O agente etiológico da mancha branca do milho (MBM) tem sido alvo de discussão e controvérsia. Inicialmente a doença foi descrita como sendo a mancha foliar de Phaeosphaeria causada por Phaeosphaeria maydis. Outros autores sugeriram a existência de diferentes espécies fúngicas provocando sintomas semelhantes. Recentemente a bactéria Pantoea ananatis foi descrita como sendo o agente causal desta doença. O objetivo deste estudo foi oferecer informações adicionais sobre a correta etiologia da doença proporcionando evidências visuais da presença da bactéria no interior de lesões da MBM por meio de microscopia eletrônica de transmissão (MET) e técnicas moleculares. A MET permitiu visualizar um grande número de células bacterianas nos espaços intercelulares em lesões oriundas de plantas naturalmente e artificialmente infectadas. Estruturas fúngicas não foram visualizadas em lesões jovens. Primers bacterianos para os genes 16S rRNA e rpoB foram usados em reações de PCR para amplificar DNA extraído diretamente de lesões jovens e de lesões necróticas. O oligonucleotídeo universal para fungo, ITS4, foi incluído para identificar a possível presença de estruturas fúngicas nas lesões. Amplificação positiva foi obtida com primers bacterianos, a partir de lesões jovens, natural e artificialmente inoculadas, enquanto que nenhuma amplificação foi observada quando o oligonucleotídeo ITS4 foi usado. Amplificação do DNA com o primer ITS4 foi observada quando o DNA foi extraído de lesões em estádio avançado de necrose. Estes resultados reforçam relatos anteriores que descrevem P. ananatis como patógeno primário da doença e a hipótese de que espécies fúngicas podem colonizar lesões pré-estabelecidas pela P. ananatis.

The etiological agent of maize white spot (MWS) disease has been a subject of controversy and discussion. Initially the disease was described as Phaeosphaeria leaf spot caused by Phaeosphaeria maydis. Other authors have suggested the existence of different fungal species causing similar symptoms. Recently, a bacterium, Pantoea ananatis, was described as the causal agent of this disease. The purpose of this study was to offer additional information on the correct etiology of this disease by providing visual evidence of the presence of the bacterium in the interior of the MWS lesions by using transmission electron microscopy (TEM) and molecular techniques. The TEM allowed visualization of a large amount of bacteria in the intercellular spaces of lesions collected from both artificially and naturally infected plants. Fungal structures were not visualized in young lesions. Bacterial primers for the 16S rRNA and rpoB genes were used in PCR reactions to amplify DNA extracted from water-soaked (young) and necrotic lesions. The universal fungal oligonucleotide ITS4 was also included to identify the possible presence of fungal structures inside lesions. Positive PCR products from water-soaked lesions, both from naturally and artificially inoculated plants, were produced with bacterial primers, whereas no amplification was observed when ITS4 oligonucleotide was used. On the other hand, DNA amplification with ITS4 primer was observed when DNA was isolated from necrotic (old) lesions. These results reinforced previous report of P. ananatis as the primary pathogen and the hypothesis that fungal species may colonize lesions pre-established by P. ananatis.