Resumo A organogênese in vitro das tangerinas Fremont (Citrus clementina x Citrus reticulata), Thomas (Citrus reticulata) e Nules (Citrus clementina) foi avaliada visando a otimizar o protocolo de regeneração para aplicação da transformação genética. O uso de explantes derivados de epicótilo resultou em maior número de explantes responsivos e maior número de brotações desenvolvidas por explante, quando comparado ao uso de explantes derivados de segmentos internodais. A maior eficiência na regeneração de brotos foi observada na presença de 1 mg L-1 de BAP, independentemente do tipo de explante e da cultivar. O protocolo de organogênese in vitro produziu plantas transgênicas das três cultivares de tangerina, expressando o gene attA sob o controle de promotores específicos de floema.

Abstract The in vitro organogenesis of Fremont (Citrus clementina x ), Citrus reticulataThomas (Citrus reticulata), and Nules (Citrus clementina) mandarins was evaluated aiming to optimize a regeneration protocol that could be applied in genetic transformation. The use of epicotyl-derived explants resulted in higher explant responsiveness and number of shoots developed per explant when compared with the use of internodal-derived explants. The highest efficiency in shoot regeneration was observed in the presence of 1 mg L-1 of BAP, regardless of the explant type and cultivar. The in vitro organogenesis protocol produced transgenic plants from three mandarin cultivars expressing attA gene under the control of phloem-specific promoters.

A organogênese in vitro de limão Cravo (Citrus limonia Osbeck) foi estudada em função do tipo de explante e da suplementação do meio de cultura com citocinina. Foram avaliados quatro tipos de explantes coletados da região do epicótilo e do hipocótilo de plântulas germinadas in vitro. Os explantes consistiram em segmentos de epicótilo, segmentos de hipocótilo, segmentos de hipocótilo ligado a um fragmento do cotilédone e segmentos de hipocótilo cortado longitudinalmente. Os explantes foram cultivados em meio de cultura EME suplementado com benzilaminopurina (0; 0,5; 1,0 e 1,5 mg L-1). As avaliações foram realizadas após seis semanas de incubação, e os melhores resultados considerando-se tanto a porcentagem de explantes responsivos como o número de gemas desenvolvidas por explante foram obtidos com o uso de segmentos de epicótilo como explante. Considerando os explantes derivados da região do hipocótilo, não foi detectada diferença na porcentagem de explantes responsivos com o uso de segmentos de hipocótilo ou de segmentos de hipocótilo ligado a um fragmento do cotilédone. A porcentagem de explantes responsivos diminuiu com o uso de segmentos de hipocótilo cortado longitudinalmente como explante. Não foi detectada nenhuma diferença no número de gemas adventícias desenvolvidas por explante considerando-se os três tipos de explantes derivados da região do hipocótilo. A suplementação do meio de cultura com BAP não é essencial para a organogênese in vitro de limão Cravo. No entanto, o desenvolvimento de gemas adventícias foi estimulado com concentrações entre 0,5 - 1,0 mg L-1.

Rangpur lime (Citrus limonia Osbeck) in vitro organogenesis was studied based on explant type and cytokinin culture media supplementation. Four explants types collected from epicotyl or hypocotyl regions of in vitro germinated seedlings were evaluated. The epicotyl-derived explants consisted of epicotyl segments and the hypocotyl-derived explants consisted of the entire hypocotyl segment, the hypocotyl segment attached to a cotyledon fragment, and the hypocotyl segment divided longitudinally. The explants were cultured on EME culture medium supplemented with benzylaminopurine (0, 0.5, 1.0, or 1.5 mg L-1). The evaluation was performed after 6 weeks. Best results considering both the explant responsiveness and number of shoots developed per explants were obtained when epicotyl segments-derived explants were evaluated. Considering the explant responsiveness of hypocotyl segments-derived explants no difference was detected between the entire hypocotyl segment and the hypocotyl segment attached to a cotyledon fragment. Moreover, the percentage of responsive explants decreased when hypocotyl segments divided longitudinally were tested. No difference was detected for the number of shoots developed per explant considering the three types of hypocotyl-derived explants. Culture media supplementation with BAP was not essential for Rangpur lime in vitro organogenesis. However, adventitious shoot development was stimulated in concentrations between 0.5 - 1.0 mg L-1.