Abstract Background: Proteases play an important role for the proper physiological functions of the most diverse organisms. When unregulated, they are associated with several pathologies. Therefore, proteases have become potential therapeutic targets regarding the search for inhibitors. Snake venoms are complex mixtures of molecules that can feature a variety of functions, including peptidase inhibition. Considering this, the present study reports the purification and characterization of a Kunitz-type peptide present in the Dendroaspis polylepis venom as a simultaneous inhibitor of elastase-1 and cathepsin L. Methods: The low molecular weight pool from D. polylepis venom was fractionated in reverse phase HPLC and all peaks were tested in fluorimetric assays. The selected fraction that presented inhibitory activity over both proteases was submitted to mass spectrometry analysis, and the obtained sequence was determined as a Kunitz-type serine protease inhibitor homolog dendrotoxin I. The molecular docking of the Kunitz peptide on the elastase was carried out in the program Z-DOCK, and the program RosettaDock was used to add hydrogens to the models, which were re-ranked using ZRANK program. Results: The fraction containing the Kunitz molecule presented similar inhibition of both elastase-1 and cathepsin L. This Kunitz-type peptide was characterized as an uncompetitive inhibitor for elastase-1, presenting an inhibition constant (Ki) of 8 μM. The docking analysis led us to synthesize two peptides: PEP1, which was substrate for both elastase-1 and cathepsin L, and PEP2, a 30-mer cyclic peptide, which showed to be a cathepsin L competitive inhibitor, with a Ki of 1.96 µM, and an elastase-1 substrate. Conclusion: This work describes a Kunitz-type peptide toxin presenting inhibitory potential over serine and cysteine proteases, and this could contribute to further understand the envenomation process by D. polylepis. In addition, the PEP2 inhibits the cathepsin L activity with a low inhibition constant.

Avaliaram-se o consumo e a digestibilidade dos nutrientes, o ganho de peso e a conversão alimentar de bovinos de corte recebendo dietas contendo feno de capim-tifton 85 e silagem de milho nas proporções 100:0; 68:32; 35:65 e 0:100, com base na MS. Foram utilizados 19 animais mestiços Limousin x Zebu, não-castrados, com PV inicial de 301 kg, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado. A relação volumoso:concentrado foi de 58:42, com base na MS. O ensaio teve duração de 99 dias, sendo 15 dias de adaptação e três períodos de 28 dias para avaliações. Para determinação da excreção fecal, utilizou-se a fibra em detergente ácido indigestível (FDAi) como indicador. Os consumos médios de MS, MO, PB, CT e FDN apresentaram efeito quadrático em função de níveis crescentes de silagem de milho. Para os consumos de MS e MO, estimaram-se valores máximos de 7,52 e 7,08 kg/dia para os níveis de 61,13 e 61,78%, respectivamente, de silagem de milho no volumoso. As digestibilidades aparentes de MS, MO e FDN não foram influenciadas pelos níveis de silagem de milho no volumoso. O ganho de peso médio diário aumentou de forma linear e a conversão alimentar decresceu, também de forma linear, com o incremento da proporção de silagem de milho no volumoso das dietas. A silagem de milho como constituinte do volumoso da dieta, na proporção de 61%, proporcionou máximo consumo de MS. O ganho de peso aumentou 4,82 g/dia para cada unidade de silagem de milho adicionada ao volumoso da dieta para novilhos mestiços Limousin.

Intake, digestibility of nutrients, daily gain, and feed conversion were evaluated in beef cattle receiving diets containing Tifton 85 hay and corn silage in the following proportions (% forage DM): 100:0, 68:32, 35:65, and 0:100. A forage:concentrate ratio of 58:42 (% diet DM) was used. Nineteen crossbred Limousin x Zebu bulls averaging 301 kg of initial body weight were allotted to completely randomized design. The trial lasted 99 days with 15 days for diet adaptation and three experimental periods of 28 days. Indigestible acid detergent fiber was used as an internal marker to estimate fecal excretion. The mean daily intakes of DM, OM, CP, TC, and NDF all responded quadratically by increasing the corn silage level in the diet. The quadratic maxima for both DM and OM intakes were 7.52 and 7.08 kg/day at 61.13 and 61.78% of corn silage in the forage fraction of the diet, respectively. The apparent total tract digestibilities of DM, OM, and NDF were not affected by the proportion of corn silage in the diet. However, average daily gain and feed conversion increased and decreased linearly, respectively, when the proportion of corn silage in the forage portion of the diet was increased from 0 to 100%. The weight gain of crossbred Limousin x Zebu bulls increased 4.82 g/day per each unit of corn silage included in the diet.

