ABSTRACT The aim of this study was to determine the occurrence of mutations in the quinolone resistance-determining regions (QRDRs) of the genes gyrA and parC in M. gallisepticum positive field samples from broiler flocks in Ecuador. DNA was extracted from 24 M. gallisepticum PCR-positive samples from 22 commercial broiler flocks. The genes gyrA and parC were amplified by PCR. PCR products were sequenced by Sanger technology to analyze the genetic characteristics. To identify the mutations involved in fluoroquinolone resistance (FQR), the sequences obtained were processed and analyzed using the tools Geneious R11, BLASTn, MAFFT, ExPASy MBWS, and BioEdit. All samples had mutations in both gyrA and parC genes, resulting in changes at amino acid positions Ser-83→Ile and Ile-157→Val in GyrA, and Ser-80→Trp in ParC. In addition, a change at position His-59→Tyr in GyrA was also found in one sample. The results showed that alterations in both genes have been commonly linked to FQR in mutants of other Mycoplasma species, including M. gallisepticum. This is the first study on M. gallisepticum positive samples from chickens in Ecuador which revealed the occurrence of mutations resulting in amino acid changes previously linked to FQR.

RESUMEN El objetivo de este estudio fue investigar la ocurrencia de mutaciones en las regiones determinantes de resistencia a quinolonas (QRDR de sus siglas en Inglés) de los genes gyrA y parC en muestras de campo positivas para M. gallisepticum, procedentes de parvadas de pollos de Ecuador. Se extrajo el ADN de 24 muestras positivas por PCR a M. gallisepticum de 22 parvadas de pollos de engorde de crianza comercial. Los genes gyrA y parC se amplificaron por PCR. Para analizar las características genéticas, los productos de PCR se secuenciaron por tecnología Sanger. Para identificar mutaciones involucradas en resistencia a fluoroquinolonas (FQR), las secuencias obtenidas se procesaron y analizaron utilizando las herramientas Geneious R11, BLASTn, MAFFT, ExPASy MBWS y BioEdit. Todas las muestras presentaron mutaciones, tanto en los genes gyrA como parC, lo que resultó en cambios en las posiciones de aminoácidos Ser-83→Ile e Ile-157→Val en GyrA, y Ser-80→Trp en ParC. Además, también se encontró en una muestra un cambio en la posición His-59→Tyr en GyrA. Los resultados mostraron que las alteraciones en ambos genes se han relacionado comúnmente con FQR en mutantes de otras especies de Mycoplasma, incluido M. gallisepticum. Este es el primer estudio en muestras positivas de M. gallisepticum de pollos en Ecuador que reveló la aparición de mutaciones que resultaron en cambios en aminoácidos, previamente vinculados a FQR.

ABSTRACT The presence of polymerase chain reaction (PCR) inhibitory substances in cell cultures and raw materials used in the manufacture of monoclonal antibodies could limit the usefulness of this method to detect mycoplasma contamination. The objective of this research was to determine the sensitivity and specificity of a PCR method to detect mycoplasma deoxyribonucleic acid (DNA) in MDCK and HeLa cell lines, hybridoma cells, ascitic fluid and cell supernatant containing monoclonal antibodies. The effect of a thermal shock-based mycoplasma DNA extraction method on PCR sensitivity, as well as the performance of two mycoplasma DNA purification methods: silica/guanidinium thiocyanate and a commercial DNA purification kit, were evaluated. In addition, an internal amplification control (IAC) was optimized to detect inhibitory samples from these matrices after thermal shock treatment. PCR-IAC was specific for the amplification of mycoplasma DNA. The inclusion of IAC plasmid at the concentration selected did not decrease the sensitivity of PCR in mycoplasma-spiked matrices. Seventy-eight samples were analyzed; all represented the matrices under study. As a result, all matrices showed PCR inhibition after thermal shock. The inhibitory effect decreased when silica/guanidinium thiocyanate or commercial DNA purification kit was used. PCR-IAC detected 65 % of inhibitory samples and revealed differential susceptibility to inhibitors among different samples of the same matrix.

