Abstract Syzygium cumini L. Skeels belongs to Myrtaceae family. This species has been recognized by its antidiabetic, anti-inflammatory, and antimicrobial activities. Despite ever-increasing scientific interest for this species there is no pharmacopeia method for characterization and standardization of S. cumini yet. So, toward this aim, the objective of this work was to develop an efficient analytical methodology able to determine polyphenols and tannins content from leaves hydroethanolic extract of S. cumini using Folin-Ciocalteu method by ultraviolet absorption spectrophotometry (UV-Vis). The analytical methodology was developed for the first time in the literature for leaves of this specie shown to be fast and low-cost with results expressed through tannic acid equivalent (TAE). Moreover, the methodology presented selectivity with maximum absorption at 706 nm wavelength, linearity with R2>0.99; limit of detection 0.275 µg TAE mL-1 and 0.102 µg TAE mL-1; limit of quantification 1.046 µg TAE mL-1 and 0.912 µg TAE mL-1 for total polyphenols and total tannins, respectively. Furthermore, the methodology was accurate with recover value greater than 98%, as well as exact, reproductive, and robust with coefficient of variation values less than 15% for both compounds. All the results are found within the fixed limits according to RDC 166/2017.

RESUMO A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, a produção e a maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, divididas em três grupos, receberam um dispositivo de progesterona intravaginal, estradiol e PGF2α, além de 2mL de solução salina (grupo controle), 250 (grupo rbST 250) ou 500mg de rbST (grupo rbST 500). Cinco dias depois, realizou-se a ovum pick up, e os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados, classificados e maturados in vitro. Os dados de contagem foram comparados pelo procedimento glht (General Linear Hypothesis Test), e os dados em porcentagem foram submetidos ao qui-quadrado, no programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto à quantidade de folículos e à taxa de maturação. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram significativamente superiores (P<0,05) ao grupo controle em relação ao número de folículos grandes (0,42±0,20 vs. 0). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes, e 500mg de rbST aumentam a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi.

ABSTRACT In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, production, and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindhi cows were divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device, estradiol and PGF2α, and 2mL of solution saline (Control Group), 250 (rbST 250 Group) or 500mg rbST (rbST 500 Group). Five days later, the ovum pick up was performed, and the cumulus-oocyte (CCO) complexes recovered were selected, classified, and matured in vitro. The counting data were compared by the glht (General Linear Hypothesis Test) procedure, and the percentage data were submitted to Qui- square, in the statistical program R, where differences were considered significant when P< 0.05. There was no difference (P> 0.05) between the groups regarding follicle quantity and maturation rate. The rbST 250 and rbST 500 groups were significantly higher (P< 0.05) than the Control group in relation to the number of large follicles (0.42±0.20 versus 0). The rbST 500 group presented higher (P< 0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. rbST increases the number of large follicles and 500mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindhi cows.

ABSTRACT This paper aimed to evaluate the clinical and laboratory findings of a case of pituitary dwarfism in a 4-month-old female Poodle dog. The clinical signs observed were a reduced body size, soft and woolly coat, retention of the sub-coat, absence of primary hairs, scaling of the skin of the head region and deciduous teeth. Hormonal analyses indicated values of 0.5 ng/ml for growth hormone (GH), 0.44 ng/ml for total T3 and 1.44 ng/dl for free T4. GH levels were below normal, thus indicating a pituitary dwarfism.

RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar los hallazgos clínicos y de laborato- rio de un caso de enanismo hipofisario en un canino de raza Poodle, hembra de 4 meses. Los signos clínicos observados fueron un menor tamaño corporal, pelaje suave y lanoso, retención del sub-pelaje, ausencia de pelos primarios, descamación de piel de la región de la cabeza y dientes de leche. Los análisis hormonales indicaron valores de 0.5 ng/ml para la hormona del crecimiento (GH), 0.44 ng/ml para T3 total y 1.44 ng/dl para T4 libre. Los niveles de GH estaban debajo de lo normal, indicando así, un cuadro de enanismo hipofisario.

