RESUMO Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54μm, cabeça esférica (1,51±0,18μm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17μm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45μm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.

ABSTRACT The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54μm long, the head was spherical (1.51±0.18μm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17μm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45μm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.

RESUMO Blastocistos de suínos foram submetidos ao MALDI-TOF para se identificarem os principais fosfolipídios (PL). Depois, parte destes embriões (D6) foram vitrificados (n=52), ou permaneceram frescos (grupo controle, n=42). Após o aquecimento, os blastocistos foram cultivados in vitro para se avaliar a reexpansão e a eclosão (BE) às 24 e 48 horas. Finalmente, às 48 horas, os BE foram submetidos ao RT-qPCR em busca dos genes BCL2A1, BAK, BAX e CASP3. No MALDI-TOF, a intensidade do íon foi expressa em unidades arbitrárias. O desenvolvimento embrionário foi comparado por qui-quadrado (P<0,05). Entre os PL mais representativos estavam as fosfatidilcolinas [PC (32: 0) + H] +; [PC (34: 1) + H] + e [PC (36: 4) + H] +. Além do PL, o MALDI revelou alguns triglicerídeos (TG), incluindo PPL (50: 2) + Na +, PPO (50: 1) + Na +, PLO (52: 3) + Na + e POO (52: 2) + Na. A reexpansão não diferiu (P>0,05) entre blastocistos frescos ou vitrificados às 24 (33,3%, 32,7%) e 48 horas (2,4%, 13,5%). As taxas de eclosão foram maiores (P<0,05) para o grupo fresco comparado ao vitrificado às 24 (66,7% x 15,4%) e 48 horas (97,6% x 36,0%). O BAX estava mais expresso (P<0,05) após a vitrificação. Concluindo, os blastocistos Piau podem ser criopreservados por Cryotop. Este estudo também demonstrou que a via apoptótica pode ser responsável pela baixa eficiência da criopreservação de embriões suínos.

ABSTRACT Piau porcine blastocysts were submitted to MALDI-TOF to identify the main phospholipids (PL). After that, in vivo blastocysts (D6) were vitrified (n=52), non-vitrified were used as control (n=42). After warming, blastocysts were in vitro cultured to assess re-expansion and hatching at 24 and 48 hours. Finally, at 48 hours, hatched blastocysts were submitted to RT-qPCR searching for BCL2A1, BAK, BAX and CASP3 genes. For MALDI-TOF, the ion intensity was expressed in arbitrary units. Blastocyst development was compared by Qui-square (P< 0.05). Among the most representative PL was the phosphatidylcholine [PC (32:0) + H]+; [PC (34:1) + H]+ and [PC (36:4) + H]+. Beyond the PL, MALDI revealed some triglycerides (TG), including PPL (50:2) + Na+, PPO (50:1) + Na+, PLO (52:3) + Na+ and POO (52:2) + Na. Re-expansion did not differ (P> 0.05) between fresh or vitrified blastocysts at 24 (33.3%; 32.7%) or 48 hours (2.4%; 13.5%). Hatching rates were higher (P< 0.05) for fresh compared to vitrified at 24 (66.7%; 15.4%) and 48 hours (97.6%; 36.0%). BAX was overexpressed (P< 0.05) after vitrification. In conclusion, Piau blastocysts can be cryopreserved by Cryotop. This study also demonstrated that the apoptotic pathway may be responsible for the low efficiency of porcine embryo cryopreservation.

The aim of this work was to evaluate the number of follicles able to ovum pick up (OPU), the quantity, and quality of oocytes from donors showing different blood levels of cholesterol. For this experiment 5 crossbreed cows were used. Before the beginning of the experiment all cows received an intravaginal progesterone releasing device for 8 days. Two days before the device withdraw all cows received 0.150 mg of d-cloprostenol. The cows were submitted to ovum pick up each 4 days in a total of 6 sections. The cows were injected with 0.150 mg of d-cloprostenol each 8 days, at the moment of the device change. After the evaluation of blood cholesterol, cows were divided in two groups: G1 (cholesterol<50 mg/dl) and G2 (cholesterol>50 mg/dl). There was a difference (p<0.01) between G1 and G2 in the number of follicles/punction, 9.66 and 12.6, respectively, but we didn't observe difference in the number of recovered oocytes and its quality. These results have shown that cows with blood levels of cholesterol higher than 50 mg/dl have a higher number of follicles able to punction.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o número de folículos por punção folicular (PF), a quantidade e a qualidade de ovócitos oriundos de vacas com diferentes níveis séricos de colesterol. Para a realização deste experimento foram utilizadas 5 vacas mestiças. Antes do início do experimento, todas as vacas receberam por 8 dias um dispositivo intravaginal liberador de progesterona e dois dias antes da retirada dos dispositivos todas as vacas receberam 0,150 mg de d-cloprostenol. As sessões de PF ocorreram a cada 4 dias, totalizando 6 sessões. Os animais receberam 0,150 mg de d-cloprostenol a cada 8 dias, juntamente com a troca dos dispositivos. Após avaliação do nível sérico de colesterol, as vacas foram divididas em dois grupos: G1 (colesterol<50 mg/dl) e G2 (colesterol>50 mg/dl). Foi registrado uma diferença (p<0,01) entre o G1 e o G2 quanto ao número de folículos/punção, 9,66 e 12,6, respectivamente, não sendo observado diferença (p>0,05) no número de ovócitos coletados e na qualidade dos mesmos. Verificou-se que vacas com níveis de colesterol superior à 50 mg/dl apresentaram um maior número de folículos aptos à punção.