RESUMEN La presencia de sustancias inhibitorias de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en cultivos celulares y materias primas usadas en la fabricación de anticuerpos monoclonales podría limitar la utilidad de esta técnica para detectar la contaminación por micoplasmas. El objetivo de esta investigación fue determinar la sensibilidad y la especificidad de un método de PCR para detectar ácido desorribunucleico (ADN) de micoplasma en las líneas celulares MDCK y HELA, en células de hibridoma, en líquido ascítico y en sobrenadante celular que contenía un anticuerpo monoclonal. Se evaluaron el efecto de un método de extracción de ADN micoplásmico, basado en choque térmico sobre la sensibilidad de la PCR, así como el desempeño de dos métodos de purificación de ADN micoplásmico: sílice / tiocianato de guanidinio y un kit comercial de purificación de ADN. Además, se optimizó un control de amplificación interno (CAI) para detectar muestras inhibitorias de estas matrices después del tratamiento de choque térmico. La PCR-CAI fue específica para la amplificación del ADN de micoplasma; la inclusión del plásmido CAI a la concentración seleccionada no disminuyó la sensibilidad de la PCR en las matrices experimentalmente contaminadas con micoplasma. Se analizaron 78 muestras; todas representaron las matrices en estudio. Como resultado, todas las matrices mostraron inhibición de la PCR después del choque térmico. El efecto inhibitorio disminuyó cuando se utilizó sílice / tiocianato de guanidinio o el kit comercial de purificación de ADN. La PCR-CAI detectó 65 % de muestras inhibitorias y puso en evidencia una susceptibilidad diferencial a los inhibidores entre diferentes muestras de una misma matriz.

ABSTRACT Dogs can be affected by several species of the genus Babesia causing important diseases in different regions of the world. Among these species are Babesia canis, B. vogeli, B. rossi, B. gibsoni, and B. vulves. The aim of this study was to detect the presence of Babesia spp. in stray dogs from Havana province. Sixty dogs were studied and subjected to haematological examination, blood smear and PCR, which amplified 18S rRNA. Three animals (5 %) showed hematocrit values higher than reference values while 23 (38.3 %) showed lower hematocrit values, indicating the presence of an anemic syndrome in those dogs. According to the leukogram analysis, five dogs (8.3 %) had leukocytosis and 7 (11.6 %) had leukopenia. Thirty-one animals were infested with Rhipicephalus sanguineus sensu lato ticks and 10 were co-infested with Rhipicepahalus microplus ticks. Twenty percent of the samples tested positive by PCR, while microscopic examination revealed Babesia spp. merozoites in only 13.3 % of the samples. A relationship was observed between PCR-positive animals and the decrease in hematocrit value. There was no association between the presence of ticks and sex in animals positive to Babesia spp. The present study demonstrates the presence of Babesia spp. in stray dogs from Havana province.

RESUMEN Los perros pueden ser afectados por varias especies del género Babesia que causan enfermedades importantes en diferentes regiones del mundo. Dentro de estas especies se encuentran Babesia canis, B. vogeli, B. rossi, B. gibsoni y B. vulves. El presente trabajo tuvo como objetivo detectar la presencia de Babesia spp. en perros sin dueño de La Habana. Se estudiaron 60 perros, a los que se les realizó examen hematológico, frotis sanguíneo y PCR, que amplifica el ARNr 18S. Tres animales (5 %) presentaron valores de hematocrito superiores a los valores de referencia y 23 (38,3 %) mostraron valores de hematocrito inferiores, lo que indica la presencia de un síndrome anémico en estos perros. Como resultado del leucograma, cinco perros (8,3 %) tenían leucocitosis y 7 (11,6 %) leucopenia; 31 animales estaban infestados con garrapatas Rhipicephalus sanguineus sensu lato y 10 estaban coinfestados con Rhipicepahalus microplus. El 20 % de las muestras fueron positivas por PCR, mientras que en la examinación microscópica solo en el 13,3 % de las muestras se observaron merozoitos de Babesia spp. Se observó relación entre los animales positivos por PCR y la disminución del valor del hematocrito. No existió asociación entre la presencia de garrapatas y el sexo en los animales positivos a Babesia spp. El presente estudio demuestra la presencia de Babesia spp. en perros sin dueño de La Habana.

ABSTRACT Toxoplasmosis is an important zoonosis due to its impact on human and animal health. Toxoplasma gondii is the causal agent of this disease. This protozoan has a complex biological cycle in which felines are the definitive hosts. The objective of this study was to evaluate the seropositivity to T. gondii in cats from Güines municipality, Mayabeque province, as well as to characterize the breeding practices of their owners and determine the main clinical symptoms in seropositive cats. . Thirty cats (19 females and 11 males) were studied. A total of 96.7 % (29/30) were seropositive to T. gondii, with no significant differences between sexes. The survey showed that 86.6 % (26/30) of the animals lived with other cats and went out on the streets daily. In addition, 52.6 % females and 100 % males were not sterilized. Paleness of visible mucous membranes was the most frequently observed sign (12/29, 41.37 %) in seropositive cats. It is concluded that there is a high frequency of positivity to Toxoplasma gondii in cats from Güines municipality, favored by certain breeding practices which increase the risk of exposure to T. gondii, benefit the dispersion of the protozoan and even represent the insufficient knowledge of their owners to adopt preventive measures against zoonosis. From the clinical signs observed, there is a need to improve tenure systems with implications for human and animal health and welfare, based on the One Health approach.

