RESUMO A cartilagem elástica é composta por condroblastos e condrócitos, matriz extracelular e envolta por pericôndrio. Possui uma baixa capacidade de regeneração e é um desafio em reparos cirúrgicos. Um dos obstáculos na engenharia de tecido estruturalmente sólido e de longa duração é a seleção do material de arcabouço mais adequado. Uma das técnicas para obtenção de biomateriais oriundos de tecidos animais é a descelularização, que diminui a antigenicidade. Neste trabalho, foi utilizada solução alcalina em cartilagem elástica auricular bovina para avaliar a descelularização e a arquitetura da matriz extracelular. As cartilagens foram tratadas em solução alcalina (pH13) durante 72 horas e liofilizadas, e comparadas com cartilagens não tratadas por análise histológica (hematoxilina-eosina, tricrômio de Masson e Verhoeff). Foram determinadas as áreas de interesse para contagem celular e quantificação de fibras elásticas, observada a distribuição de colágeno e fibras elásticas e a presença de proteínas não fibrosas. Os resultados demonstraram que a solução alcalina causou 90% de descelularização na região central e 13% na região periférica, manutenção das características histológicas do colágeno e fibras elásticas e remoção das proteínas não fibrosas. Concluiu-se que a solução alcalina foi eficiente na descelularização e retirada de proteínas não fibrosas de cartilagens elásticas da orelha de bovinos.

ABSTRACT The elastic cartilage is composed by chondroblasts and chondrocytes, extracellular matrix and surrounded by perichondrium. It has a low regeneration capacity and is a challenge in surgical repair. One of obstacles in engineering a structurally sound and long-lasting tissue is selecting the most appropriate scaffold material. One of the techniques for obtaining biomaterials from animal tissues is the decellularization that decreases antigenicity. In this work, alkaline solution was used in bovine ear elastic cartilages to evaluate the decellularization and the architecture of the extracellular matrix. The cartilages were treated in alkaline solution (pH13) for 72 hours and lyophilized to be compared with untreated cartilages by histological analysis (hematoxylin-eosin, Masson's trichrome and Verhoeff slides). Areas of interest for cell counting and elastic fiber quantification were delineated, and the distribution of collagen and elastic fibers and the presence of non-fibrous proteins were observed. The results demonstrated that the alkaline solution caused 90% decellularization in the middle and 13% in the peripheral region, and maintenance of the histological characteristics of the collagen and elastic fibers and non-fibrous protein removal. It was concluded that the alkaline solution was efficient in the decellularization and removal of non-fibrous proteins from the elastic cartilages of the bovine ear.

RESUMO A lesão renal isquêmica pode estar associada a procedimentos urológicos, tais como cirurgia renovascular, cirurgia renal extracorpórea ou transplante renal. Essa injúria, muitas vezes, é seguida de insuficiência renal aguda. O objetivo deste trabalho foi observar a localização da E-caderina e da β-catenina em rim de cães, além de relacionar a expressão dessas proteínas das junções de aderência em diferentes tempos de isquemia e reperfusão com ou sem a aplicação de clorpromazina. Para tanto, foram utilizados 12 cães, distribuídos aleatoriamente em dois grupos de seis indivíduos: grupo A, com isquemia e reperfusão sem tratamento por clorpromazina, e o grupo B, com isquemia e reperfusão tratado por clorpromazina. No procedimento cirúrgico, foi realizada uma incisão paracostal esquerda para identificação e isolamento do rim esquerdo e da artéria renal esquerda. Após o isolamento da artéria, os animais de todos os grupos tiveram o vaso ocluído. Os animais do grupo B receberam clorpromazina via endovenosa, na dose de 5mg/kg, 15min antes da clampagem do vaso, que durou uma hora. Após este período, as artérias renais foram desobstruídas e os órgãos permaneceram em reperfusão por duas horas. Em cada grupo, foram extraídas seis amostras de parênquima renal, com utilização de agulha tru-cut, para marcação com anticorpos anti-E-caderina e anti-β-catenina por meio de imunoistoquímica. E-caderina e β-catenina são diferencialmente expressas em segmentos do córtex e da medula em rim de cães e o uso da clorpromazina não alterou a expressão das duas proteínas.

