RESUMO: Leishmaniose visceral (LV) é causada pelo protozoário Leishmania infantum . A transmissão deste parasito para hospedeiros é principalmente vetorial. No entanto, rotas alternativas de infecção têm sido investigadas, especialmente em áreas onde o vetor biológico está ausente. O período exato de infecção e se a transmissão in utero ocorre ainda não está totalmente elucidada. Este estudo demonstra uma evidência molecular da transmissão vertical de L. infantum de uma cadela prenhe para o embrião. As amostras (vulva, vagina, cérvix, corpo do útero, corno do útero e ovários) de uma fêmea naturalmente infectada por L. infantum e de seu embrião foram analisados molecularmente por meio de qPCR e cPCR, seguido de sequenciamento de DNA. A estimativa da idade gestacional foi de 23±1 dia. Na qPCR, a presença de DNA de L. infantum foi detectado em todas as amostras (n=7) analisadas, incluindo o embrião. No entanto, na PCR convencional, apenas quatro amostras (vagina, cérvix, corpo do útero e embrião) foram positivas. Este estudo demonstrou que a transmissão de L. infantum de uma cadela prenhe para o embrião pode ocorrer nos primeiros dias de prenhez. Em conclusão, de acordo com o conhecimento dos autores, este é o primeiro relatório evidenciando infecção de embrião canino por L. infantum.

ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) is caused by the protozoon Leishmania infantum . Transmission of this parasite to hosts occurs mainly through the bite of infected sand flies. However, alternative infection routes have been hypothesized, especially in areas where the biological vector is absent. The exact time of infection and whether in utero transmission occurs have still not been fully elucidated. This report demonstrates molecular evidence of vertical transmission of L. infantum from a pregnant dog to the embryo. Samples (e.g. vulva, vagina, cervix, uterine body, uterine horn and ovaries) from a female naturally infected by L. infantum and from her embryo were molecularly analyzed by means of qPCR and cPCR followed by DNA sequencing. The gestational age was estimated to be 23±1 day. Through qPCR, the presence of L. infantum DNA was detected in all the samples analyzed (n=7), including the embryo, conversely through cPCR, only four samples (vagina, cervix, uterine body and embryo) were positive. This study demonstrated that transmission of L. infantum from a pregnant dog to the embryo might occur in the early days of pregnancy. In conclusion, this is the first report showing L. infantum infecting a canine embryo.

RESUMO: Considerando a falta de estudos sobre lesões nos órgãos genitais de cadelas naturalmente infectadas por Leishmania infantum , o objetivo do presente estudo foi investigar a correlação entre reação inflamatória crônica, imunomarcação e carga parasitária, no sistema genital. Dez animais foram fornecidos pelo Departamento de Controle de Vetores e Vigilância Animal do município de Caruaru, Estado de Pernambuco, Brasil. Fragmentos de vulva, vagina, cérvix, corpo do útero, corno do útero e ovários foram avaliados por descrição histopatológica, imuno-histoquímica (IHQ) e detecção de DNA de formas amastigotas por qPCR. A relação entre IHQ e infiltrado inflamatório crônico relacionado com L. infantum foi observada apenas na vulva e vagina, enquanto as mesmas reações sem imunomarcação foram observadas em todos os órgãos, exceto nos ovários. DNA de L. infantum foi detectado em todos os órgãos do sistema genital, porém, sem diferença de carga parasitária entre eles. Não houve correlação entre a carga parasitária e lesões inflamatórias nos órgãos avaliados, com exceção do corpo do útero, em que foi encontrada uma correlação inversa. Em conclusão, a vulva e a vagina foram os principais locais de lesões e imunomarcação para formas amastigotas L. infantum no sistema genital de cadelas. A carga parasitária não influenciou a intensidade das lesões nos órgãos avaliados.

ABSTRACT: The aim of the present study was to investigate the correlations among chronic inflammatory reaction, immunostaining and parasite load in the genital system of female dogs naturally infected with Leishmania infantum . Animals (n = 10) used in this study were from the Department of Vector Control and Animal Surveillance of the municipality of Caruaru, state of Pernambuco, Brazil. Fragments of the vulva, vagina, cervix, uterine body, uterine horns and ovaries were submitted to histopathological analysis, immunohistochemistry (IHC) and DNA detection of amastigotes by qPCR. Correlations were found between the IHC findings and chronic inflammatory infiltrate related to L. Infantum only in the vulva and vagina; whereas, the same inflammatory reactions without immunostaining were observed in all organs, except the ovaries. L. Infantum DNA was detected in all organs of genital system, with no difference in parasite load observed among the different organs. No correlation was reported between parasite load and inflammatory lesions in the organs evaluated, except for the uterine body, in which an inverse correlation was detected. In conclusion, the vulva and vagina were the major sites of lesions and immunostaining for L. Infantum amastigotes in the genital system of female dogs. Moreover, parasite load exerted no influence on the intensity of the lesions in the organs evaluated.