RESUMEN La toxoplasmosis es una importante zoonosis debido a su impacto en la salud humana y animal. Toxoplasma gondii es el agente causal de esta enfermedad. Este protozoo presenta un ciclo bilógico complejo en el cual los felinos constituyen los hospederos definitivos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la seropositividad a T. gondii en gatos del municipio Güines, provincia Mayabeque, así como caracterizar las prácticas de crianza de sus propietarios y determinar las manifestaciones clínicas en los gatos seropositivos. Se estudiaron 30 gatos, 19 hembras y 11 machos. El 96,7 % (29/30) resultaron seropositivos a T. gondii, sin diferencias significativas entre sexos. En la encuesta realizada se obtuvo que el 86,6 % (26/30) de los animales convivían con otros gatosy acudían a la calle diariamente. Además, el 52,6 % de las hembras y el 100 % de los machos no estaban esterilizados. La palidez de las mucosas visibles fue el signo observado con mayor frecuencia (41,37 %) 12/29 en los gatos seropositivos. Se concluye que existe una alta frecuencia de seropositividad a Toxoplasma gondii en gatos de Güines, favorecida por determinadas prácticas de crianza que aumentan el riesgo de exposición a T. gondii, benefician la dispersión del protozoo y constituyen un reflejo de la insuficiencia de conocimiento de sus propietarios para adoptar medidas de prevención ante esta zoonosis. A partir de los signos clínicos observados, se considera la necesidad de mejorar el sistema de tenencia con implicaciones en el bienestar y la salud humana y animal, con el enfoque de Una Salud.

ABSTRACT Canine hemoplasmosis is a disease caused by hemotrophic mycoplasmas (hemoplasmas) that affects dogs regardless of breed or age. These agents (formerly belonging to the genera Haemobartonella and Eperythrozoon) are obligate eperythrocytic bacteria that can induce anemia in the infected host and are recognized for their zoonotic potential. The objective of the present study was to detect the presence of hemoplasma compatible structures in populations of non-domiciled dogs in Havana province, Cuba. Samples were collected from 124 dogs from 11 municipalities of this province. Diagnosis was carried out by observation of blood smears stained with Giemsa and by polymerase chain reaction (PCR), amplifying a region of the 16S rRNA gene of the class Mollicutes. Hemoplasma compatible structures were detected in 23 % of the dogs tested and Mollicutes was diagnosed in 41 % of the samples processed by PCR. No association was found between the presence of hemoplasma compatible structures and anemia in the animals. The spatiotemporal pattern of hemoplasma compatible structures was identified, indicating that dogs infected with them were detected in all the municipalities included in this study. No association was found between hemoplasma infection and the presence of anemia. The spatiotemporal pattern of hemoplasma infection was identified, indicating that dogs infected with it were detected in all the municipalities included in this study. This result is the first study of this type to be carried out in Cuba and evidences the need to confirm, by other molecular assays, the identification of hemoplasma and the development of a prevention and control strategy for this entity.

RESUMEN La hemoplasmosis canina es una enfermedad causada por micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas) que afectan a los canes sin distinción de raza o edad. Estos agentes (antiguamente pertenecientes a los géneros Haemobartonella y Eperythrozoon) son bacterias epieritrocitarias obligadas que pueden inducir anemia en el huésped infectado y que se reconocen por su potencial zoonótico. El objetivo del presente estudio fue detectar la presencia de estructuras compatibles con hemoplasmas (ECHM) en poblaciones de perros no domiciliados de la provincia La Habana, Cuba. Se colectaron muestras de 124 perros procedentes de 11 municipios de esta provincia. El diagnóstico se realizó a través de la observación de frotis sanguíneos teñidos con Giemsa y por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), amplificando una región del gen ARNr 16S de la clase Mollicutes. En el 23 % de los perros analizados se detectó la presencia de ECHM y en el 41% de las muestras, procesadas por PCR, se diagnosticó Mollicutes. No se encontró asociación entre la presencia de ECHM y la anemia que tenían los animales. Se identificó el patrón espaciotemporal de ECHM, el cual indica que en todos los municipios incluidos en este estudio se detectaron canes infectados con ECHM. Este resultado constituye el primer estudio de este tipo que se realiza en Cuba y evidencia la necesidad de confirmar, por otros ensayos moleculares, la identificación de hemoplasma y el desarrollo de una estrategia de prevención y control sobre esta entidad.