ABSTRACT Renal ischemia can be associated with some urological procedures, such as renovascular surgery or kidney transplantation, that are often followed by acute renal failure. The aim of this study was to verify the E-cadherin and β-catenin localization in canine kidney in different times of renal ischemia and reperfusion after chlorpromazine application. Twelve dogs were randomly distributed equally into two groups. GroupA with ischemia and reperfusion without chlorpromazine and groupB with ischemia and reperfusion treated by chlorpromazine. GroupB received intravenous chlorpromazine, 15 min before the artery obstruction, which lasted 1 hour. After this period, the clamps in the renal arteries were released and the organ remained in reperfusion for 2 hours. In each group, anti-E-cadherin and anti-β-catenin antibodies were made in six tissue samples from renal parenchyma. E-cadherin and β-catenin are differentially expressed in segments from cortex and medulla in dog’s kidneys and the use of chlorpromazine did not alter the expression of both proteins. Occlusion of the left renal artery in dogs causes morphological alterations mainly in proximal convoluted tubules, beginning 30min after the start of ischemia and being aggravated after two hours of reperfusion. These results reveal that chlorpromazine did not change kidneys’ histological aspect nor E-cadherin and β-catenin expression.

This paper intends to describe the state of anxiety experimented by burned patients in a Burn Unite. A key factor in burned patients care comes from a good psychological attention. The reality shows that the nursing professional observes the emotional symptoms during the first days of admission, and tries to answer the demand for care. Through measuring the perceived level of anxiety in patients admitted to the Burn Unit of choice for our study during the first half of 2009, we intend to identify those who are at risk for higher levels of anxiety during hospitalization, in order to establish a plan of care tailored to the emotional needings of each one. The results allow us to conclude that burnt patients admitted to the Burn Unit have high levels of anxiety; those levels are higher among women and inpatients with more extensive lesions. We also determined that patients admitted for burns in the Burn Unit of our study were mostly male, of Spanish nationality, living in an urban environment, mean age 50 years, and the flame burns and household accidents were the most common cause.

El presente trabajo, pretende describir el estado de ansiedad que experimentan los pacientes ingresados en una Unidad de Quemados. Uno de los factores clave en los cuidados del paciente quemado es una buena atención psicológica. La realidad demuestra que es el profesional de enfermería quien observa los síntomas emocionales durante los primeros días de ingreso y trata de responder a esa demanda de cuidado. Pretendemos, a través de la medición del nivel de ansiedad que perciben los pacientes ingresados en la Unidad de Quemados elegida para nuestro estudio durante el primer semestre del año 2009, identificar a aquellos que estén en riesgo de padecer mayores niveles de ansiedad durante su hospitalización, para así poder establecer un plan de cuidados adaptado a las necesidades emocionales de cada uno. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que los pacientes quemados ingresados en la Unidad de Quemados presentaron niveles elevados de ansiedad que son superiores entre la población femenina, así como en aquellos pacientes con lesiones de mayor extensión. Determinamos también que los pacientes ingresados por quemaduras en la Unidad de Quemados a estudio fueron mayoritariamente varones, de nacionalidad española, residentes en medio urbano con una media de edad de 50 años, siendo las quemaduras producidas por llama en accidentes domésticos la causa más frecuente.

Cystic lesions in the retrorectal or presacral space present a broad differential diagnosis. Rare but typical lesions at this site are those related to embryonic development, which are the most frequent presacral congenital lesions in adults. Amongst these tumors, epidermoid cysts and cystic hamartomas are the most common lesions. Cystic masses, which are asymptomatic in approximately 50% of the cases at diagnosis, may show complications such as infection or malignant degeneration. Initial diagnosis is based on imaging techniques although definite lesion characterization, essential due to their malignancy risk, is given by the pathological analysis of the surgical piece.

Las lesiones del espacio retrorrectal o presacro plantean un amplio diagnóstico diferencial. Una patología típica aunque rara de esta localización son las masas quísticas relacionadas con el desarrollo embrionario, que constituyen las lesiones congénitas presacras más frecuentes en el adulto. De éstas, los quistes epidérmicos y los hamartomas quísticos son las más comunes. Asintomáticas hasta en la mitad de los casos al diagnóstico, las masas quísticas pueden presentar complicaciones infecciosas e incluso degeneración maligna. El diagnóstico inicial se basa en las pruebas de imagen, aunque la caracterización definitiva, de gran importancia dado el riesgo de malignización, viene dada por la anatomía patológica de la pieza quirúrgica. Presentamos dos casos clínicos de lesiones quísticas retrorrectales diagnosticadas en nuestro centro.