Abstract Biflorin (6,9-dimethyl-3-(4-methylpent-3-en-1-yl) benzo[de]chromene-7,8-dione) is a promising substance that has been increasingly studied in the past decades due to its diverse pharmacological properties (i.e. antitumor, antioxidant, antiinflamatory, antimicrobial activity etc.). Aiming the comprehension of its antitumoral activity we investigated the cell proliferation and cytotoxicity habilities of biflorin against mice splenocytes Balb/c. Biflorin was able to stimulate mice splenocytes Balb/c in 48 h of incubation at a concentration of 20.2 µM. Its immunostimulation promoted the production of cytokines such as: TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-6 and IL-17, inducing the immune profile toward a Th1 response. Moreover, an original method which led to an excellent yield with less processing time compared to the methods described in the literature was developed to obtain biflorin, from sawdust of Capraria biflora L., Scrophulariaceae. This method shows a great potential of increasing the production of this pharmacological active compound.

O sucesso do consórcio entre espécies cultivadas depende da adoção de práticas que proporcionem, em momento oportuno, maior habilidade competitiva a uma espécie em detrimento da outra. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso do glyphosate no manejo da braquiária em consórcio com o milho. O experimento foi realizado em delineamento de blocos casualizados com quatro repetições. Os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 5 x 2 + 2, sendo o primeiro fator correspondente às doses do herbicida glyphosate (48, 96, 144, 240, 480 g ha-1 do equivalente ácido (e.a.)), e o segundo, aos estádios vegetativos da braquiária no momento da aplicação (dois e quatro perfilhos). Foram adicionadas duas testemunhas, constituídas pela testemunha capinada e pela testemunha sem aplicação do herbicida. O número de plantas e o de perfilhos, bem como a matéria seca da braquiária, foram reduzidos com a aplicação do glyphosate. O aumento das doses de glyphosate causou maior intoxicação da forrageira, que foi mais sensível ao herbicida no estádio vegetativo de dois perfilhos. A matéria seca do milho foi maior nas maiores doses do glyphosate. Todavia, a altura das plantas não foi afetada. O peso de mil grãos e a produtividade de grãos do milho aumentaram com o incremento da dose do glyphosate. A ausência de aplicação influenciou negativamente a colheita do milho. Conclui-se que as dose de 96 e 144 g ha-1 e.a., quando aplicadas no estádio de dois e quatro perfilhos, respectivamente, reduz o crescimento da braquiária e não afeta a produtividade de grãos do milho.

The success of the intercropping among cultivated species depends on the adoption of practices that provide, in due course, greater competitive ability of a species over another. The objective of this study was to evaluate the use of glyphosate herbicide in the suppression of Brachiaria (signalgrass) intercropped with maize. The experiment was conducted in a randomized complete block design with four replications. The treatments were arranged in a 5 x 2 + 2 factorial arrangement, the first factor corresponding to the doses of glyphosate (48, 96, 144, 240, 480 g ha-1 of the acid equivalent (a.e)) and the second one to the vegetative stages of the signalgrass at the time of application (2 and 4 tillers). Two controls were added to the treatment list, comprising controls without herbicide application and hand removal of the signalgrass. The number of plants, tillers and dry matter of signalgrass was reduced with glyphosate. The increase of the glyphosate doses enhanced the injure to the forage plants, mainly when the compound was sprayed at the two-tiller vegetative stage. The dry matter of maize plants increased proportionally to the glyphosate dose. However, the height of the maize plants was not affected. The grain mass and productivity of maize grain increased with increasing dose of glyphosate. The maize yield was negatively influenced on the untreated control. Glyphosate at 96 and 144 g ha-1, when applied at 2 and 4 tiller stage, respectively, reduces the growth of signalgrass and does not affect the maize grain yield.

O objetivo geral deste trabalho foi analisar o efeito da radiação vermelha de baixa intensidade sobre alguns parâmetros cinéticos do espermatozoide canino criopreservado. Ejaculados de oito cães adultos foram centrifugados, rediluídos em meio tris-gema de ovo com 6% de glicerol, e, posteriormente, fracionados em: T1: incidência de radiação vermelha (660 NM) (Fisioled - Mmoptics - 100mW) por 60 segundos, antes do resfriamento e após a descongelação; T2: incidência somente antes do resfriamento; T3: incidência somente após a descongelação; e T4: sem incidência. Após a descongelação, as amostras foram submetidas ao TTR utilizando-se Sperm Class Analyzer(r). No TTR0, TTR60 e TTR90, não houve diferença entre as variáveis analisadas pelo CASA. Somente no TTR30 os efeitos da incidência da radiação vermelha foram evidentes e significativos em T1 e T2; T1 resultou em baixa MT (12,5 + 10,6%) e T2 determinou o melhor resultado de MT 40,3 + 26,1%. De forma similar T1 apresentou maior número de espermatozoides estáticos (77,5±28,9%) em relação ao T2 (50,6±28%). Concluiu-se que a dupla incidência de radiação vermelha de baixa intensidade antes do resfriamento e após a descongelação teve efeito deletério sobre a motilidade do espermatozoide canino, expressa principalmente aos 30 minutos após descongelação.