ABSTRACT Human health is increasingly interconnected with that of the animals in the environment they share, while the threat of emerging diseases arising at that interface increases as a result of the multiple and growing driving forces which propitiate that greater human-animal-environmental interrelationship. COVID-19 is an emerging zoonosis caused by SARS-CoV-2, a new coronavirus whose primary source is associated with bats. Its rapid global expansion led the World Health Organization (WHO) to consider the disease as a Public Health Emergency of International Concern (PHEIC), for which the cross-sectoral approach is necessary. The "One Health" strategy, promoted by the international organizations FAO, OIE and WHO, promotes collaborative efforts at all levels across multiple disciplines and sectors to achieve optimal health for people, animals and the environment, thus providing a conceptual framework for the development of cross-sectoral and multidisciplinary solutions to global health challenges. This approach reviews the latest research reports on crucial aspects in the epidemiology of this new zoonosis, such as the characteristics of coronaviruses, their hosts, factors after crossing the interspecies barrier, and the undefined aspects of SARS-CoV-2 with potential implications for its prevention and control, as well as the lack of knowledge of the intermediate host of the virus, an important link in the epidemiological chain and the role that wild and domestic animal species, including pets, can have in the persistence of the virus in the environment and its potential re-emergence. It also addresses the necessary cooperation between human and animal health services in activities to face COVID-19, while pointing out its negative economic impact on the entire food production and distribution chain. This is an example of the importance of the holistic vision proposed by the "One Health" approach in the prevention and control of zoonoses, benefiting the achievement of the Sustainable Development Goals by all countries, by proposing that healthy people and animals live in a healthy planet. There is a need of strengthening capacity building and cooperation between the human and animal health sectors, as well as their preparedness to face future health emergencies.

RESUMEN La salud humana está cada vez más interconectada con la de los animales en el ambiente que ellos comparten, en tanto aumenta la amenaza de las enfermedades emergentes que surgen en esa interfaz producto de las múltiples y crecientes fuerzas motrices que propician esa mayor interrelación hombre-animal-ambiente. La COVID-19 es una zoonosis emergente ocasionada por SARS-CoV-2, un nuevo coronavirus cuya fuente primaria se asocia a murciélagos. Su rápida expansión global determinó que la Organización Mundial de la Salud (OMS) considerara la enfermedad como una Emergencia de Salud Pública de Importancia Internacional, para cuyo enfrentamiento es necesario el enfoque intersectorial. La estrategia “Una Salud”, que promueven las organizaciones internacionales FAO, OIE, OMS, aboga por los esfuerzos colaborativos a todos los niveles entre múltiples disciplinas y sectores, para lograr la salud óptima de las personas, los animales y el ambiente, con lo cual provee un marco conceptual para el desarrollo de soluciones intersectoriales y multidisciplinarias ante los desafíos de salud globales. Con este enfoque se revisan los últimos reportes de las investigaciones sobre aspectos cruciales en la epidemiología de esta nueva zoonosis, como son las características de los coronavirus, sus huéspedes, los factores tras el cruce de la barrera interespecie y los aspectos sin dilucidar de SARS-CoV-2 con implicaciones potenciales para su prevención y control, como el desconocimiento del huésped intermediario del virus, eslabón importante de la cadena epidemiológica y el papel que pueden tener las especies animales silvestres y domésticas, incluidas las mascotas, en la persistencia del virus en el ambiente y su potencial reemergencia. También se aborda la necesaria cooperación entre los servicios de salud humana y animal en las actividades de enfrentamiento a la COVID-19, a la vez que se señala su impacto económico negativo en toda la cadena de la producción y distribución de alimentos, como un ejemplo de la importancia de la visión holística que propone el enfoque “Una Salud” en la prevención y control de las zoonosis, en beneficio del logro de los Objetivos de Desarrollo Sostenible por todos los países, al proponer que las personas y los animales sanos vivan en un planeta saludable. Se concluye en la necesidad del fortalecimiento de las capacidades y la cooperación entre los sectores de la salud humana y animal, así como su preparación para enfrentar emergencias sanitarias futuras.

ABSTRACT Mollicute contamination in cell cultures is common. Species such as Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale, and Acholeplasma laidlawii are identified as causing 95 % of the contaminations. The present work is aimed at developing species-specific PCRs for the identification of the most frequent contaminating mycoplasma species in cell cultures. The critical parameters of PCR were optimized and the analytical sensitivity and specificity were determined. The optimum temperature for hybridization was set at 55ºC; magnesium concentration at 1,5 mM. A range of 0,3-0,5 µM was selected for the primers. The analytical sensitivity of PCR was 1 pg/µL, while its analytical specificity was 100 %. Species-specific PCR was performed on 58 cell culture samples where the presence of Mollicutes was previously detected. As a result, Mycoplasma orale was detected as the most frequent species, followed by Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis, and Mycoplasma salivarium. The results of this study confirm that the species-specific PCR assays developed are feasible to use for the identification of mycoplasma species in cell cultures.