Avaliaram-se os efeitos clínicos e histológicos da oclusão do ponto e do duto nasolacrimais de coelhos. Para isso, utilizaram-se 20 coelhos adultos da raça Nova Zelândia, machos e fêmeas, com peso de 3,2±0,4kg, distribuídos em dois grupos: oclusão com n-butil cianoacrilato (GB, n=10) e oclusão com 2-octil cianoacrilato (GO, n=10). Os olhos contralaterais foram utilizados como controle. A permanência da lágrima foi avaliada diariamente pelo teste de Schirmer I. Foram avaliados o desconforto, secreção ocular, epífora e hiperemia conjuntival, previamente ao procedimento (T0) e durante 14 dias (T1-T14). Aos sete e aos 14 dias, cinco animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia, e os dutos nasolacrimais, colhidos, processados e analisados à histologia. Em GB, os valores de Schirmer diferiram de T0 em todos os momentos; em GO não houve diferença. Na comparação com o respectivo controle, GB e GO diferiram significativamente em quase todos os momentos. Ao compararem-se os tratamentos, houve diferença em T6, T7, T9, T10, T11, T12 e T14, sendo os valores de Schirmer superiores em GB. Epífora esteve presente em GB de T1 a T8 e em GO de T1 a T6. À histologia, em GO, aos sete dias, notou-se moderada reação de corpo estranho com marcante necrose e descamação do epitélio canalicular; tais alterações estiveram ausentes aos 14 dias. Em GB, verificou-se, aos sete dias, acentuada reação inflamatória e discreta reação de corpo estranho; aos 14 dias, houve predomínio da reação de corpo estranho. Concluiu-se que ambos os adesivos foram eficazes na obstrução do ponto e do duto nasolacrimais de coelhos, sendo sua aplicação e manuseio fáceis e livres de intercorrências e ambos promoveram reação inflamatória e de corpo estranho que evoluíram para reparação e regeneração aos 14 dias de avaliação.

The objective of this study was to evaluate the clinical and histological effects of occluding the nasolacrimal ducts and points of rabbits. For this study, 20 adult New Zealand rabbits, both males and females, weighing 3.2±0.4kg were allocated into two groups for n-butyl-cyanoacrylate occlusion (GB, n=10) or 2-octyl-cyanoacrylate occlusion (GO, n=10). The contralateral eyes served as the controls. The persistence of tears was evaluated daily using the Schirmer I test. Discomfort, eye discharge, epiphora, and conjunctival hyperemia were assessed prior to the procedure (T0) and during the 14 subsequent days (T1-T14). On days seven and 14, five animals from each group were euthanized, and their nasolacrimal ducts were collected, processed and analyzed by histology. In the GB group, the Schirmer test values differed from that at T0 at all of the subsequent time points, whereas there was no difference in the values observed from the GO group. Compared with the corresponding controls, the GO and GB groups differed significantly at almost all of the time points. When comparing the treatment groups, differences were found at T6, T7, T9, T10, T11, T12 and T14, with higher Schirmer values in the GB group. Epiphora was observed in the GB group from T1 to T8 and in the GO group from T1 to T6. Within seven days post-occlusion, histology revealed a moderate foreign body reaction, with marked necrosis and sloughing of the canalicular epithelium, in the GO group, which was absent at day 14. In the GB group, a marked inflammatory reaction and a mild foreign body reaction were found at day seven, and the foreign body reaction was prevalent at day 14. This study demonstrated that both adhesives were effective in obstructing the nasolacrimal ducts and points of rabbits and that their application and handling are easy and free of complications. However, both adhesives promoted inflammatory and foreign body reactions that evolved to repair and regeneration at day 14 of evaluation.

