RESUMO Uma das doenças fúngicas de grande importância que ataca a cultura do abacaxizeiro é a fusariose, causado pelo fungo Fusarium guttiforme. A utilização do Trichoderma spp, que são fungos habitantes do solo e de ocorrência natural na forma endofítica em bromélias, ainda não foi estudada visando o biocontrole da gomose do abacaxizeiro. O trabalho objetivou identificar espécies de Trichoderma endofíticos de bromélias em Restinga e avaliar o antagonismo in vitro e in vivo a F. guttiforme, agente etiológico da gomose do abacaxi. Foram avaliados 5 isolados de Trichoderma mantidos em armazenamento na Clínica Fitossanitária da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (CF/UENF440, CF/UENF441, CF/UENF442, CF/UENF443 CF/UENF444). Um isolado de F. guttiforme patogênico ao abacaxizeiro também foi utilizado. Para identificação específica dos isolados de Trichoderma, efetuou-se a extração do DNA e o sequenciamento dos genes ITS. Procedeu-se a análise filogenética e os isolados endofíticos de bromélias foram agrupados na seção Longibrachiatum e, com baixa homologia dentre as espécies conhecidas, podendo tratar-se, portanto, de nova espécie, o que ainda será confirmado com a obtenção de novas sequências de genes específicos. Foram realizados testes de antibiose in vitro para avaliação e seleção dos isolados antagonistas (antagonismo em cultivo pareado, efeito inibitório de compostos voláteis, não voláteis e não voláteis termoestáveis) e avaliou-se o tratamento biológico de frutos de abacaxi com ferimentos, visando-se avaliar o biocontrole da gomose em pós-colheita. O isolado CF/UENF440 se mostrou como um potencial agente de biocontrole in vitro de F. guttiforme, pois demonstrou forte antibiose em co-cultivo meio de cultura, tanto para compostos não-voláteis quanto para não-voláteis termoestáveis, diferindo significativamente dos demais isolados testados e do controle. Na avaliação do biocontrole in vivo em frutos de abacaxi com ferimentos, os isolados de Trichoderma testados não apresentaram significativo efeito protetor no biocontrole da gomose em frutos na pós-colheita.

ABSTRACT One of the major fungal diseases affecting the pineapple crop is fusariosis, caused by the fungus Fusarium guttiforme. The use of Trichoderma spp., which are soil fungi naturally occurring as endophytic forms in Bromeliaceae, has not been studied for the biocontrol of fusariosis in pineapple plants. The present study aimed to identify Trichoderma species endophytic to Bromeliaceae in “Restinga” and to evaluate the in vitro and in vivo antagonism against F. gutifforme, the etiological agent of pineapple fusariosis. Five Trichoderma isolates were evaluated, which were stored in the Phytosanitary Clinics of the State University of North Fluminense Darcy Ribeiro (CF/UENF440, CF/UENF441, CF/UENF442, CF/UENF443 CF/UENF444). A F. guttiforme isolate, pathogenic to pineapple, was also used. For specific identification of Trichoderma spp., DNA extraction and sequencing and of ITS genes were carried out. Phylogenetic analysis was conducted and the endophytic isolates from Bromeliaceae were grouped in the Longibrachiatum section, showing low homology among the known species, which may indicate a new species that will be confirmed with the obtaining of additional sequences of specific genes. In vitro antibiosis tests were then carried out to select antagonistic isolates (antagonism in matched culture, inhibitory effect of volatile, non-volatile and non-volatile thermostable compounds) and the biological treatment of wounded pineapple fruits was evaluated with the aim of assessing the biocontrol of fusariosis in the post-harvest. The isolate CF/UENF440 was shown to be a potential in vitro biocontrol agent of F. guttiforme since it demonstrated strong antibiosis in co-cultivation culture medium, for both non-volatile and non-volatile thermostable compounds, significantly differing from the remaining tested isolates and control. Considering the evaluation of in vivo biocontrol in wounded pineapple fruits, the tested Trichoderma isolates had no significant protectant effect in the biocontrol of fusariosis in post-harvest fruits.

