Resumo Introdução: Estratégias de vigilância para o parvovírus humano B19 e caracterização genética são ferramentas importantes para o controle regional e global do surto viral. Em São Paulo, Brasil, foi realizado um estudo de parvovírus B19, monitorando a disseminação desse vírus, que é um agente infeccioso e poderia ser erroneamente relatado como uma erupção cutânea e outros tipos de infecções. Método: As amostras de soro foram submetidas ao ensaio imunoenzimático, PCR quantitativo em tempo real e sequenciamento. Resultados: Dos 462 pacientes com casos suspeitos de infecções exantemáticas, os resultados das 164 amostras de soro foram positivos para parvovírus B19 imunoglobulina M. Entre eles, 38 pacientes com eritema infeccioso apresentaram B19 associado com outras infecções, como encefalite, hidropisia fetal, anemia crônica, doenças hematológicas malignas. Essas amostras foram sequenciadas e identificadas como genótipo 1. Conclusão: Os pacientes foram infectados com parvovírus B19 e apresentaram genótipo 1. Monitoração contínua é necessária para detectar todos os genótipos conhecidos e o surgimento de novos genótipos para o controle de casos em saúde pública.

Summary Introduction: Virus surveillance strategies and genetic characterization of human parvovirus B19 (B19V) are important tools for regional and global control of viral outbreak. In São Paulo, Brazil, we performed a study of B19V by monitoring the spread of this virus, which is an infectious agent and could be mistakenly reported as a rash and other types of infection. Method: Serum samples were subjected to enzyme immunoassay, real time polymerase chain reaction, and sequencing. Results: From the 462 patients with suspected cases of exanthematic infections, the results of the 164 serum samples were positive for B19V immunoglobulin M. Among these cases, there were 38 patients with erythema infections and B19-associated with other infections such as encephalitis, hydrops fetalis, chronic anemia, hematological malignancies. These samples were sequenced and identified as genotype 1. Conclusion: This study showed patients with infections caused by B19V and sequencing genotype 1. Continuous monitoring is necessary to detect all known genotypes, and the emergence of new genotypes of these viruses for case management in public health control activities.

RESUMO Introdução: O vírus Epstein-Barr (EBV) pode servir como alvo nos tratamentos terapêuticos, sendo necessário resultado diagnóstico confiável. Objetivo: Avaliar a acurácia da detecção do EBV pela hibridização in situ (ISH), utilizando cinco sondas comerciais em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina de linfoma de Hodgkin (LH) esclerose nodular, comparando os resultados com a imuno-histoquímica (IHQ) e a reação em cadeia pela polimerase (PCR). Material e método: Trinta amostras foram selecionadas, sendo 28 linfonodos, uma medula óssea e um mediastino. Os seguintes parâmetros foram analisados: intensidade do sinal; proporcionalidade das células positivas; qualidade da reação de acordo com o conforto na avaliação, qualidade do sinal e homogeneidade das células marcadas; reação de fundo; morfologia; presença de artefatos; e positividade em outras células não neoplásicas. Todas as amostras foram analisadas para a detecção do EBV usando as cinco sondas, IHQ para proteína da membrana latente tipo 1 (LMP1) e PCR para antígeno nuclear do EBV (EBNA1). As análises estatísticas foram realizadas com o software R1; os índices de 5% para Kappa de Fleiss e Cohen foram considerados significantes. Resultados: A detecção pela IHQ-LMP1 foi de 26,7% (8/30) e 66,7% (20/30) pela PCR-EBNA1. Todas as sondas detectaram EBV. A positividade foi observada em 42/90 (46,7%), 38/90 (42,2%), 45/90 (50%), 27/90 (30%) e 61/90 (67,8%) para as sondas A, B, C, D e E, respectivamente. Discussão: Todas as sondas demonstraram positividade. Conclusão: A sonda E mostrou melhor taxa (67,8%), sensibilidade, especificidade e precisão (100%), boa correlação entre os diferentes observadores e com a PCR, além de ótimo custo/benefício.