RESUMEN La contaminación por Mollicutes en los cultivos celulares es frecuente. Especies como Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale y Acholeplasma laidlawii se identifican como causantes del 95 % de las contaminaciones. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar PCR especie-específicos para la identificación de las especies de micoplasmas contaminantes más frecuentes en cultivos celulares. Se optimizaron los parámetros críticos de la PCR y se determinaron la sensibilidad y especificidad analítica. Se estableció como valor óptimo de temperatura de hibridación 55ºC; concentración de magnesio 1,5 mM y de cebadores se seleccionó un rango 0,3-0,5 µM. La sensibilidad analítica de la PCR fue de 1 pg/µL, mientras que su especificidad analítica fue 100 %. Se realizó la PCR especie-específico a 58 muestras de cultivo celulares donde previamente se detectó la presencia de Mollicutes. Como resultado se detectó Mycoplasma orale como la especie más frecuente, seguida de Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis y Mycoplasma salivarium. Los resultados de este estudio confirman que los ensayos PCR especie-específicos desarrollados son factibles de emplear para la identificación de especies de micoplasmas en cultivos celulares.

ABSTRACT Antibiotics are used in the control of mycoplasma contaminations in cell cultures. The antimicrobial resistance of these microorganisms has increased considerably in recent years and the antibiotics of choice, such as quinolones, aminoglycosides and tetracyclines, have become less effective. The aim of this work was to determine the susceptibility patterns in strains of mycoplasma contaminants in cell cultures. Eleven mycoplasma strains, derived from the diagnosis of contamination in cell cultures and previously characterized by biochemical and genetic tests, were used for this purpose. It was determined the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of strains against nine antimicrobial agents used in the routine work with cell cultures and against contaminating mycoplasma species. Isolates showed susceptibility to tetracyclines: minocycline (MIC range: 0.25-0.5 μg/mL) and oxytetracycline (MIC range: 1-2 μg/mL), and to macrolide: tylosine (MIC range: 0.25-1 μg/mL); while they showed moderate resistance to quinolones: enrofloxacin (MIC range: 4-8 μg/mL) and ciprofloxacin (MIC range: 4-8 μg/mL). A total of 10/11 strains showed resistance to aminoglycosides: neomycin (MIC range: 8-16 μg/mL), gentamicin (MIC range: 8-32 μg/mL), kanamycin (MIC range: 8-32 μg/mL), and streptomycin (MIC range: >64 μg/mL). The antimicrobial resistance of mycoplasmas should be continuously monitored with a view to minimizing changes in susceptibility and maintaining antimicrobial efficacy against contamination.

RESUMEN En los cultivos celulares, los antibióticos se utilizan en el control de las contaminaciones por micoplasmas. La resistencia antimicrobiana de estos microorganismos aumentan considerablemente en los últimos años y los antibióticos de elección, como las quinolonas, los aminoglucósidos y las tetraciclinas, disminuyen su efectividad. El objetivo de este trabajo fue determinar los perfiles de susceptibilidad en cepas de micoplasmas contaminantes en cultivos celulares. Para esto se utilizaron 11 cepas de micoplasma, obtenidas del diagnóstico de contaminaciones en cultivos celulares y caracterizadas previamente por pruebas bioquímicas y genéticas. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de las cepas frente a nueve agentes antimicrobianos que se utilizan en el trabajo rutinario con cultivos celulares y contra especies de micoplasma contaminantes. Los aislados mostraron susceptibilidad a tetraciclinas: minociclina (rango de CMI: 0,25-0,5 μg/mL) y oxitetraciclina (rango de CMI: 1-2 μg/mL) y al macrólido: tilosina (rango de CMI: 0,25-1 μg/mL); mientras que evidenciaron moderada resistencia a quinolonas: enrofloxacina (rango de CMI: 4-8 μg/mL) y ciprofloxacina (rango de CMI: 4-8 μg/mL). Un total de 10/11 cepas mostraron resistencia a los aminoglucósidos: neomicina (rango de CMI: 8-16 μg/mL), gentamicina (rango de CMI: 8-32 μg/mL), kanamicina (rango de CMI: 8-32 μg/mL) y estreptomicina (rango de CMI: >64 μg/mL). La resistencia antimicrobiana de los micoplasmas debe ser continuamente monitoreada con vista a minimizar los cambios en la susceptibilidad y mantener eficacia antimicrobiana frente a la contaminación.

ABSTRACT Researches on the detection of mycoplasmas in horses are relatively scarce. However, there are reports about their association to the respiratory-reproductive complex. In Cuba, the presence of these microorganisms in horses is unknown, so the objective of this work was to detect the presence of microorganisms of the class Mollicutes associated to the respiratory-reproductive complex in horses from Mayabeque, Cuba complex in horses from San José de las Lajas, Mayabeque. For this purpose, 97 animals from four localities of this municipality were analyzed. One hundred and thirty-one exudates (97 nasal and 34 preputial) were collected for diagnosis by microbiological culture and PCR. The presence of Mollicutes was detected in 37.11 % of the samples; of these 88.8 % corresponded to nasal exudates and 11.2 % to preputial exudates. The presence of Mollicutes was detected in all localities. Locality "D" and animals older than two years old had the highest number of positive results. An isolate was obtained from preputial exudate, which was identified as Acholeplasma spp. by biochemical tests. Studies related to the presence of Mollicutes in horses are being carried out for the first time in Cuba, so it is necessary to continue studies related to the epidemiology of these pathogens, as part of the control of the respiratory-reproductive complex in this species.

