Objective: to validate an analytical method for simultaneous determination and quantification of sulphadoxine and pyrimethamine in human blood dried onto filter paper, whose cost and analysis time can be reduced. Methods: whole blood spotted on filter paper of a healthy volunteer and solutions of sulphadoxine-pyrimethamine standard mixture were used. HPLC separations were carried out on Agilent equipment using a LiChrospher® column C18 with a mobile phase acetonitrile/0.1 M potassium phosphate buffer at pH 3.0 (1:1) for eight minutes under isocratic conditions. A flow rate of 0.7 mL/min, and a 20 mL volume injection were used. External standard method for quantitation of analytes was used. Results: the HPLC method described for the simultaneous determination of sulphadoxine and pyrimethamine in 100 mL of whole blood spotted on filter paper has been found to be linear, precise, accurate and selective. In this method, the sample preparation is simple using liquid-liquid extraction, and HPLC with ultraviolet detection is used. Conclusions: a simple, fast and sensitive method for determination of sulphadoxine and pyrimethamine in human blood dried onto filter paper was validated. This method can be used for the monitoring of both metabolites in pharmacokinetic and clinical studies.

Objetivo: validar un método de análisis para la determinación y cuantificación simultánea de sulfadoxina y pirimetamina en sangre humana secada sobre papel de filtro que sea rápido y barato. Métodos: se usó sangre de un voluntario sano impregnada sobre papel de filtro y soluciones estándar de la mezcla sulfadoxina y pririmetamina. Las separaciones por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) se hicieron en un equipo Agilent sobre una columna C18 LiChrospher® con acetonitrilo/buffer fosfato de potasio 0,1 M a pH 3,0 como fase móvil, usando condiciones isocráticas durante 8 min. Se usó un flujo de 0,7 mL/min y un volumen de inyección de 20 mL. Para la cuantificación de los analitos se utilizó el método del estándar externo. Resultados: el método CLAR descrito para la determinación simultánea de sulfadoxina y pirimetamina en 100 mL de sangre impregnada sobre el papel de filtro mostró linealidad, precisión, exactitud y selectividad. En este método la preparación de la muestra es simple ya que usa extracción líquido-líquido y detección ultravioleta. Conclusión: se obtuvo un método validado que es simple, rápido y sensible para la determinación de sulfadoxina y pirimetamina en sangre humana impregnada sobre papel de filtro, que puede ser usado para el monitoreo de ambos metabolitos en estudios farmacocinéticos y clínicos.

Solanum nudum Dunal (Solanaceae), es una especie vegetal con potencial para desarrollar un tratamiento quimioterapéutico contra la malaria. Este es el primer reporte de un protocolo rápido, eficiente y reproducible de organogénesis directa a partir de segmentos de hoja de plántulas in vitro de esta especie. Los segmentos de hojas de plántulas de 5 meses de germinadas fueron cultivados sobre medio Murashige y Skoog (MS) a mitad de sales y vitaminas, con diferentes concentraciones de Bencilaminopurina (BAP), en combinación con Acido Indolacético (AIA). Se evaluó también el efecto de la iluminación en periodos 0/45, 15/30 y 30/15 días oscuridad/ luz, sobre la inducción de brotes. Se registró un promedio alto de formación de brotes (4,83) en explantes cultivados en medio suplementado con 2,0 mg/L de BAP y 0,1 mg/L de AIA, bajo condición de iluminación por un periodo de 30/15 días oscuridad/luz. Luego de la inducción, los brotes obtenidos fueron transferidos a medio MS suplementado con 0,3 mg/L de Giberelina (GA3), y mantenidos en condiciones de luz donde también enraizaron. Las plántulas regeneradas se llevaron a condiciones de invernadero y fueron morfológicamente similares a las plantas madres.

Solanum nudum Dunal (Solanaceae) is a plant with a potential for developing chemotherapeutic treatments against malaria. This is the first report of a fast, efficient, and reproducible direct organogenesis protocol from leave segments from in vitro seed-grown plantlets. Leaves segments from 5 months old germinated plantlets were placed on half concentration Murashige and Skoog medium (MS), supplemented with several concentrations of Bencilaminopurin (BAP) combinated with Indolacetic Acid (IAA). Dark/ light incubation effect in periods 0/45, 15/30 and 30/15 dark/light days were evaluated on the buds induction. High frequency buds formation was shown (4,83) in explants cultured on MS supplemented with BAP 2,0 mg/L and AIA 0,1 mg/L under a period of 30 days of dark condition incubation. After induction, buds obtained were transferred to MS medium supplemented with gibberellic acid (GA3) 0,3 mg/L and maintained under artificial cool light, there the plantlets rooted. Regenerated plantlets were placed under greenhouse conditions and these were morphologically similar to donor plants.