ABSTRACT Introduction: Epstein-Barr virus (EBV) may serve as a target in therapeutic treatments, thus reliable diagnostic results are necessary. Objective: The aim of this study was to evaluate the accuracy of EBV detection by in situ hybridization (ISH) using five commercial probes in formalin-fixed and paraffin-embedded samples of nodular sclerosis Hodgkin's lymphoma (HL), and to compare the results with immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR). Material and method: Thirty samples were selected, 28 were lymph nodes, one bone marrow and one mediastinum. The following parameters were analyzed: signal intensity; proportionality of positive cells; quality of the reaction according to comfort for evaluation, sign quality and homogeneity of labeled cells; background reaction; morphology; presence of artifacts; and positivity in other non-neoplastic cells. All samples were analyzed for EBV detection using the five probes, IHC for latent membrane protein type 1 (LMP1) and PCR for Epstein Barr virus nuclear antigen 1 (EBNA1). Statistical analyses were performed with the R1 software; Fleiss' test and Cohen Kappa index of 5% were considered significant. Results: The detection by IHC-LMP1 was 26.7% (8/30) and 66.7% (20/30) by PCR-EBNA1. All probes detected EBV. Positivity was observed in 42/90 (46.7%), 38/90 (42.2%), 45/90 (50%), 27/90 (30%) and 61/90 (67.8%) for probes A, B, C, D and E, respectively. Discussion: All five probes demonstrated positivity. Conclusion: Probe E showed better rate (67.8%), sensitivity, specificity and accuracy (100%), a very good correlation among the different observers and with PCR, besides great cost-benefits relation.

We describe herein a straightforward and efficient preparation of 2',3'-dideoxy-2'-(2''- (trimethylsilyl)ethylthio)thymidine, which allows the preparation of diverse potentially antiviral and/or anticancer nucleosides (disulfides, thiols, sulfides, thiocyanates).

Objetivo Quantificar a modificação da capacidade funcional em um período de três anos em um grupo de pacientes com artrite reumatoide (AR), utilizando os inventários HAQ e EPM-ROM. Métodos Quarenta pacientes com AR em tratamento com metotrexato (MTX) como fármaco antirreumático modificador da doença (DMARD) foram acompanhados por até três anos. O estado funcional foi avaliado no início e no final do período por HAQ e EPM-ROM. Resultados Trinta e dois pacientes foram recuperados, com escore HAQ inicial de 1,14 ± 0,49 (média ± DP) e EPM-ROM de 5,8 ± 2,75. Após um período médio de três anos, o HAQ foi de 1,13 ± 0,49 e EPM-ROM em 6,81 ± 3,66. No subgrupo de sete pacientes submetidos a cirurgia ortopédica, o HAQ diminuiu de 0,84 ± 0,72 para 1,64 ± 0,56; e o EPM-ROM, de 5,8 ± 1,80 para 8,3 ± 0,74. No subgrupo de pacientes não operados, o HAQ variou de 1,2 ± 0,45 para 1,07 ± 0,70; e o EPM-ROM, de 5,7 ± 3,06 para 6,4 ± 3,90. Conclusão Em um grupo de pacientes com AR medicados apenas com MTX como DMARD, houve pouca mudança nas pontuações HAQ e EPM-ROM durante o período médio de três anos. Observou-se agravamento da capacidade funcional no grupo de pacientes operados, em comparação com os não operados. Este fato nos alerta para a necessidade do uso de esquemas terapêuticos mais abrangentes e de maior disponibilidade de cirurgias musculoesqueléticas, em tempo hábil, em pacientes com AR.

Objective To quantify modification of functional capacity in a three-year period in a group of patients with rheumatoid arthritis (RA) using HAQ and EPM-ROM inventories. Methods Forty patients with RA on methotrexate (MTX) as disease-modifying antirheumatic drug (DMARD) were followed for up to three years. The functional status was assessed at the beginning and end of the period by HAQ and EPM-ROM. Results Thirty-two patients were retrieved, with initial HAQ score of 1.14 ± 0.49 (mean ± SD) and EPM-ROM score of 5.8 ± 2.75. After an average period of three years, the HAQ score was 1.13 ± 0.49 and EPM-ROM score, 6.81 ± 3.66. In the subgroup of seven patients submitted to orthopedic surgery, HAQ score decreased from 0.84 ± 0.72 to 1.64 ± 0.56 and the EPM-ROM score, from 5.8 ± 1.80 to 8.3 ± 0.74. In the subgroup of non-operated patients, HAQ score varied from 1.2 ± 0.45 to 1.07 ± 0.70 and EPM-ROM score, from 5.7 ± 3.06 to 6.4 ± 3.90. Conclusion In a group of RA patients in use of only MTX as DMARD, there was little change on HAQ score and EPM-ROM scores over the average period of three years. Worsening functional capacity was observed in the group of operated patients in comparison to the not operated ones. This fact alerts us to the need for use of broader therapeutic regimens availability of musculoskeletal surgeries in a timely manner in patients with RA.