A seca-da-mangueira, causada pelo fungo Ceratocystis fimbriata, é uma doença endêmica no município de São Fidelis, no norte do Estado do Rio de Janeiro. Ceratocystis fimbriata foi encontrado associado a árvores de pinha (Annona squamosa) apresentando sintomas de seca dos ramos. Isolados obtidos de pinha e manga, originários da mesma região, apresentaram a mesma morfologia e sequências espaçadoras ITS do rDNA similares. Estas seqüências foram também similares a de outros isolados brasileiros de C. fimbriata sensu stricto. Inoculações cruzadas dos isolados de pinha e manga resultaram no desenvolvimento de sintomas em ambas espécies de plantas. Este é o primeiro relato de A. squamosa como hospedeira de C. fimbriata.

Mango branch blight disease, caused by Ceratocystis fimbriata, is endemic to the municipality of São Fidelis in northern Rio de Janeiro State. In addition to mango, C. fimbriata was found associated with sugar apple trees (Annona squamosa) showing symptoms of branch blight in São Fidelis. Sugar apple and mango isolates from the same region had the same morphology and showed similar ITS-rDNA sequences. These sequences were also similar to other Brazilian isolates of C. fimbriata sensu stricto. Cross inoculation of such isolates obtained from diseased sugar apple and mango resulted in diseased symptoms on both plant species. This is the first record of A. squamosa as a host for C. fimbriata.

Detectar a presença da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli em material de propagação da cana-de-açúcar (Saccharum sp.) é importante para direcionar o controle do raquitismo-da-soqueira. Neste trabalho, objetivou-se produzir anticorpo policlonal específico contra Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), visando utilizá-lo em método sorológico para detecção do patógeno. Para isso, o antígeno foi preparado a partir de células intactas, após lavagem por centrifugação de cultura-pura em tampão fosfato salino 0,01 M (PBS) e diálise em glutaraldeido 2% em PBS. O plano de imunização em coelho consistiu de duas injeções intramusculares da mistura 1:1 do antígeno com adjuvante Freund (completo e incompleto, a intervalos de 21 dias) e duas injeções subcutâneas do antígeno puro, a intervalos de dez dias. O anti-soro foi testado pelo método de Dot Blot com revelação por peroxidase para se determinar: (i) título do anticorpo e (ii) reação contra Lxx, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria e bactérias endofíticas de cana-de-açúcar (Azospirillum brasilense, A. lipoferum, Herbaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae e Gluconacetobacter diazotrophicus). A maior diluição analisada do anti-soro 1:20.000 mostrou reação fortemente positiva e específica contra Lxx e ausência de reação contra as demais bactérias. A purificação da fração IgG (Imunoglobulina G) não resultou em melhoria na reatividade e especificidade do anti-soro. Estimou-se o nível de detecção do método a partir de suspensão bacteriana em 2x10(6) células/ml.

To detect the presence of the bacterium Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) in propagation material is important for the control of the ratoon stunting disease. The objective of this work was to improve a serological method for detection of the pathogen and to evaluate the policlonal antiserum specificity produced against Lxx. The antigen was prepared by resuspending pure culture in PBS and dialyzing it in glutaraldehyde 2% in PBS. The immunization schedule in rabbit constituted of two intramuscularly injections of 1:1 mixture of the antigen: Freund adjuvant (complete and incomplete, with interval of 21 days) and two subcutaneous injections of the antigen, with ten-day intervals. The antiserum was tested by Dot Blot and revealed by peroxidase to determine: (i) title of the antibody, (ii) reaction and specificity against Lxx, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria and endophytic sugarcane (Saccharum sp.) bacteria (Azospirillum brasilense, A. lipoferum, Hebaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae, Gluconacetobacter diazotrophicus). The highest dilution of antiserum (1:20.000) presented strong positive reaction and high specificity against Lxx. The purification of the IgG fraction did not improve the antiserum reactivity and specificity. In bacterial cell suspension the level of detection was estimated in 2x10(6) cells/ml.