INTRODUÇÃO: É frequente a associação da malária com complicações como prematuridade, retardo no crescimento intrauterino, baixo peso ao nascer e mortalidade infantil, efeitos pouco estudados em áreas hipoendêmicas para malaria. O objetivo deste estudo foi analisar a relação da malária gestacional com estes efeitos em recém-nascidosnuma região endêmica para malária na Colômbia, entre 1993 e 2007. MÉTODOS: Foram estudadas as características em 1.716 recém-nascidos num estudo de coorte. Fez-se seguimento em 394 gestantes com malária (27% por Plasmodium falciparum e 73% por P. vivax) e 1.322 sem malária. RESULTADOS: Foi encontrada uma relação entre a exposição à malária na gestação e o risco maior de baixo peso ao nascer (RR = 1,37; 1,03-1,83), assim como estatura baixa (RR = 1,52; 1,25-1,85), retardo no crescimento intrauterino (RR = 1,29; 1,0-1,66) e prematuridade (RR = 1,68; 1,3-2,17). A frequência de nascimentos prematuros foi maior nas mães com malária por P. falciparum (77%) que aquelas com P. vivax (RR = 1,77; IC 95%: 1,2-2,6). CONCLUSÕES: O baixo peso ao nascer e o retardo no crescimento foi associado com malária na gestação na Colômbia. A infecção por P. vivax foi relacionada com efeitos adversos sobre o recém-nascido, de modo semelhante em relação ao P. falciparum.

INTRODUCTION: Association between malaria and pregnancy complications, such as prematurity, intrauterine growth restriction, low birthweight and infant mortality has been reported. These effects have been studied widely in areas hyperendemic for malaria, but studies in low-endemic areas are scarce. The study investigated the relation between gestational malaria and low birthweight and intrauterine growth retardation in neonates of a malarial endemic region in Colombia, between 1993 and 2007. METHODS: The pattern of development in 1,716 neonates of women with and without malaria infection during pregnancy was evaluated in a cohort study. A total of 394 infected (27% by P. falciparum and 73% by P. vivax) and 1,322 noninfected pregnant women were followed. RESULTS: Exposure to gestational malaria was associated with increased risk of low birth weight (RR = 1.37; 1.03-1.83), short height (RR = 1.52; 1.25-1.85), intrauterine growth retardation (RR = 1.29; 1.0-1.66) and prematurity (RR = 1.68; 1.3-2.17). Prematurity was 77% higher in infants of mothers with malaria by P. falciparum than infants of mothers with malaria by P. vivax (RR = 1.77; 1.2-2.6). CONCLUSIONS: Low birth weight and intrauterine growth retardation were associated with malaria during pregnancy. Infection with P. vivax was related with adverse effects on the newborn, similar to that reported for P. falciparum.

INTRODUCTION: the search of new natural antioxidant compounds has been of great interest for research since they interrupt the oxidation process via radical pathway of lipid, proteins, DNA and enzymes. The Calophyllum genus belongs to Clusiaceae family producing a great variety of secondary metabolites with antioxidant features; the flavonoids, the coumarins and the xanthones are the more reported compounds. The species from this genus may be a potential antioxidant source. OBJECTIVE: to determine the antioxidant activity of extracts from different polarity of Calophyllum cf. brasiliense Cambess, Calophyllum inophyllum L., Calophyllum sp. METHODS: a percolation process was carried out from the vegetal material by decoction using solvent of different polarity: hexane, dichloromethane, and ethyl acetate and methanol, concentrated at decreased pressure and monitored by thin layer chromatography (TLC). The antioxidant capacity assessment was determined using different methodologies: total phenols, ABTS (2,2-azinobis-[3 ethylbenzothiazolin-6-sulphoni]), FRAP (ferric reducing/antioxidant power) and in some selected ORAC samples (oxygen radical absorbance capacity). RESULTS: the samples containing phenol compounds with a high reducing capacity were CBTExtM, CNHTExtM, CRHTExtA, CRHTExtM, CBHExtA and CBHExtM, which also have very high ORAC values compared with other substrates; the extract with better values was the CBTExtM. The FRAP technique describes very well the oxidative phenomenon in extracts CHSTExtA, CBHExtA, CIHTExtM, CSHTExtM and CIHTExtM: in DPPH•) the extract showing TEAC high values was the CSHTExtA. The CBTExtM extract showed the better inhibition values of ABTS radical. CONCLUSIONS: the polar and moderately polar extracts from the three species of Calophyllum showed a high antioxidant activity in the assessed methodologies.