OBJETIVO: Avaliar a concentração mínima inibitória (CMI) de GTA frente a M. massiliense e a susceptibilidade a produtos alternativos para desinfecção de alto nível (DAN). MÉTODOS: Cepas de M. massiliense de origem clínica e de referência foram incluídas no estudo. As culturas ativadas foram submetidas a testes qualitativos com diluições de GTA (de 1,5% a 8%) e com soluções comerciais de ortoftaldeído (OPA) ou ácido peracético (PA), utilizando os tempos de exposição recomendados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária para DAN. RESULTADOS: Todas as cepas de referência e M. massiliense não-BRA100, obtida de escarro, foram susceptíveis às concentrações de GTA, e soluções de OPA e PA. As cepas de M. massiliense BRA100 apresentaram CMI de 8% para GTA e foram susceptíveis a OPA e PA. CONCLUSÃO: M. massiliense BRA100 é resistente a altas concentrações de GTA (até 7%), o que demonstra que esse composto não é eficaz, e deve ser substituído por OPA ou PA nos processos de DAN.

PURPOSE: To evaluate the minimum inhibitory concentration (MIC) of GTA against these microorganisms and alternative disinfectants for high-level disinfection (HLD). METHODS: Reference mycobacteria and clinical M. massiliense strains were included in this study. Active cultures were submitted to susceptibility qualitative tests with GTA dilutions (ranging from 1.5% to 8%), and commercial orthophthaldehyde (OPA) and peracetic acid (PA) - based solutions, during the period of exposure as recommended by National Agency of Sanitary Surveillance for HLD. RESULTS: All reference and M. massiliense non-BRA100 strains, recovered from sputum, were susceptible to any GTA concentration, OPA and PA solutions. M. massiliense BRA100 strains presented MIC of 8% GTA and were susceptible to OPA and PA. CONCLUSION: M. massiliense BRA100 strain is resistant to high GTA concentrations (up to 7%), which proves that this product is non-effective against specific rapidly growing mycobacteria and should be substituted by OPA or PA - based solutions for HLD.

Between August 2006 and February 2007, in the state of Rio de Janeiro, Brazil, a massive outbreak of RGM infections after video laparoscopy was mainly associated to the recently described Mycobacterium massiliense species. All confirmed and probable cases reports described the use of high-level disinfection of medical devices by using 2% glutaraldehyde (2% GA) for 30 min before the surgical procedures. We investigated the susceptibility of the M. massiliense isolates recovered during the outbreak to high-level disinfection after 30 min, 1h, 6h and 10h of exposure to the commercial disinfectants. Reference strains for official mycobactericidal tests such as Mycobacterium abscessus, Mycobacterium bovis, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium neoaurum and Mycobacterium smegmatis were included as controls. Although all the reference strains were eliminated in 30 min of exposure to 2% GA, we observed the recovery of all M. massiliense clinical isolates even after 10h of exposure. This study suggests that failures in high-level disinfection and the high tolerance of these M. massiliense clinical strains to the 2% GA were strongly associated to the magnitude of the outbreak.

OBJETIVOS: Verificar evidências da formação de aerossóis durante a manipulação de cepas de micobactérias para teste de sensibilidade às drogas (ANT) e identificação (TIP) e o efeito da descontaminação com solução de álcool 70% e luz ultravioleta (UV) na cabine de segurança biológica (CSB), após os procedimentos laboratoriais. MÉTODOS: Uma placa foi exposta na CSB durante os procedimentos de ANT e TIP. Ao término, a CSB foi limpa e descontaminada com álcool 70% e exposta à luz UV por 15 minutos. Após esse tempo outra placa foi exposta por duas horas, somente com a ventilação da CSB ligada. As placas foram incubadas a 37°C e observadas por 30 dias. Os esfregaços das colônias isoladas foram corados pelas técnicas de Ziehl Neelsen e Gram, e as colônias de bacilo álcool-ácido-resistente (BAAR) foram identificadas pelos métodos tradicionais. RESULTADOS: Nas 38 placas expostas durante o ANT, cresceram micobactérias em 10 placas (26,3%), fungos em uma (2,6%) e outros bacilos em duas (5,3%). Das placas com micobactérias, oito (80%) foram identificadas como M. tuberculosis e duas (20%) tiveram identificação inconclusiva. Mesmo após a descontaminação com álcool 70% e uso de UV, cresceram fungos em duas placas (5,3%) e cocos em outras duas (5,3%). Nas 30 placas colocadas nas CSB durante a TIP, cresceram micobactérias em 10 placas (33,3%), fungos em duas (6,6%), cocos em uma (3,4%) e uma mistura de micobactérias e outro bacilo em uma (3,4%). Não houve crescimento nas placas expostas após descontaminação das CSB com álcool a 70% e uso de UV ao término da TIP. CONCLUSÃO: Durante os procedimentos houve formação de aerossóis contendo micobactérias, fato que ficou comprovado pelo crescimento de colônias de micobactérias nas placas expostas. Técnicas laboratoriais adequadas devem ser respeitadas para minimizar a formação de aerossóis como também observar a experiência dos profissionais, a manutenção de um programa de capacitação e a manutenção periódica da CSB.