RESUMEN Las investigaciones sobre la detección de micoplasmas en caballos son relativamente escasas; sin embargo, existen reportes sobre su asociación al complejo respiratorio-reproductivo. En Cuba se desconoce sobre la presencia de estos microorganismos en caballos, por lo que el objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de microorganismos de la clase Mollicutes asociados al complejo respiratorio-reproductivo en caballos procedentes de San José de las Lajas, Mayabeque. Para esto se trabajaron 97 animales procedentes de cuatro localidades de este municipio. Se colectaron 131 exudados (97 nasales y 34 prepuciales) para el diagnóstico por cultivo microbiológico y PCR. En 37,11 % de las muestras se detectó la presencia de Mollicutes; de ellas 88,8 % correspondieron a exudados nasales y 11,2 % a exudados prepuciales. En todas las localidades se detectó la presencia de Mollicutes; la localidad “D” y los animales mayores de dos años fueron los de mayor número de resultados positivos. Se obtuvo un aislado procedente de exudado prepucial, el cual se identificó por pruebas bioquímicas, como Acholeplasma spp. Por primera vez en Cuba se realizan estudios relacionados con la presencia de Mollicutes en caballos, por lo que resulta necesario continuar los estudios relacionados con la epidemiología de estos patógenos, como parte del control del complejo respiratorio-reproductivo en esta especie.

ABSTRACT Antimicrobial resistance (AMR) constitutes a global crisis with an impact on human and animal health. The consumption of antibiotics in animal husbandry also encourages the selection and propagation of strains and their determinants of resistance to the environment and in the food production chain. One of the strategic initiatives for the contention of AMR is to ensure the appropriate use of available antibiotics, in which microbiology laboratories play an important role, through diagnosis and microbial susceptibility testing. The purpose of this review is to provide information on patterns, difficulties and challenges in interpreting data derived from laboratory tests to allow the identification of bacteria, their typing and the estimation of the antibiotic susceptibility profile. Methodological approaches for the distinction between pathogenic, commensal and indicator bacteria to be considered in the AMR surveillance and monitoring plans are also described. In the breeding of animals, strains of zoonotic bacteria or multiresistance indicators usually appear, which are a priority in surveillance programs, under the concept of One health, for presenting acquired resistance with an advantage for their dissemination. Alarming examples in recent years are extended spectrum betalactamases producing Escherichia coli (E. coli ESBL) and methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA). It also discusses the transient expressions of microbial resistance, biofilms and persistent cells, which explain the recurrence of infections and are still poorly considered in veterinary medicine. Finally, the need for strategies to harmonize and disseminate data that support guidelines for the treatment of bacterial infections of veterinary interest is emphasized.

RESUMEN La resistencia antimicrobiana (RAM) constituye una crisis global con impacto en la salud humana y animal. El consumo de antibióticos en la crianza animal, también propicia la selección y propagación de cepas y sus determinantes de resistencia al ambiente y en la cadena de producción de alimentos. Una de las iniciativas estratégicas para la contención de la RAM, es asegurar el uso apropiado de los antibióticos disponibles, en lo cual, los laboratorios de microbiología tienen un importante papel, a través del diagnóstico y las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana. La presente revisión tiene como objetivo proporcionar información sobre las pautas, dificultades y los desafíos en la interpretación de datos derivados de las pruebas de laboratorio para la identificación de bacterias, su tipificación y la estimación del perfil de susceptibilidad a los antibióticos. También se describen enfoques para la distinción entre bacterias patógenas, comensales e indicadoras a considerar en los planes de vigilancia y monitoreo de la RAM. En la crianza de los animales suelen aparecer cepas zoonóticas o indicadoras de multirresistencia, que son prioridad en programas de vigilancia, bajo el concepto Una Salud, por presentar resistencia adquirida con ventaja para su diseminación. Ejemplos alarmantes en los últimos años son Escherichia coli productora de betalactamasas de espectro extendido (E. coli BLEE) y Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM). Además, se diserta sobre las expresiones transitorias de resistencia microbiana, las biopelículas y células persistentes, que explican las recidivas de infecciones y aún son poco consideradas en la medicina veterinaria. Finalmente, se enfatiza en la necesidad de estrategias para armonizar y divulgar datos que soporten guías para el tratamiento de infecciones bacterianas de interés veterinario.

