishmania can adapt to new hosts or vectors, knowledge concerning the current etiological agent in dogs is important in endemic areas. This study aimed to identify the Leishmania species detected in 103 samples of peripheral blood from dogs that were naturally infected with these protozoa. The diagnosis of leishmaniasis was determined through parasitological examination, the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the polymerase chain reaction (PCR). The Leishmania species were identified by means of PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The samples were subjected to PCR using oligonucleotide primers that amplify the intergenic region ITS1 of the rRNA gene in order to identify the species. The amplified DNA was digested using the restriction enzyme HaeIII. A restriction profile identical to L. amazonensis was shown in 77/103 samples and the profile was similar to L. infantum in 17/103. However, a mixed profile was shown in 9/103 samples, which impeded species identification. In conclusion, the infection in these dogs was predominantly due to L. amazonensis, thus indicating that diagnosing of cases of canine leishmaniasis needs to be reexamined, since the causative agent identified is not restricted to L. infantum.

Resumo Uma das medidas de controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se baseia na identificação e eliminação do reservatório canino. Existe considerável controvérsia relativa a esta estratégia incluindo a correta identificação dos cães positivos e a variação temporal da relação hospedeiro-parasita, o que torna esta medida ainda mais desafiadora. Uma coorte dinâmica de 62 cães foi acompanhada trimestralmente utilizando-se métodos sorológicos, parasitológicos e a PCR. A taxa de positividade por PCR foi maior em comparação à dos métodos sorológicos e parasitológicos, e mostrou tendência à diminuição com o passar do tempo, enquanto que a positividade sorológica apresentou tendência a aumento, após seis meses. Observou-se positividade concomitante em todos os testes em 10,4% das amostras e, negatividade concomitante, em 29,1%. A sensibilidade geral variou de 43,6% a 64,1%, não sendo uniforme ao longo do estudo. A proporção de cães com e sem sinais clínicos que foram positivos ao exame parasitológico ou à PCR não foi estatisticamente diferente. Contudo, foi possível identificar como positivos um maior número de animais assintomáticos por meio da técnica de PCR, em comparação aos testes ELISA e imunocromatográfico. A PCR pode ser bastante útil para a vigilância epidemiológica de áreas onde casos de LV canina ainda não tenham sido descritos e onde estratégias de controle podem ser implantadas para limitar a disseminação da doença. Não obstante o avanço nas ferramentas diagnósticas, diagnosticar a LVC continua um desafio.

Abstract One of the measures to control visceral leishmaniosis (VL) in Brazil is the identification and culling of the canine reservoir. There is much controversy concerning this strategy, including the proper identification of positive dogs and the fact that the host-parasite relationship changes over time make it more challenging. A dynamic cohort of 62 dogs was followed every three months using serological and parasitological examinations and PCR. Positivity by PCR was higher than by serology and by parasitological examinations and showed a tendency to decrease over time, while serology tended to increase after six months. Concomitant positivity in all tests was observed in 10.4% of the samples, and negativity in 29.1%. Overall sensitivity ranged from 43.6 to 64.1%, and was not uniform over time. The proportion of dogs with or without clinical signs was not different by cytology or PCR but PCR was able to identify a larger number of asymptomatic dogs compared to ELISA and immunochromatography. PCR can be useful for surveillance of areas where cases of canine VL have not yet been detected and in which control strategies can be implemented to limit the spread of the disease. Despite the advance in diagnostic tools CVL diagnosis remains a challenge.

Introduction: The aim of this study was to evaluate the serological cross-reactivity between Leishmania sp. and other canine pathogens. Methods: Positive serum samples for Ehrlichia canis, Babesia canis, Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Trypanosoma cruzi were tested using three serological methods enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and Kalazar Detect™, for canine visceral leishmaniasis. Results: Of the 57 dog samples tested, 24 (42.1%) tested positive using one of the three serological methods: 10/57 (17.5%) for ELISA, 11/57 (19.3%) for IFAT and 3/57 (5.3%) for Kalazar Detect™. Conclusions: Our results demonstrated that the presence of other infectious agents may lead to cross-reactivity on leishmaniasis serological tests.

Neste trabalho, é relatada a infecção natural por Leishmania em um gato doméstico no qual, formas amastigotas do parasito foram observadas em imprint de linfonodo poplíteo. Reações sorológicas positivas e negativas foram observadas pelo teste de imunoadsorção enzimática (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), respectivamente. A reação em cadeia da polimerase (PCR) revelou que a sequência de nucleotídeos foi idêntica à Leishmania (L.) chagasi. Este é o primeiro relato da doença em felino da cidade de Andradina, Estado de São Paulo, Brasil, área considerada endêmica para leishmaniose visceral canina e humana.

This work describes natural infection by Leishmania in a domestic cat where amastigote forms of the parasite were observed in the popliteal lymph node imprint. Positive and negative serological reactions were observed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA), respectively. Polymerase chain reaction (PCR) revealed that the nucleotide sequence of the sample was identical to Leishmania (L.) chagasi. This is the first report of the disease in felines of the city of Andradina, SP, an area considered endemic for canine and human visceral leishmaniasis.

Um ensaio de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Leishmania chagasi, utilizando antígeno total de formas promastigotas lisados foi desenvolvido. Cinqüenta cães com sintomas clínicos de leishmaniose visceral foram examinados. Esta técnica utilizou anti-IgG de cão conjugado a peroxidase ou proteína A conjugado a peroxidase. Foi verificado que nos animais positivos diagnosticados por exame parasitológico direto o ensaio ELISA utilizando proteína A conjugada a peroxidase (média da densidade óptica ± desvio padrão 2,078 ± 0,631) detecta mais anticorpos do que o sistema utilizando anti-IgG de cão conjugado a peroxidase (média da densidade óptica ± desvio padrão 1,008 ± 0,437), enquanto para os animais negativos o resultado obtido nos dois sistemas de detecção são similares. Esse resultado sugere que o sistema de ELISA utilizando proteína A conjugado a peroxidase pode ser útil na detecção de animais na fase aguda da infecção e desta forma auxiliar na identificação dos animais positivos e no controle desta importante zoonose.

A rapid indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for measuring antibodies against Leishmania chagasi using total antigen from lysed promastigotes. Fifty symptomatic mixed breed dogs from a region of high incidence of visceral leishmaniasis in Brazil were examined. The results showed that in the positive animals, diagnosed by cytological examination, the ELISA using protein A assay system (mean optical density ± SD / 2.078 ± 0.631) detected more antibodies than the anti-IgG assay (mean optical density ± SD / 1.008 ± 0.437), while in the negative animals, the results by both systems were similar. These results suggest that the ELISA assay using protein A peroxidase conjugated could be useful to detect early infected animals in endemic areas, and thus help to control the spread of the infection.