OBJECTIVES: To verify the evidence of aerosol formation during the manipulation of mycobacteria strains for susceptibility (ST) and identification tests (IT) as well as the decontamination effect of alcohol solution 70% and ultraviolet (UV) radiation in biological safety cabinets (BSC) after laboratory procedures. METHODS: One plate was exposed in a BSC during ST and IT procedures. Afterwards, the BSC was cleaned and decontaminated with alcohol solution 70% and exposed to UV radiation for 15 minutes. After that, another plate was exposed for two hours, only with the BSC ventilation on. Both plates were incubated at 37°C and observed for 30 days. The smears from the isolated colonies were stained with Ziehl Neelsen and Gram techniques, and acid fast bacilli (AFB) were identified by conventional methods. RESULTS: In 38 plates exposed during ST, there was mycobacteria growth in 10 plates (26.3%), fungi in one (2.6%) and bacilli in two (5.3%). Among those plates that presented mycobacteria growth, eight (80%) were identified as M. tuberculosis and two (20%) had inconclusive identification. Even after decontamination with alcohol solution 70% and UV radiation, two plates presented fungi growth (5.3%) and other two presented cocci growth (5.3%). Among 30 plates exposed during IT procedures, there was mycobacteria growth in 10 of them (33.3%), fungi in two (6.6%), cocci in one (3.4%) and one (3.4%) mixed mycobacteria and another bacillus. No growth was observed when alcohol solution 70% and UV radiation were used for decontamination after IT procedures. CONCLUSION: During the procedures there was aerosol formation with mycobacteria, which was proved by mycobacteria growth on the exposed plates. Not only should adequate laboratory techniques be respected to minimize aerosol formation, but professional expertise, the continuity of capacity programs and periodic BSC maintenance should also be observed.

O copolímero butadieno - acrilonitrila - NBR é comumente aplicado na confecção de gaxetas e anéis de vedação para transformadores elétricos isolados a óleo mineral. Durante o uso esses materiais permanecem em contato com óleo em temperaturas próximas a 90 ºC provocando alterações físicas e químicas no material elastomérico e no óleo. Neste trabalho, estudou-se a variação das propriedades mecânicas do elastômero resultantes do ensaio de compatibilidade (ASTM D 3455)[3]. A caracterização mecânica foi realizada por ensaios de resistência a tração, dureza e análise dinâmico-mecânica (DMA). A verificação da estabilidade térmica e a composição do NBR foram obtidas através de análise termogravimétrica (TGA).

The copolymer of acrylonitrile and butadiene - NBR is commonly used to manufacture gaskets and seals to be used in electrical transformers insulated by mineral oil. During operation those materials are constantly in contact with oil at temperatures that can reach 90 ºC, causing physical and chemicals changes in both gaskets and oil. In this paper the changes in elastomer mechanical properties after the compatibility test were studied (ASTM D 3455)[3]. This characterization was done by tension properties, hardness and dynamical mechanical analysis (DMA). The evaluation of thermal stability and composition of the NBR was carried out through thermogravimetry analysis (TG).

O presente estudo descreve o isolamento e o crescimento do vírus selvagem da rubéola na linhagem celular RC-IAL. A susceptibilidade da linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) para o vírus-padrão da rubéola RA 27/3 foi anteriormente descrito por nós(4). Amostras de 20 pacientes com suspeita de infecção por rubéola foram testadas por sorologia, isolamento viral e nested PCR. Os soros foram testados por Elisa para detecção de anticorpos reagentes para rubéola e nested PCR para detectar o RNA viral. As amostras clínicas de sangue, urina, fragmento de placenta e líquido amniótico foram inoculadas nas linhagens celulares RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) e Sirc (córnea de coelho). O vírus da rubéola foi isolado das amostras clínicas de quatorze pacientes. O efeito citopático (ECP) foi examinado por microscopia de contraste de fase, e o RNA do vírus da rubéola foi amplificado por nested PCR. Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um excelente substrato para isolamento do vírus da rubéola. Estes dados são importantes, pois poucas linhagens descritas na literatura apresentam efeito citopático que possibilite seu uso para isolar o vírus da rubéola de material clínico.