Descreveram-se os sinais clínicos e achados anatomopatológicos da intoxicação crônica por cobre em um ovino da raça Texxel e definiu-se a conduta diagnóstica correta para confirmação da enfermidade. Um ovino foi encaminhado ao setor de patologia com histórico de apatia, hemoglobinúria e morte em dois a três dias. No exame necroscópico, observaram-se icterícia e edema subcutâneo, fígado aumentado de volume e amarelado e rins escuros. No exame histológico, observaram-se necrose zonal aleatória e acentuada no fígado, necrose epitelial tubular, gotas hialinas e cilindros marrom-alaranjados em túbulos coletores dos rins. O histórico alimentar, a sensibilidade de espécie/raça, o quadro clínico, as alterações macroscópicas e microscópicas sugeriram o quadro de intoxicação crônica por cobre. A confirmação diagnóstica somente foi possível após a marcação de pigmentos de cobre pela técnica histoquímica de Ulzmann e pela quantificação de cobre em matéria seca de fígado e rins, cujos valores foram mais altos que o normal.

The present work describes the clinical signs and anatomopathological findings of chronic copper toxicities in a Texxel breed sheep and defines the optimal diagnostic procedure for confirmation of the disorder. A sheep was sent to pathology analysis service with a history of apathy, hemoglobinuria and death within two to three days. Necropsy showed jaundice and subcutaneous edema, enlarged yellow liver and dark kidneys. The histologic examination showed random zonal necrosis, marked necrosis in the liver and tubular epithelial and orange-brown spotted hyaline cylinders in the collecting tubules of the kidneys. The dietary history, sensitivity of species/breed, clinical, macroscopic and microscopic alterations suggested the framework of chronic copper poisoning. Diagnostic confirmation was only possible after staining copper pigments trough the Ulzmann technique and quantification of copper in the dry liver and kidney, which were higher than normal levels.

Memora nodosa (Silva Manso) Miers é uma espécie da flora do Cerrado cujas folhas e caules são utilizados popularmente no tratamento de feridas e úlceras externas, enquanto as raízes são empregadas para dores abdominais e no tratamento da sarna. O objetivo desse trabalho foi avaliar a toxicidade aguda dos extratos etanólicos das folhas e raízes nas doses de 2000 e 5000 mg kg-1 em ratos e camundongos e a atividade cicatrizante das soluções aquosas contendo 2% desses extratos em feridas cutâneas em ratos. A contração das bordas das feridas foi avaliada por análises histológicas e morfométricas após 4, 7 e 14 dias de tratamento e por reação imunohistoquímica após 7 dias de tratamento. Os extratos etanólicos das folhas e raízes não apresentaram toxicidade na dose de 2000 mg kg-1 para ratos e camundongos e na dose de 5000 mg kg-1 para ratos. Nos camundongos, a dose de 5000 mg kg-1 dos extratos das folhas e raízes provocou alterações histológicas no fígado. Não foram observadas diferenças significativas na contração das feridas entre os grupos tratados com os extratos das folhas e das raízes e o controle após 4 e 7 dias de tratamento. Após 14 dias de tratamento, 50% dos animais tratados com o extrato das raízes apresentaram reepitelização total das feridas e reconstrução parcial dos anexos. A alantoína, isolada do extrato etanólico da raiz, pode ser considerada como um dos metabólitos secundários responsáveis pela aceleração da reepitelização.

Memora nodosa (Silva Manso) Miers is a Brazilian Cerrado species whose leaves and stems are commonly used to treat external wounds and ulcers and the roots are used for abdominal pain and to treat scabies. The purpose of this study was to evaluate the acute toxicity of ethanol extracts from the leaves and roots of M. nodosa at 2000 and 5000 mg kg-1 doses in rats and mice and to evaluate the healing activity of aqueous solutions containing 2% of these extracts on skin wounds in rats. The contraction of the wounds was evaluated by histological and morphometric analysis after 4, 7 and 14 days of treatment and by immunohistochemistry analysis after 7 days of treatment. The ethanol extracts of leaves and roots presented no toxicity at a 2000 mg kg-1 dose for rats and mice, and at a 5000 mg kg-1 dose for rats. Histological changes in the liver of mice were verified with a 5000 mg kg-1 dose of the leaf and root extracts. Macroscopic and histological differences were not observed in the contraction of wounds between the groups treated with leaf and root extracts and the control group after 4 and 7 days of treatment. After 14 days of treatment, 50% of the animals treated with the root extract presented total re-epithelialization of wounds and partial reconstruction of the annexes. Allantoin, isolated from the root ethanol extract, can be considered one of the secondary metabolites responsible for accelerating re-epithelialization.