The aim of this study was to analyze the effect of low intensity red light on some kinetic parameters of cryopreserved canine sperm. Ejaculates from 08 adult dogs were centrifuged, diluted in Tris-egg yolk with 6% glycerol, and subsequently separated into: T1: incidence of red light (660 nm) (Fisioled -MMOptics - 100mW) for 60 seconds before the cooling and after thawing, T2: just before cooling, T3: only after thawing, and T4: no incidence. After thawing the samples were subjected to TTR using Sperm analyzer(r). In TTR0, TTR60 and TTR90 there were no differences between the variables analyzed by CASA. Only in TTR30 the effects of the incidence of red light were visible and significant in T1 and T2. T1 resulted in low MT (12.5 ±10.6%) and T2 determined the best result of MT 26.1%±40.3. Similarly T1 showed a higher number of static spermatozoa (77.5±28.9%) compared to T2 (50.6±28%). We concluded that the double incidence of low intensity red light, before cooling and after thawing, had a deleterious effect on canine sperm motility expressed at 30 minutes after thawing.

A dexametasona, um glicocorticóide sintético, tem a capacidade de atravessar a placenta aumentando o nível de circulação de corticosteróides da mãe para o feto durante a prenhez. Quando administrada nas fases finais da prenhez pode produzir efeitos indesejáveis na formação da placenta e em vários órgãos da prole. Assim, o presente estudo objetivou investigar o efeito da administração da dexametasona (0,8mg/dia/animal) nos cinco primeiros dias da prenhez, sobre o desenvolvimento placentário de ratas. Utilizou-se 30 ratas albinas, divididas em dois grupos: Grupo I -ratas prenhes sem aplicação de dexametasona, sacrificadas ao 7º e 14º dia; Grupo II -ratas submetidas à aplicação de dexametasona nos cinco primeiros dias de prenhez, sacrificadas ao 7º e 14º dia. Os resultados mostraram que a dexametasona não afetou o número e a histologia dos sítios de implantação, porém, promoveu alteração no disco placentário ocasionando hipertrofia na camada de células trofoblásticas gigantes. Não foram evidenciadas alterações no teor de colágeno, porém houve interferência no metabolismo do glicogênio no espongiotrofoblasto trofospongio. Na morfometria de linhas houve diferença entre os grupos na região de labirinto e células trofoblásticas gigantes, porém a morfometria de pontos só ratificou as alterações percebidas na região do labirinto.

The dexamethasone, a synthetic glucocorticoid, has the ability to cross the placenta by increasing the level of movement of corticosteroids from mother to fetus during pregnancy. When administered in the late stages of pregnancy can produce effects undesirable on placental formation. The present study aimed to investigate the effect of administration of dexamethasone (0.8mg/day/animal) in the first five days of pregnancy, on placental development in rats. We used 30 albino rats, divided into two groups: Group I -pregnant rats without the application of dexamethasone, sacrificed to the 7th and 14th day. Group II -rats subjected to the application of dexamethasone in the first five days of pregnancy, sacrificed to the 7th and 14th day. The results showed that dexamethasone did not affect the number and histology of the implantation sites, but promoted changes in the disk placental causing hypertrophy in trophoblastic giant cell layer. No changes were found in the content of collagen, but there was interference with the metabolism of glycogen in spongiotrophoblast. The morphometry of lines showed, a difference between groups in the region of labyrinth and trophoblast giant cell. However, in morphometry of points there was a difference between groups in the region of labyrinth.