RESUMO: A Leishmaniose Visceral Canina é uma importante enfermidade causada pelo protozoário Leishmania infantum que afeta diversos órgãos e sistemas, incluindo o trato genital. No entanto, o tropismo da L. infantum pelo sistema genital masculino e a correlação entre carga parasitária, detecção imunohistoquímica e alterações estruturais nesses órgãos ainda é uma questão controversa. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar essa correlação em órgãos genitais de cães naturalmente infectados por L. infantum. Para tal, amostras de testículos, epidídimos, próstata, glande, prepúcio e escroto foram coletadas de 19 cães adultos positivos. Lesões microscópicas associadas com imunomarcação de formas amastigotas do parasito foram observadas nos testículos (5,2%), epidídimos (2,6%), prepúcio (5,2%) e escroto (5,2%). Por outro lado, alterações estruturais sem imunomarcação foram observadas em todos os órgãos. Além disso, o DNA de L. infantum foi encontrado em todos os órgãos com maior carga parasitária nos testículos, epidídimos e próstata. Curiosamente, os testículos apresentaram a maior carga parasitária, porém apresentaram o menor grau de lesões inflamatórias. Essas lesões inflamatórias foram observadas em todos os órgãos do sistema reprodutor de cães com L. infantum. Entretanto, não houve correlação entre carga parasitária e lesões inflamatórias nestes órgãos.

ABSTRACT: Canine visceral leishmaniasisis an important disease caused by the protozoon Leishmania infantum which affects several organs and systems, including the genital tract. The L. infantum tropism to the male genital system and correlation among parasite load, immunohistochemistry detection and structural changes in these organs is controversy. Therefore, the aim of this study was to evaluate this correlation in the genital organs of the male dogs naturally infected with L. infantum. Samples from testicles, epididymis, prostate, glans penis, prepuce and scrotum were collected from 19 positive adult dogs. Structural changes were observed in the testicles (5.2%), epididymis (2.6%), prepuce (5.2%) and scrotum (5.2%) of the samples positive at immunohistochemistry examination. Conversely, similar structural changes were observed in all tissues negative at immunohistochemistry analysis. Moreover, L. infantum DNA was detected in all organs with the highest parasite load found in testicles, epididymis, and prostate gland. , Testicles had the highest parasite load but the lowest number of inflammatory lesions. These inflammatory lesions were observed in all organs of reproductive system of dogs; however, no correlation was observed between the parasite load and inflammatory lesions of dogs naturally infected with L. infantum.

O objetivo deste trabalho foi estudar as alterações histopatológicas e a detecção do parasito nos olhos de cães naturalmente infectados por Leishmania chagasi. Utilizaram-se os olhos de 25 cães com exame parasitológico e sorológico positivo para Leishmania chagasi. Os animais foram submetidos à semiotécnica oftálmica rotineira. Fragmentos do globo ocular foram coletados e destinados à imunoistoquímica e histopatologia. Entre as estruturas avaliadas, a conjuntiva da terceira pálpebra foi a que mais demonstrou imunomarcação da Leishmania chagasi. Na avaliação histopatológica, foi observado predominantemente infiltrado inflamatório mononuclear, variando de discreto a intenso nas diversas estruturas oculares. Congestão vascular e perivasculite também foram observadas. As alterações histopatológicas do bulbo do olho em cães com leishmaniose visceral podem estar relacionadas à presença do anticorpo.

The objective of the present study was to investigate the histopathological alterations and detection of parasites that occur in the eyes of dogs naturally infected with Leishmania chagasi. The eyes of 25 dogs with a positive parasitological and serological exam for L. chagasi were submitted to routine ophthalmic examination. Fragments were obtained from the eyeball and were analyzed by immunohistochemistry and histopathology. Among the structures studied, the conjunctiva of the third eyelid was the tissue most frequently stained for L. chagasi. Histopathological analysis revealed a predominantly mononuclear inflammatory infiltrate whose intensity ranged from discrete to intense in the various ocular structures. Vascular congestion and perivasculitis were also observed. The histopathological alterations that occur in the eyeball of dogs with visceral leishmaniasis might be related to the presence of antibodies.

O meio de contraste ioversol 240mg de iodo(I) por ml foi administrado na dose de 0,5ml/kg de peso por via intracisternal em 30 cães sadios, com o objetivo de verificar as possíveis alterações liquóricas e histopatológicas geradas pelo mesmo. Foram realizadas no líquor, análises físicas, contagens total e diferencial de leucócitos e determinação da concentração total de proteínas. A análise do líquor pós-mielográfica revelou aumento no número de leucócitos totais em três animais e da concentração de proteína em quatro. Alterações histopatológicas foram observadas em dois deles: infiltrado de células inflamatórias mononucleares na fissura ventral e no canal central da medula espinhal e infiltrado discreto de células inflamatórias mononucleares no canal central da medula espinhal, respectivamente. Concluiu-se que a mielografia com o meio de contraste ioversol 240mg I/m<img src="http:/img/fbpe/cr/v32n3/a10img01.gif" align="absmiddle"> pode causar alterações citológicas e na concentração de proteínas no líquor, e histopatológicas, porém discretas, durante o período estudado.

Ioversol contrast agent, at a concentration of 240mg of iodine/ml, was administered via intrathecal routes to 30 normal dogs at a dose of 0.5ml/kg weight to determine possible cerebrospinal fluid and histopathological changes. Physical analysis, total and differential white cell counts and quantitative protein determination of the cerebrospinal fluid were done. Cerebrospinal fluid analysis revealed increase in the total white cell count in three animals, and protein in four animals of different groups post-myelography. Histopathological changes were seen in spinal cords of two dogs: mononuclear infiltrate in the ventral fissure and in the central canal, and mononuclear infiltrate in the central canal, respectively. Myelography with ioversol 240mg I/m<img src="http:/img/fbpe/cr/v32n3/a10img01.gif" align="absmiddle"> can cause mild cytological and protein alterations, and histopathological changes under the experimental conditions.