Avaliou-se a eficiência de Trichoderma longibranchiatum (UFV-1), de T. inhamatum (UFV-2 e UFV-3), compostos de casca e folhas de eucalipto contra Rhizoctonia spp., aplicados em solo de jardim clonal de eucalipto (Eucalyptus sp.). Em solos artificialmente infestados com Rhizoctonia spp., sob condições controladas, os antagonistas UFV-2 e UFV-3 apresentaram níveis elevados de supressividade, quando se aumentou a fonte alimentar na formulação, de 5 a 50 g de farelo de trigo por litro. No campo, o antagonista UFV-3 não teve efeito significativo na redução do inóculo de Rhizoctonia spp. Compostos de casca de eucalipto apresentaram diferentes graus de supressão a Rhizoctonia spp., dependendo da origem e do lote do composto. A incorporação de folhas de eucalipto ao solo favoreceu o aumento do inóculo de Rhizoctonia spp.

The effectiveness of Trichoderma longibranchiatum (UFV-1), T. inhamatum (UFV-2 and UFV-3), eucalyptus bark compost and leaves of eucalyptus was tested for the suppression of Rhizoctonia spp. in the soil of a clonal hedge of eucalyptus under controlled conditions. Soils artificially infested with Rhizoctonia spp., the antagonists UFV-2 and UFV-3 showed high levels of suppression of the pathogen when the feeding formulation rose from 5 to 50 g wheat bran per liter. However, in the field, the antagonist UFV-3 did not show a significant effect in reducing the inoculum of Rhizoctonia spp. Eucalypt us bark compost resulted in different levels of suppression of the pathogen depending on the compost pile and source. Adding eucalyptus leaves to the soil favored the inoculum of Rhizoctonia spp.

Objetivou-se caracterizar isolados de Rhizoctonia solani AG1 e AG4 e isolados binucleados de Rhizoctonia spp. patogênicos a Eucalyptus, por meio de eletroforese de proteínas, em gel de poliacrilamida, e de isoenzimas (ACP, 6-PGDH, LAP, SOD, MDH e IDH), em gel de amido. Para comparação, incluíram-se alguns isolados brasileiros de outros hospedeiros e isolados-padrões de R. solani AG1, procedentes do Japão. Observaram-se diferenças nos padrões gerais de proteínas e nos fenótipos isoenzimáticos entre isolados binucleados e multinucleados e entre isolados de diferentes grupos e subgrupos de anastomose. Isolados de R. solani AG1, procedentes do Brasil e Japão, apresentaram baixa similaridade nos padrões de proteínas e de isoenzimas. Isolados brasileiros morfologicamente semelhantes a R. solani AG1-IB (microesclerodiais) apresentaram padrões de proteínas similares e um maior número de fenótipos isoenzimáticos idênticos entre si. Esta tendência foi independente do hospedeiro e da origem geográfica. Variações nos padrões de proteínas e de isoenzimas foram também observadas dentre isolados brasileiros de R. solani AG4. Discute-se o uso da eletroforese de proteínas e isoenzimas na caracterização de isolados de Rhizoctonia spp. e em estudos genéticos e filogenéticos de fungos deste gênero.

Isolates of Rhizoctonia solani (anastomosis groups AG1 and AG4) and binucleate isolates of other unidentified species, all pathogenic to Eucalyptus in Brazil, were characterized by protein and isozyme (ACP, 6-PGDH, LAP, SOD, MDH e IDH) analysis. Japanese strains of R. solani AG1 and other Brazilian isolates from others hosts were also included for comparison. Differences in protein patterns and isozyme phenotypes were observed between binucleate and multinucleate isolates, and among isolates of different anastomosis groups and subgroups. The protein patterns and isozyme phenotypes of Japanese isolates of R. solani AG1 differed from those of Brazilian isolates of the same anastomosis groups and the same morphological subgroups. Some Brazilian isolates morphologically similar to R. solani AG1-IB presented high similarity in protein patterns and isozyme phenotypes. This similarity was independent of the host plant and geographical origin. Polymorphisms in protein and isozyme patterns were also observed within the Brazilian R. solani AG4 group. We discuss the usefulness of protein and isozyme analyses for characterization of Rhizoctonia spp. isolates and for genetic and phylogenetic studies of fungi of this genus.