INTRODUCCIÓN: la búsqueda de nuevos compuestos antioxidantes naturales ha sido de gran interés para la investigación dado que interrumpen el proceso de oxidación por vía radicalaria de lípidos, proteínas, ADN y enzimas. El género Calophyllum perteneciente a la familia Clusiaceae, produce una gran variedad de metabolitos secundarios con características antioxidantes; los flavonoides, las coumarinas y las xantonas resultan los compuestos más reportados. Las especies de este género pueden ser una fuente de antioxidantes potenciales. OBJETIVO: determinar la actividad antioxidante de extractos de diferente polaridad de las especies Calophyllum cf. brasiliense Cambess, Calophyllum inophyllum L., Calophyllum sp. MÉTODOS: se realizó un proceso de extracción del material vegetal por percolación con solventes de diferente polaridad: hexano, diclorometano, acetato de etilo y metanol, se concentró a presión reducida y se monitoreó por cromatografía en capa delgada. La evaluación de la capacidad antioxidante se determinó con diferentes metodologías: fenoles totales, ABTS (2,2-azinobis-[3 etilbenzotiazolin-6-sulfónico]), DPPH (1,1-difenil2-picrilhidracil), FRAP (ferric reducing/antioxidant power) y en algunas muestras seleccionadas ORAC (oxygen radical absorbance capacity). RESULTADOS: las muestras que contienen compuestos fenólicos con una alta capacidad reductora fueron CBTExtM, CNHTExtM, CRHTExtA, CRHTExtM, CBHExtA y CBHExtM, que además, poseen valores ORAC muy altos comparados con otros sustratos, el extracto que presentó mejores valores fue CBTExtM. La técnica FRAP describe muy bien el fenómeno oxidativo en los extractos CSHTExtA, CBHExtA, CIHTExtM, CSHTExtM y CIHTExtM; en (DPPH•) el extracto que presentó altos valores de TEAC fue CSHTExtA. El extracto CBTExtM presentó los mejores valores de inhibición del radical ABTS. CONCLUSIONES: los extractos polares y medianamente polares de las tres especies de Calophyllum presentaron alta actividad antioxidante en las metodologías evaluadas.

INTRODUCTION: early recognition of warning signs in malarial patients allows timely identification of the patient at risk of severe malaria and provides opportune treatment. Jaundice and dark urine are frequent signs that can alert to the occurrence of severe malaria. OBJECTIVE: to study the relationship between jaundice and dark urine with impaired liver and/or kidney function and anemia in malarial patients, and explore their role as warning signs. METHOD: clinical and laboratory data from 199 patients with Plasmodium falciparum malaria, belonging to a case control study conducted in Colombia, were analyzed. the association between dark urine and jaundice with impairment in the urine analysis, the hepatic and renal function test, and hemoglobin were studied. RESULTS: there was association between dark urine and hemoglobinuria (OR= 236, 63-867), hematuria (OR=3.2, 1.6-6.6), proteinuria (OR= 2.3, 1-5.3) and bilirubinuria (OR=2.1, 1-4.4). Jaundice was present in 31% of patients who had renal dysfunction (OR= 2.7, 1.1-6.4) and in 22 % of those with liver dysfunction (OR= 2.1, 0.9-4.5). Jaundice was more likely in patients with total bilirubin > 25.6 µmol/L (OR= 6.1, 2.7-13.4) and blood ureic nitrogen > 7.14 mmol/L (OR= 3.5, 1.4-8.5). CONCLUSIONS: jaundice in patients with malaria may be considered as a warning sign associated with liver and kidney dysfunction. Dark urine was not associated with kidney or liver dysfunction, but was related to bilirubinuria, hematuria and proteinuria, which can be early indicators of failure; dark urine must be studied to clarify its relationship with liver and kidney failure in malaria.