RESUMO A biossegurança é o conjunto de ações voltadas para a prevenção, minimização ou eliminação de riscos que possam comprometer a saúde do homem e dos animais e o meio ambiente. Os primeiros debates sobre a biossegurança tiveram início na década de 1970, devido a preocupações com a segurança nos espaços laboratoriais e com as consequências que os constantes avanços tecnológicos na área de engenharia genética poderiam significar para o homem, bem como para os sistemas ecológicos. No Brasil, a regulamentação para atividades relacionadas a essas áreas teve início em 1995, com a criação da Comissão Técnica Nacional de Biossegurança. Suas funções são fiscalizar a manipulação de organismos geneticamente modificados (OGM) e certificar a segurança dos espaços laboratoriais. Este trabalho tem como finalidade disseminar os conceitos de biossegurança e proporcionar informações que auxiliarão na segurança do homem e do meio ambiente em aspectos relacionados às atividades de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços.

ABSTRACT Biosafety is a set of actions directed to the prevention, minimization or elimination of risks that could jeopardize the human’s and animal’s health and of the environment. The first debates about biosafety were held in the early 1970’s due to the outbreak of transmissible diseases and to the concern to the safety in laboratory arenas. In Brazil, the regulations to activities related to these areas began in 1995 with the formation of the National Technical Biosafety whose functions are the inspection of the manipulated Genetically Modified Organisms (GMO) and of the laboratory arena safety. This review describes the biosafety concepts and their applicability known in order to improve the human safety as well as the environment in related issues to the research activities, production, teaching, technological development and given service.

Macrolides represent the 10-15% of the world-wide market of oral antibiotics. They are one of the safer groups of antibiotics, being the severe adverse reactions very rare. They can produce gastrointestinal reactions, hepatotoxicity and ototoxicity. The psychiatric reactions are found sporadically among the adverse effects. Cases reported to the FDA showed that clarithromycin and ciprofloxacin are the most frequent antibiotics associated with the development of mania. The syndrome has been termed antibiomania. We present three clinical cases seen in a Primary Care office in the last year with similar pictures of hyperactivity and aggressiveness coinciding with the administration of antibiotics of the family of the macrolides.

Los macrólidos representan el 10-15% del mercado mundial de antibióticos orales. Son uno de los grupos de antibióticos más seguros; las reacciones adversas graves son muy raras. Pueden producir reacciones gastrointestinales, hepatotoxicidad y ototoxicidad. Además, las reacciones psiquiátricas se encuentran entre los efectos adversos esporádicamente asociados con su administración, aunque su mecanismo no está bien establecido. Casos descritos en la Food and Drug Administration (FDA) de EE.UU. muestran que la claritromicina y el ciprofloxacino son los antibióticos más frecuentemente asociados con el desarrollo de manía. Este término ha sido denominado antibiomanía. Presentamos tres casos clínicos vistos en una consulta de Atención Primaria en el período de un año con cuadros similares de hiperactividad y agresividad, coincidiendo con la administración de antibióticos de la familia de los macrólidos.

A caracterização da estrutura do solo usando a análise de imagens bidimensionais (2-D) constitui um método simples na obtenção de informações essenciais relacionadas com a porosidade do solo e a distribuição do tamanho de poros. Tal informação é importante para obter dados sobre a qualidade do solo, a qual está diretamente ligada à sua estrutura e aos processos de transporte que ocorrem no seu interior. Na maior parte do tempo os solos são submetidos a vários ciclos de umedecimento ("wetting") e secamento ("drying") (W-D) que podem causar importantes mudanças em solos que possuem estruturas danificadas. Neste estudo foi usada a análise de imagens em 2-D na avaliação de possíveis modificações devido a vários ciclos de W-D na estrutura de amostras de solo danificadas.Três solos diferentes em textura (Latossolo vermelho-amarelo distrófico - LVAd; Nitossolo vermelho eutrófico - NVe, Latossolo vermelho distrófico - LVd) foram submetidos a três diferentes tratamentos: 0WD, amostras controle não submetidas a nenhum ciclo de W-D; 3WD e 9WD, amostras submetidas a 3 e 9 ciclos consecutivos de W-D, respectivamente. Foi observado que os ciclos de W-D produziram mudanças significativas nos poros grandes irregulares dos solos LVAd e LVd e nos poros arredondados do NVe. Importantes mudanças nos poros de 35 até 150 µm foram observadas para todos os solos estudados. A partir dos resultados obtidos pode ser dito que o uso da análise de imagens auxiliou com sucesso na explicação de variações no sistema poroso (formato, número e distribuição de tamanho dos poros) devido aos ciclos de W-D para todos os solos analisados.