Avaliaram-se o consumo e as digestibilidades aparentes totais dos nutrientes e o ganho de peso de bovinos de corte recebendo dietas contendo concentrado e silagem de Brachiaria brizantha cv. Marandu nas seguintes proporções: 20:80, 35:65, 50:50 e 65:35, com base na matéria seca. Foram utilizados vinte e quatro animais castrados Holandês x Zebu, com peso vivo inicial médio de 364 kg, distribuídos em um delineamento em blocos casualizados. Por ocasião da ensilagem, procedeu-se o tratamento do capim com o inoculante enzimo-bacteriano Nutroeste 50 t. Para o cálculo da matéria seca fecal, utilizou-se a fibra em detergente ácido indigestível (FDAI) como indicador. Os animais foram alojados em baias individuais e alimentados ad libitum. O ensaio teve duração de 84 dias, divididos em três períodos de 28 dias após 15 dias de adaptação. Os consumos médios de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), extrato etéreo (EE) e carboidratos totais (CHO) e as digestibilidades aparentes totais de MS, MO, CHO e carboidratos não-fibrosos (CNF) elevaram linearmente com o aumento dos níveis de concentrado nas dietas. Comportamento semelhante foi observado para o ganho de peso médio diário, estimando-se incrementos de 0,0184 kg/unidade de concentrado adicionado. Contudo, as digestibilidades aparentes de PB, EE e fibra em detergente neutro (FDN) não foram influenciadas pelas dietas, registrando-se, respectivamente, valores médios de 77, 88 e 60%. Silagem de Brachiaria brizantha não-emurchecida, constituindo 50% da dieta de bovinos H x Z, promoveu ganhos de peso em torno de 1,0 kg/dia.

Intake and total apparent digestibilities of the nutrients and average daily gains (ADG) by beef cattle fed diets based on concentrate and Brachiaria brizantha cv. Marandu silage in the following proportions: 20:80, 35:65, 50:50 and 65:35, in dry matter basis were evaluated. Twenty-four crossbred (Holstein x Zebu) steers, with initial live weight of 364 kg were allotted to a randomized blocks design. At the ensiling process, an enzyme-bacterial inoculant Nutroeste 50 t was applied to the forage. For the determination of fecal dry matter, indigestible acid detergent fiber was used as a marker. The animals were housed in individual pens and fed ad libitum. The experiment lasted 84 days, divided in three periods of 28 days after 15 days of adaptation. The dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), ether extract (EE) and total carbohydrates (CHO) average intakes increased linearly with the increment of the concentrate in the diets. The total apparent digestibility of DM, OM, CHO and non fiber carbohydrates also increased linearly with the increment of the concentrate levels in the diets. Similar behavior was observed for ADG, with increments of 0.0184 kg/unit of concentrate added. However, apparent digestibilities of CP, EE and digestibility of neutral detergent fiber were not affected by the diets, showing values of 77, 88 and 60%, respectively. No wilted Brachiaria brizantha silage in the 50:50 concentrate to forage ratio for beef cattle Holstein x Zebu steers, promoted average weight gain close to 1.0 kg/day.

Utilizaram-se 30 bovinos Nelore, não-castrados, com peso médio de 330 kg e idade média de 20 meses, para se obterem equações de predição da composição química corporal, a partir da composição química da seção HH (Hankins e Howe). Após um período de adaptação de 40 dias, cinco animais foram abatidos para servir como referência para a estimativa do peso do corpo vazio e da composição corporal iniciais dos 25 remanescentes, os quais foram distribuídos em cinco tratamentos com diferentes níveis de concentrado na matéria seca das dietas (25,0; 37,5; 50,0; 62,5; e 75,0%), em delineamento inteiramente casualizado, com cinco repetições. O peso de abate foi determinado em 450 kg. Foram ajustadas equações de regressão linear para a predição da composição química corporal, a partir da composição química da seção HH dos animais Nelore (30 observações), e também foram acrescentados dados relativos a 29 bovinos F1 Simental x Nelore, não-castrados. Concluiu-se que a composição química corporal pode ser predita a partir da composição química da seção HH. Contudo, ressalta-se que as equações de predição da composição física da carcaça a partir da seção HH foram utilizadas para a composição do corpo vazio de ambos animais Nelore e F1 Simental x Nelore.

Thirty Nellore bulls, averaging 330 kg and 20 months of age, were used to obtain the prediction equations of body chemical composition, from the chemical composition of section HH (Hankins and Howe). After a period of adaptation of 40 days, five animals were slaughtered as reference to estimate the empty body weight and the initial body composition of the 25 animals remaining, that were allotted to five treatments with different dietary levels of concentrate in the dry matter (25.0, 37.5, 50.0, 62.5, and 75.0%), in a completely randomized design, with five replicates. The slaughter weight was established in 450 kg. Linear regression equations were fitted to the prediction of body chemical composition, from the chemical composition of section HH of Nellore (30 observations), as well as data of 29 F1 Simental x Nellore bulls. It was concluded that the body chemical composition can be predicted from the chemical composition of the section HH. However, it should be inferred that the prediction equation of carcass physical composition from the section HH were used for the empty body composition of both Nellore and F1 Simental x Nellore bulls.