Soro e rim de 75 suínos mestiços sem raça definida, criados em sistema extensivo e abatidos em Timon (MA) e Teresina (Piauí), Brasil, duas cidades separadas pelo Rio Parnaíba e 75 suínos mestiços de um sistema de criação em confinamento, filhos de Landrace, Large White e/ou Duroc foram utilizados neste estudo. Das 150 amostras analisadas pela prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM), sete foram reagentes e o sorovar Icterohaemorrhagiae (42,86%) foi o mais frequente. Uma comparação entre os dois sistemas para examinar uma predisposição para infecção para Leptospira spp. mostrou que a suscetibilidade foi maior nos animais criados extensivamente do que naqueles criados em confinamento (teste χ2, p<0,05). A presença de infiltrado inflamatório foi significantemente maior nos animais soropositivos comparados aos soronegativos (p<0,05, Teste U de Mann-Whitney). A análise morfométrica mostrou Leptospira spp. e o antígeno de leptospira apenas nos animais soropositivos (p<0,05, teste de U de Mann-Whitney). Apoptose em células epiteliais tubulares foi significantemente mais evidente nos animais infectados comparados aos não infectados (p<0,05, Teste U de Mann-Whitney). Uma eventual associação de antígeno de Leptospira e células epiteliais em apoptose sugere um provável mecanismo de lesão renal na leptospirose suína.

Serum and kidney of 75 mixed bred swine (no definite breed) reared in an extensive system and slaughtered in Timon (state of Maranhão) and Teresina (state of Piauí), Brazil, two cities separated from each other by the Parnaiba River, and 75 crossbred swine from a confinement rearing system, sired by Landrace, Large White and/or Duroc, were used in this study. From the 150 analyzed samples for the microscopic agglutination test (MAT), seven were reagents and the serovar Icterohaemorrhagiae (42.86%) was the most frequent. A comparison between both systems to verify a predisposition to Leptospira spp. infection showed that susceptibility was greater in extensively reared animals than in those bred in confinement (χ2 test, p<0.05). Inflammatory infiltrates covered an average area larger in the seropositive revealing a significant difference for the seronegative animals (p<0.05, Mann-Whitney U-Test). Morphometric analysis showed Leptospira spp. and antigen labeling in seropositive animals only (p<0.05, Mann-Whitney U-test). Apoptosis in tubular epithelial cells was significantly more evident in the infected animals compared to uninfected. The rearing system and environment conditions are an important factor in the susceptibility of swine to Leptospira spp. infection. An eventual association of leptospira antigen and apoptotic cells suggests a probable mechanism of renal injury at leptospirosis.

Eugenia candolleana DC. (Myrtaceae), conhecida popularmente como "murta" ou "murtinha", é uma espécie vegetal sem estudos químicos e farmacológicos descritos na literatura, distribuída no Nordeste brasileiro, principalmente, na Zona da Mata. Na medicina popular do Estado de Sergipe é utilizada no tratamento de distúrbios febris e da dor. O presente estudo buscou avaliar as possíveis atividades antinociceptiva e antiinflamatória do óleo essencial extraído das folhas de E. candolleana DC (OEEc) em roedores. A administração intraperitoneal (i.p.) do OEEc (25, 50 e 100 mg/kg) reduziu significativamente o número de contorções no teste das contorções abdominais e a duração da lambida da pata na segunda fase do teste da formalina (p < 0,001). Entretanto, a administração do OEEc não alterou o tempo de reação no teste da placa quente. No experimento de peritonite induzido por carragenina, o OEEc reduziu de forma significativa (p < 0,01) a migração de leucócitos para a cavidade peritoneal. Os resultados obtidos sugerem que o OEEc possui ação antinociceptiva, provavelmente mediado por mecanismos periféricos, e ação antiinflamatória.

Eugenia candolleana DC. (Myrtaceae), commonly known as "murta" or "murtinha", is a plant species without any chemical or pharmacological study described in the literature. It has been popularly used for the treatment of pain and fever. This report aimed to investigate the possible antinociceptive and anti-inflammatory effects of the essential oil extracted from fresh leaves of Eugenia candolleana DC. (EOEc) in rodents. Following intraperitoneal injection, EOEc (25, 50 and 100 mg/kg) reduced the number of writhes significantly in a writhing test and the number of paw licks during phase two of formalin test (p < 0.001). However, administration of EOEc did not alter the time of reaction in hot plate test. Furthermore, EOEc inhibited (p < 0.01) the carrageenan-induced leukocyte migration to the peritoneal cavity. These results indicate antinociceptive and anti-inflammatory properties of EOEc probably mediated via inhibition of prostaglandin synthesis or other peripherally pathway.