The present study describes the isolation and growth the wild-type rubella virus in RC-IAL. The susceptibility of a rabbit kidney (RC-IAL) to the RV RA 27/3 strain was previously reported by us(4). Samples of 20 patients with suspected cases of rubella infection were tested by serology, virus isolation and nested PCR. The sera were tested by Elisa for the detection of rubella virus antibodies and nested PCR assay was performed to detect RNA virus. The samples of urine, blood, fragments of placenta and amniotic fluid were inoculated in the RC-IAL (rabbit kidney, Institute Adolfo Lutz) and Sirc (rabbit cornea) cell lines. Rubella virus was isolated in samples from 14 of the patients. The CPE (cytopathic effect) was visualized by phase contrast and RV RNA was amplified by nested PCR.The results obtained showed that the cellular lineage RC-IAL is an excellent substratum for isolation of the rubella virus. These findings are important since this is one the few cell lines described in literature that presents a cytopathic effect, so that it can be used to isolate the virus of the clinical specimens.

Este trabalho descreve o rápido crescimento do vírus da rubéola em amostras clínicas em cultura primária de fibrocondrócitos com desenvolvimento de efeito citopático em resposta a infecção pelo vírus da rubéola. As células foram isoladas do menisco do joelho do coelho após extração enzimática e incubadas a 37°C em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino. Seis amostras clínicas de urina, sangue e liquor foram inoculadas na cultura primária de fibrocondrócitos e na linhagem Vero. As células de fibrocondrócitos apresentaram efeito citopático após 24 horas de incubação e o vírus foi detectado por imunoistoquímica e Nested PCR. As células infectadas apresentaram aspecto arredondado, com formação de alguns prolongamentos citoplasmáticos e sincícios, produzindo células multinucleadas. A curva de crescimento da infecciosidade do vírus foi mais alta quando comparada com a linhagem celular Vero.

This study describes the rapid growth of the rubella virus in samples of a primary fibrochondrocyte cell culture with the development of a cytopathic effect (CPE), in response to infection by the rubella virus. The cells were isolated from the meniscus joint of a rabbit after enzymatic extraction and incubated at 37°C with a Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), supplemented with 10% fetal calf serum. A total of six clinical samples from urine, blood and cerebrospinal fluid were inoculated in the fibrochondrocyte and the cell lines of the African green monkey kidney - ATCC CCL-81 (Vero). The fibrochondrocyte cell showed CPE after 24 hours and virus growth was confirmed by immunohistochemistry and Nested PCR. The cells inoculated with samples were examined by phase contrast microscopy and showed characteristic rounding, along with bipolar and multipolar cells. The infection curve increased during the five days of observation, showing that the titers in fibrochondrocyte cells were then higher than those observed in Vero cell lines.

O clássico e importante método do ácido pícrico, usado nas áreas de bioquímica e química de polímeros para a quantificação de grupos aminos, foi escolhido neste trabalho como modelo para investigar a importância do grau de solvatação de grãos poliméricos durante o protocolo analítico. Verificou-se que este método, proposto há cerca de três décadas atrás, falha na quantificação de grupos amino de peptidil-resinas contendo seqüência agregante e polar. Isto ocorre devido à solvatação insuficiente dos grãos quando apenas o CH2Cl2 é utilizado na etapa de ligação do ânion picrato e na subsequente etapa de lavagem. Demonstrou-se que a utilização nestas etapas, de soluções de CH2Cl2/DMF (dimetilformamida) e de CH2Cl2/EtOH permite uma determinação correta dos grupos amínicos de peptídil-resinas. Além da importância em si para o método da síntese de peptídeos em fase sólida, estes resultados representam também a primeira comprovação experimental da correlação quantitativa existente entre o grau de solvatação e a eficiência de um método analítico efetuado em grãos de resinas.

The classic and important picric acid method used in polymers biochemical and chemical fields of polymers for amine group quantification was chosen in this work as a model for evaluating the influence of the resin bead solvation during an analytical procedure. It was observed that this method, proposed almost three decades ago, failed to quantify amine groups of peptidyl-resin containing aggregating and polar sequence. This was due to inefficient solvation of resin beads when only CH2Cl2 was used for picrate anion binding and subsequent washing steps. It was demonstrated that the use of CH2Cl2/DMF (dimethylformamide) and CH2Cl2/EtOH solutions during these steps allows correct determination of peptidyl-resin amine groups. Besides the importance for the solid phase peptide synthesis methodology itself, these findings also represent the first quantitative demonstration of the relationship between solvation degree and the efficiency of a polymer-supported analytical method.