INTRODUCCIÓN: el reconocimiento temprano de signos de peligro en el paciente con malaria permite identificar tempranamente el paciente en riesgo de hacer complicaciones clínicas, para ofrecerle un tratamiento adecuado y oportuno. La ictericia y orina oscura son signos frecuentes que pueden alertar sobre la instauración de una malaria complicada. OBJETIVO: estudiar en el paciente malárico la relación entre ictericia y orina oscura con disfunción hepática o renal y anemia, para establecer su utilidad como signos de peligro. MÉTODOS: se analizó información clínica y de laboratorio de 199 pacientes con malaria por Plasmodium falciparum, de un estudio de casos y controles realizado en Colombia. Se estudió la asociación entre orina oscura e ictericia con alteraciones del uroanálisis, pruebas de función hepática y renal, y hemoglobina. RESULTADOS: hubo asociación entre orina oscura y hemoglobinuria (OR= 236; 63-867), hematuria (OR= 3,2; 1,6-6,6), proteinuria (OR= 2,3; 1-5,3) y bilirrubinuria (OR= 2,1; 1-4,4). La ictericia estuvo presente en 31 % de pacientes con disfunción renal (OR= 2,7; 1,1-6,4) y en 22 % de pacientes con disfunción hepática (OR= 2,1; 0,9-4,5). Se encontró alta probabilidad de presentar ictericia en los pacientes con bilirrubina sérica total >25,6 µmol/L (OR= 6,1; 2,7-13,4) y nitrógeno ureico en sangre> 7,14 mmol/L (OR= 3,5; 1,4-8,5). CONCLUSIONES: la ictericia es un signo de peligro en el paciente malárico que se asocia con disfunción hepática y renal. La orina oscura no se asoció con disfunción renal o hepática, pero se explicó por bilirrubinuria, hematuria y proteinuria, que pueden ser indicadores tempranos de daño; debe estudiarse la orina oscura para aclarar su relación con el daño renal y hepático en malaria.

ANTECEDENTES: la apolipoproteína A1 (apoA1) se ha propuesto como indicador del estado nutricional, pero existe controversia al respecto. OBJETIVO: comparar la apoA1 sérica con la evaluación antropométrica como prueba diagnóstica del estado nutricional de niños (4-11 años) con malaria y sin ella. METODOLOGÍA: diseño descriptivo, prospectivo y transversal, con uso ciego y simultáneo de las dos pruebas diagnósticas. ApoA1 sérica se midió con método nefelométrico (APOA, Laboratorio Beckman®). RESULTADOS: fueron evaluados 262 niños. La frecuencia de algún riesgo antropométrico de desnutrición fue 72% en niños maláricos y 70% en niños sin malaria. Dos de cada tres niños presentaron menos de 0,94 g/L (límite inferior normal) de apoA1. No hubo correlación significativa entre apoA1 y cada indicador antropométrico y los coeficientes rho de Spearman fueron siempre menores de 0,1. Entre niños sin malaria, apoA1 tuvo sensibilidad de 31% y especificidad de 83%, comparada con la clasificación nutricional antropométrica. Entre niños con malaria, la sensibilidad de apoA1 subió a 83% y la especificidad cayó a 27%. CONCLUSIONES: la apoA1 no es una herramienta útil para el diagnóstico del estado nutricional, tanto en niños con malaria como en aquellos sin esta enfermedad.

BACKGROUND: apolipoprotein-A1 (apoA1) has been proposed as indicator of nutritional state, but controversy exists on the matter. OBJECTIVE: to compare serum apoA1 with anthropometric evaluation as a diagnostic test to of nutritional state in children with or without malaria. MATERIAL AND METHODS: descriptive, prospective and cross-sectional design, with blind and simultaneous use of diagnostic tests. Serum ApoA1 was measured with a nephelometric method (APOA, Beckman® Laboratory). RESULTS: 262 children were evaluated. The frequency of some anthropometric risk of malnutrition was 72% in malaric children, and 70% in the non-malaric ones. Two out of every three children had less than 0,94 g/L (lowest normal limit) of apoA1. There was no significant correlation between apoA1 and each one of the anthropometric indicators, and the Spearman's coefficients were lower than 0,1 in every instance. Sensitivity and specificity of apoA1 were, respectively, 31% and 83% among non-malaric children, as compare with the anthropometrical nutritional classification; the corresponding figures among malaric children were 83% and 27%, respectively. CONCLUSION: apoA1 is not a useful tool for diagnosis of the nutritional state, either in malaric or nonmalaric children.