Levana é um polissacarídeo extracelular, biologicamente ativo, não tóxico, contendo em sua estrutura apenas frutose. A maximização da produção de levana, por via fermentativa, pela linhagem de Zymomonas mobilis ZAG-12, foi estudada utilizando-se um planejamento fatorial de dois níveis 2(4-1), variando-se as concentrações iniciais de sacarose (150, 200 e 250 g.L-1) , extrato de levedura (2.0, 3.5 e 5.0 g.L-1), temperatura (20, 25 e 30ºC) e agitação (50, 75 e 100 rpm). As fermentações foram desenvolvidas por processos descontínuos em frascos Pyrex roscados, de 500 mL, contendo 300 mL de meio a base de sacarose, por 72 horas. No início e ao final do processo, foram dosados: biomassa, etanol, levana e sacarose como açúcares redutores totais. A análise dos dados mostra que o aumento da produção de levana depende tanto dos efeitos da concentração inicial de sacarose, temperatura e agitação, isoladamente, quanto da interação entre agitação e temperatura na faixa experimental estudada. O extrato de levedura não afeta a produção de levana, entretanto, quando a resposta é produção de etanol e biomassa, fica evidente que essa variável é significativa. Os resultados demonstraram que as melhores condições para a produção em batelada ocorreram com 250g/L de sacarose inicial, 100 rpm de agitação, a 20ºC.

Levan is a non-toxic, biologically active, extra cellular polysaccharide composed solely by fructose units. Optimization of levan production by Zymomonas mobilis strain ZAG-12 employing a 2(4-1) fractional factorial design was performed to analyze the influence of the temperature (20, 25 e 30ºC) agitation (50, 75 e 100 rpm), and the initial concentrations of both sucrose (150, 200 e 250 g.L-1) and yeast extract (2.0, 3.5 e 5.0g.L-1) on final levan concentration. Aerobic fermentation was performed batchwise in 500mL Pyrex flasks for 72 hours. Biomass, ethanol, levan and sucrose were determined at beginning and also at end of the fermentations. The experiments showed that the final levan concentration depended on initial sucrose concentration, temperature and agitation velocity and that the initial concentration of yeast extract did not influence levan production. However, when the production of ethanol and biomass were considered, it became evident that yeast extract was a significant variable. The best conditions for levan production occurred at 100 rpm agitation, 20ºC and 250g.L-1 of initial sucrose resulting in 14.67g.L-1 of levan.

The frequency of Pteromalidae species found in Diptera pupae that were collected from cattle dung in Panamá, State of Goiás, Brazil, between May and December 2003 was studied. The pupae were obtained by the flotation method and were individually placed in gelatin capsules until the emergence of the adult flies or their parasitoids. The overall percentage of parasitism was 14.7%. The percentage of parasitism presented by the parasitoids Pachycrepoideus vindemmiae (Rondani), Spalangia cameroni Perkins, Spalangia drosophilae Ashmead , Spalangia endius Walker, Spalangia nigra Latrielle and Spalangia nigroaenea Curtis were 1.7%, 1.4%, 2.4%, 0.7%, 2.4% and 6.1%, respectively.

RESUMO Este estudo relata a ocorrência de superparasitismo em pupas de Cyrtoneurina pararescita Couri (Diptera: Muscidae) pelo parasitóide Spalangia nigroaenea Curtis (Hymenoptera: Pteromalidae) em fezes bovinas em Itumbiara, Goiás, Brasil. Amostras de fezes foram coletadas em intervalos de duas semanas de sua exposição no campo, levadas para o laboratório para extração das pupas pelo método de flutuação. As pupas foram individualizadas em cápsulas de gelatina e mantidas até a emergência das moscas e/ou parasitóides. Foram coletadas duas pupas de C. pararescita, das quais de cada uma emergiram 2 parasitóides pertencentes a espécie S. nigroaenea. Este é o primeiro relato de superparasitismo de S. nigroaenea em pupas de C. pararescita em fezes bovinas no Brasil.

ABSTRACT This study reports the occurrence of superparasitism in pupae of Cyrtoneurina pararescita Couri (Diptera: Muscidae) by the parasitoid Spalangia nigroaenea Curtis (Hymenoptera: Pteromalidae) in bovine dung in Itumbiara, Goias, Brazil. Manure samples, collected at two intervals, were taken to the laboratory and the pupae were extracted by water flotation. The pupae were placed in gelatin capsules until the emergence of flies or their parasitoids. Parasitoids of the species S. nigroaenea emerged from two of the pupae. This is the first report of superparasitism by S. nigroaenea in pupae of C. pararescita in bovine dung in Brazil.