ABSTRACT Pasteurella multocida is a Gram-negative bacterium associated with respiratory syndromes in different species of animals such as pigs, birds, rabbits, cats, and dogs. This bacterium presents high intra-species heterogeneity, where it is possible to find different biovars, five capsular serogroups with differences in virulence factors and the expression of pathogenicity, as well as profiles of susceptibility to antibiotics and the capacity for the formation of biofilms. The objective of this work is to characterize of P. multocida strains isolated from rabbits. The microbiological identification, capsular genoserotyping and the detection of genes involved in the virulence factors were carried out. Susceptibility to several families of antibiotics and the ability to produce biofilms in vitro were determined. It was confirmed that the strains belong to the species P. multocida subspecies multocida biotype 1 capsular A serogroup. The strains were positive to the detection of loci gene fragments related to the biogenesis of fimbrias, neurominidase and outer membrane proteins, which constitute virulence factors, specifically for colonization and interaction with the host. The strains revealed multi-resistance and only two of them showed moderate capacity for the production of biofilms. The characterization of these strains clarifies the epidemiological aspects related to the capsular serogroup, which are useful for obtaining vaccine candidates and contribute to the prevention or prophylaxis of infections by this bacterium, thus the present work contributes to the control of this infection in rabbits.

RESUMEN Pasteurella multocida es una bacteria Gram negativa que se asocia a síndromes respiratorios en diferentes especies de animales. Esta bacteria presenta una alta heterogeneidad intraespecie, donde es posible encontrar diferentes biovares, cinco serogrupos capsulares con diferencias en los factores de virulencia y la expresión de la patogenicidad, así como en los perfiles de susceptibilidad a los antibióticos y la capacidad para la formación de biopelículas. El objetivo del presente trabajo es la caracterización de cepas de P. multocida recobradas de conejos. Se realizó la identificación microbiológica, la genoserotipificación capsular y la detección de genes que participan en la expresión de factores de virulencia. Se determinó la susceptibilidad a varias familias de antibióticos y la capacidad de producir biopelículas in vitro. Se confirmó que las cepas pertenecen a la especie P. multocida subespecie multocida biotipo 1, al tipo capsular A. Las cepas fueron positivas a la detección de fragmentos de genes de los locis relacionados con la biogénesis de fimbrias, neurominidasa y proteínas de membrana externa, que constituyen factores de virulencia, específicamente para la colonización e interacción con el hospedero. Las cepas revelaron multirresistencia y solo dos mostraron moderada capacidad para la producción de biopelículas. La caracterización de estas cepas esclarece aspectos epidemiológicos relacionados con el serogrupo capsular, que son de utilidad para la obtención de candidatos vacunales y contribuir a la prevención o profilaxis de infecciones por esta bacteria, por lo que el presente trabajo constituye una contribución al control de esta infección en conejos.

ABSTRACT The Avian Respiratory Complex (ARC), is one of the most frequent problems in poultry. Its etiology is multifactorial and includes combinations of microorganisms, nutritional and environmental factors. Among the microbial agents, viruses, mycoplasmas and bacteria of the following genera and species: Ornithobacterium rhinotracheale, Bordetella avium, Pasteurella multocida and Escherichia coli, are reported. The objective of this study was to identify the presence of these bacteria in samples from broilers with symptoms compatible with the disease. To this end, 60 tracheal exudates of chickens belonging to four farms in Manabí province, Ecuador, were analyzed. The samples were identified by phenotypic (cultural, dye and biochemical) and genotypic tests by polymerase chain reaction (PCR). Five samples (8 %) tested positive for these bacteria, of which four corresponded to B. avium and one isolate to E. coli. The susceptibility profile revealed that both species were sensitive to ciprofloxacin and kanamycin, while they were resistant to amoxicillin and chloramphenicol. This study is the first evidence confirming the presence of these bacteria in broilers in Manabí province, Ecuador.

RESUMEN El Complejo Respiratorio Aviar (CRA) es uno de los problemas que más pérdidas ocasiona en la avicultura; su etiología es multifactorial e incluye combinaciones de microorganismos y factores nutricionales y ambientales. Entre los agentes microbianos se reportan virus, micoplasmas y otras bacterias de los siguientes géneros y especies: Ornithobacterium rhinotracheale, Bordetella avium, Pasteurella multocida y Escherichia coli. El presente estudio tuvo como objetivo identificar la presencia de estas bacterias en muestras procedentes de pollos de engorde con sintomatología compatible al CRA. Para ello se analizaron 60 exudados traqueales de pollos pertenecientes a cuatro granjas de la provincia Manabí, Ecuador. Las muestras se identificaron por pruebas fenotípicas (culturales, tintoriales y bioquímicas) y genotípicas por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Cinco muestras (8 %) resultaron positivas a estas bacterias; de ellas cuatro correspondieron a B. avium y un aislado a E. coli. El perfil de susceptibilidad reveló que ambas especies fueron sensibles a ciprofloxacina y kanamicina, mientras que fueron resistentes a amoxicilina y cloranfenicol. Este estudio constituye la primera evidencia molecular que confirma la presencia de estas bacterias en pollos de engorde de la provincia Manabí, Ecuador.