Soil pore structure characterization using 2-D image analysis constitutes a simple method to obtain essential information related to soil porosity and pore size distribution (PSD). Such information is important to infer on soil quality, which is related to soil structure and transport processes inside the soil. Most of the time soils are submitted to wetting and drying cycles (W-D), which can cause important changes in soils with damaged structures. This report uses 2-D image analysis to evaluate possible modifications induced by W-D cycles on the structure of damaged soil samples. Samples of three tropical soils (Geric Ferralsol, GF; Eutric Nitosol, EN; and Rhodic Ferralsol, RF) were submitted to three treatments: 0WD, the control treatment in which samples were not submitted to any W-D cycle; 3WD and 9WD with samples submitted to 3 and 9 consecutive W-D cycles, respectively. It was observed that W-D cycles produced significant changes in large irregular pores of the GF and RF soils, and in rounded pores of the EN soil. Nevertheless, important changes in smaller pores (35, 75, and 150 µm) were also observed for all soils. As an overall consideration, it can be said that the use of image analysis helped to explain important changes in soil pore systems (shape, number, and size distribution) as consequence of W-D cycles.

O objetivo do trabalho foi verificar a prevalência de candidíase em transplantados renais. Foram avaliados os prontuários dos pacientes transplantados no Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto de fevereiro de 1968 a fevereiro de 1995. Nesse período foram transplantados 620 pacientes. Destes, 87 apresentaram 107 episódios de candidíase. Locais mais acometidos: trato urinário com 55 episódios, trato respiratório com 28, e trato gastrointestinal com 16. O agente etiológico mais freqüente foi C. albicans com 65 casos seguido de C. tropicalis com 12 e C. glabrata com 11 casos. As infecções do trato urinário mostraram incidência maior (61,7%) nos primeiros 6 meses. A maioria se apresentou clínicamente como infecção bacteriana. No trato respiratório, as infecções foram caracterizadas por recuperação do agente no escarro. No trato gastrointestinal, 9/16 episódios foram esofágicos, com epigastralgia, dor retroesternal, às vezes acompanhados de candidíase oral ou odinofagia. Nos outros episódios o agente foi recuperado nas fezes com quadro clínico de gastroenterite. Nas infecções dos tratos urinário e respiratório, houve associação da candidíase com antibioticoterapia prévia (76% e 67% respectivamente), além de infecções bacterianas concomitantes (34% e 64% respectivamente). As infecções por Candida sp tiveram prevalência geral em torno de 14,5%. A localização predominante foi no trato urinário e, em seguida, nos tratos respiratório e gastrointestinal, apresentando alto índice de associação com antibioticoterapia prévia e infecções bacterianas.

The medical records of 620 patients submitted to renal transplant from February 1968 to February 1995 were surveyed for Candida infection. Of these, 87 presented 107 episodes of candidiasis. In 42.9% the infection appeared up to 6 months after the transplant. The most frequent involved sites were: urinary tract, respiratory tract, and gastrointestinal tract. The most frequent etiological agents were: C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata. Most urinary tract infections ocurred in the first 6 months (61,7%) and manifested clinically as a bacterial infection. In the respiratory tract infections were characterized by isolation of the agent in sputum. In the gastrointestinal infections, 9/16 episodes were esophageal. There were 3 deaths directly related to Candidiasis (one pulmonary and 2 disseminated cases). In the urinary tract, and respiratory tract infections there was association of candidiasis with previous antibiotic treatment (76% and 67%, respectively), and with concomitant bacterial infections (34% and 64%, respectively). The overall prevalence of Candida infections was 14.5%. The predominant location was in the urinary tract (51,0%), followed by the respiratory (26,0%) and gastrointestinal tract (15,0%), with a high rate of association with previous antibiotic treatment and bacterial infections.