RESUMO Este estudo relata a ocorrência de danos em frutos de goiabeira provocados por uma vespa calcidóidea do gênero Eurytoma Illiger, 1807 (Hymenoptera, Eurytomidae) em um pomar comercial em Vista Alegre do Alto e nos Municípios de Guaraçaí e Mirandópolis, na região norte do Estado de São Paulo, Brasil.

ABSTRACT This study reports the occurrence of guava fruits damaged by a chalcidoid wasp belonging to the genus Eurytoma Illiger, 1807 (Hymenoptera: Eurytomidae) in commercial orchards of São Paulo State, Brazil.

A síndrome de insensibilidade aos andrógenos (AIS) é uma doença com herança ligada ao cromossomo X que afeta pacientes com cariótipo 46,XY, nos quais há prejuízo total (forma completa, CAIS) ou parcial (PAIS) do processo de virilização intra-útero devido à alteração funcional do receptor de andrógenos (AR). Apresentamos uma revisão da AIS e do AR com os dados clínicos, hormonais e moleculares de 33 casos. Analisamos a região codificadora do gene do AR em 33 pacientes de 21 famílias, com quadro clínico e hormonal sugestivo de AIS. Onze pacientes (9 famílias) com diagnóstico de CAIS e 22 pacientes (12 famílias) com diagnóstico de PAIS. Identificamos mutações no gene do receptor androgênico e a etiologia da síndrome de insensibilidade aos andrógenos em 86% das 21 famílias estudadas: 100% das famílias com insensibilidade completa aos andrógenos e 75% das famílias com insensibilidade parcial aos andrógenos. Identificamos 9 mutações no AR descritas anteriormente na literatura (N705S, W741C, M742V, R752X, Y763C, R779W, M807V, R855C e R855H) e 7 mutações foram descritas pela primeira vez nesta casuística (S119X, T602P, L768V, R840S, I898F, P904R e IVS3 - 60 G>A).

Androgen insensitivity syndrome (AIS) is a rare X-linked recessive condition in which patients with 46,XY karyotype have a complete (CAIS) or partial (PAIS) impairment of pre- and postnatal virilization due to mutations in the androgen receptor (AR). We present a concise revision of AIS and the AR and report the clinical, hormonal and molecular study of 33 subjects with AIS. The coding region of the AR was analyzed in 33 subjects with clinical and hormonal characteristics that suggested AIS. Eleven patients (9 families) had CAIS and 22 patients (12 families) had PAIS. Mutations in the AR were identified and the molecular diagnosis of AIS established in 100% of families with CAIS and 75% with PAIS. Nine mutations had been previously described (N705S, W741C, M742V, R752X, Y763C, R779W, M807V, R855C e R855H) and 7 mutations were first described in these cohort of patients (S119X, T602P, L768V, R840S, I898F, P904R e IVS3 - 60 G>A).

Point mutations and small insertions or deletions in the human alpha-globin genes may produce alpha-chain structural variants and alpha-thalassemia. Mutations can be detected either by direct DNA sequencing or by screening methods, which select the mutated exon for sequencing. Although small (about 1 kb, 3 exons and 2 introns), the alpha-globin genes are duplicate (alpha2 and alpha1) and highy G-C rich, which makes them difficult to denature, reducing sequencing efficiency and causing frequent artifacts. We modified some conditions for PCR and electrophoresis in order to detect mutations in these genes employing nonradioactive single-strand conformation polymorphism (SSCP). Primers previously described by other authors for radioactive SSCP and phast-SSCP plus denaturing gradient gel electrophoresis were here combined and the resultant fragments (6 new besides 6 original per alpha-gene) submitted to silver staining SSCP. Nine structural and one thalassemic mutations were tested, under different conditions including two electrophoretic apparatus (PhastSystem™ and GenePhor™, Amersham Biosciences), different polyacrylamide gel concentrations, run temperatures and denaturing agents, and entire and restriction enzyme cut fragments. One hundred percent of sensitivity was achieved with four of the new fragments formed, using the PhastSystem™ and 20% gels at 15ºC, without the need of restriction enzymes. This nonradioactive PCR-SSCP approach showed to be simple, rapid and sensitive, reducing the costs involved in frequent sequencing repetitions and increasing the reliability of the results. It can be especially useful for laboratories which do not have an automated sequencer.