The intraerythrocytic parasites Babesia caballi and Theileria equi are the etiological agents of equine piroplasmosis. This disease affects different horse breeds and it has a significant economic impact on the horse industry. The objective of the present study was to determine the presence of B. caballi and T. equi by blood smear and their association with the hematological parameters. Fifty-eight blood samples were taken from clinically healthy horses, which were diagnosed with B. caballi and T. equi infections by blood smear; in addition, the hematological examination of the red and white series was carried out. The mean value of all the hematological parameters evaluated was among the physiological values described for the horse species. From the total samples analyzed, intraerythrocytic formations compatible with B. caballi and T. equi were observed in 3/58 (5.2 %) and 8/58 (13.8 %) animals, respectively. Of these animals, 6/11 (10.3 %) had hematocrit values lower than those physiological. The association between positive animals and possible risk factors (age, sex, presence of ticks and contact with bovines) was evaluated. The statistical analysis showed significant differences when evaluating the relationship between hematocrit values and positive samples to T. equi

Los protozoos Babesia caballi y Theileria equi son los agentes etiológicos de la piroplasmosis equina. Esta enfermedad afecta a diferentes especies de équidos y tiene un impacto económico importante en la industria equina. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de B. caballi y T. equi mediante frotis sanguíneo y su asociación con los parámetros hematológicos. Se analizaron 58 muestras de sangre de caballos clínicamente sanos, a las que se les realizó el diagnóstico de B. caballi y T. equi a partir del frotis sanguíneo, así como el examen hematológico de la serie roja y de la serie blanca. El valor medio de todos los parámetros hematológicos evaluados estuvo entre los valores fisiológicos descritos para la especie equina. Del total de muestras analizadas se observaron formaciones intraeritrocíticas compatibles con B. caballi y T. equi en 3/58 (5,2 %) y 8/58 (13,8 %) animales, respectivamente; de estos animales, 6/11 (10,3 %) tenían valores de hematocrito inferiores a los fisiológicos. Se evaluó la asociación entre animales positivos y posibles factores de riesgo como la edad, el sexo, la presencia de garrapatas y el contacto con bovinos. El análisis estadístico mostró diferencias significativas al evaluar la relación entre los valores de hematocrito y las muestras positivas a T. equi

The preservation and storage of genetic material are of vital interest especially for mycoplasmas, since it is known that the traditional conservation methods reported for these species are not completely effective. The diagnosis of these microorganisms is carried out by standard and molecular methods; among the latter is the Polymerase Chain Reaction test (PCR). One of the critical points of this test is the stability of the deoxyribonucleic acid (DNA). The aim of this work was to evaluate the thermal stability of fragments amplified by PCR, from dehydrated DNA, from the 16S rRNA gene for the detection of Mollicutes and from the 16S rRNA and mgc2 genes for the diagnosis of M. gallisepticum, targets commonly used in diagnosis. The product of each extraction was dried and stored at 4, 20 and 37 ºC for a period of 90 days. The stability over time of the different regions of the diagnosis was assessed by amplification using PCR. The results showed that M. gallisepticum DNA was heat stable at room temperature for a period of 90 days. Furthermore, it was found that the purity of the extracted DNA did not affect its stability when kept dehydrated. The results showed that preserving the DNA of M. gallisepticum dehydrated allows storage and transfer without high costs and without affecting the quality of the samples for diagnosis

La preservación y el almacenamiento del material genético son de vital interés, sobre todo para micoplasmas, ya que se conoce que los métodos de conservación tradicionales reportados para estas especies no son completamente efectivos. El diagnóstico de estos microorganismos se realiza por métodos clásicos y moleculares, entre estos últimos se encuentra la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Uno de los puntos críticos de este ensayo lo constituye la estabilidad del ácido desoxirribonucleico (ADN). El objetivo de este trabajo fue evaluar la termoestabilidad de fragmentos amplificados por PCR, a partir de ADN deshidratado, del gen ARNr 16S para la detección de la clase Mollicutes y de los genes ARNr 16S y mgc2 para el diagnóstico de M. gallisepticum. El producto de cada extracción de ADN se deshidrató y conservó a 4, 20 y 37ºC por un periodo de 90 días. La estabilidad en el tiempo de las diferentes regiones de diagnóstico se evaluó mediante la amplificación con el uso del PCR. Los resultados mostraron que el ADN de M. gallisepticum es termoestable a temperatura ambiente por un periodo de hasta 90 días. Además, se comprobó que la pureza del ADN extraído no afecta la estabilidad del mismo cuando este se conserva deshidratado. Los resultados evidenciaron que conservar el ADN de M. gallisepticum deshidratado permite su almacenamiento y traslado sin altos costos y sin afectar la calidad de las muestras para el diagnóstico