ANTECEDENTES Y PROBLEMA : son muy pocos los estudios latinoamericanos sobre malaria por Plasmodium falciparum (P falciparum) complicada y se requiere estudiarla para identificar un patrón propio. OBJETIVOS : Identificar las complicaciones presentes en pacientes de Tumaco (Nariño) y Turbo (Antioquia) en Colombia, con malaria por P falciparum. MÉTODOS : Diseño de casos y controles. Se aplicaron los criterios diagnósticos de complicación OMS-2000 (Organización Mundial de la Salud). RESULTADOS : Se captaron 64 casos (con malaria por P. falciparum complicada) y 135 controles (con malaria por P. falciparum no complicada). El tiempo de evolución de la enfermedad (promedio 5,6 días en los casos y 5,9 en los controles) y la frecuencia de síntomas fueron similares en ambos grupos (p>0,05), pero la dificultad respiratoria y la ictericia fueron más frecuentes en los casos que en los controles (p<0,05). Los valores promedio de glicemia y creatinina fueron similares en ambos grupos, pero los casos tuvieron hemoglobina y recuento de plaquetas menores que los controles (p<0,05) y mayores niveles de nitrógeno ureico, aspartatoaminotransferasa y bilirrubinas total y directa (p<0,05). Las complicaciones encontradas fueron hiperparasitemia en 48%, disfunción hepática en 44%, síndrome de dificultad respiratoria aguda en 9%, falla renal en 6%, trombocitopenia grave en 5%, anemia grave en 3%, malaria cerebral en 3% e hipoglicemia grave en 2%. Los criterios de complicación malárica de OMS se comparan con otros y se discuten las implicaciones.

BACKGROUND : Latin American studies on severe falciparum malaria are scarce, therefore, the pattern of complications of the region is uknown. OBJECTIVES : To identify characterize severe malaria in patients from Tumaco (Nariño) and Turbo (Antioquia) in Colombia . METHODS : The 2000 World Health Organization criteria for complicated malaria were applied in a cases and controls study. RESULTS : 64 cases ( P falciparum complicated malaria) and 135 controls ( P falciparum uncomplicated malaria) were included. The time of evolution of the disease (mean 5.6 days in cases and 5.9 in the controls) and the frequency of most symptoms were similar in both groups (p>0.05). However, respiratory distress and jaundice was more frequent in the cases (p<0.05). The mean glycemia and creatinina values were similar in both groups; hemoglobin and platelet count were lower in the cases (p<0.05) when compared to controls. On the other hand, blood ureic nitrogen, aspartatoaminotransferase, and total and direct bilirrubin were lower in controls (p<0.05). The frequency of complications in the cases was as follows: hyperparasitaemia 48%, liver dysfunction 44%, acute; respiratory distress syndrome 9%, kidney failure 6%, severe thrombocytopenia 5%, severe anemia 3%, cerebral malaria 3% and severe hipoglycemia 2%. The WHO criteria for severe malaria were compared with others and the implications are discussed.

Antecedentes: la combinación amodiaquina (AQ) con sulfadoxinapirimetamina (SP) es el tratamiento de primera elección para la malaria falciparum no complicada (MFNC) en el departamento de Antioquia desde 1985 y en Colombia desde 2000. Objetivo: medir la frecuencia de falla terapéutica de AQ-SP en pacientes con MFNC, residentes en Turbo (zona de Urabá) y en El Bagre (zona del Bajo Cauca), Antioquia. Metodología: este estudio hace parte de uno mayor, que tiene diseño experimental balanceado, con ocho grupos; muestra de tamaño 50 en cada municipio, diseñada con criterios estadísticos y epidemiológicos; tratamiento aplicado en orden de llegada de los pacientes y según los esquemas usuales; seguimiento por 21 días; evaluación no ciega del efecto con el protocolo 1998 de la Organización Mundial de la Salud OMS. Resultados: se evaluaron 90 pacientes con MFNC; la falla terapéutica fue 2.2%: un caso precoz y otro tardío. El tratamiento fue bien tolerado. La parasitemia asexual se eliminó totalmente en 90% en los tres días de tratamiento (otro 10% tenía 40-80 parásitos/µL, que no es falla) y en 100% antes de 7 días de haber iniciado el tratamiento. AQ-SP mostró total capacidad de eliminar la fiebre: 100% afebriles el día 3. En los pacientes con gametocitos la cantidad de estos creció entre los días 0 y 7 y decreció luego hasta el día 21, cuando 52% los presentaban (promedio: 63 gametocitos/µL), pero no se evaluaron la viabilidad ni la fertilidad de tales gametocitos. Conclusión: el tratamiento de la MFNC con AQ-SP es altamente eficaz y debe mantenerse como la primera opción terapéutica, reforzada su eficacia antimalárica por el bajo costo, la buena tolerancia y la escasez y levedad de los efectos adversos imputables al tratamiento.

Background: The combination of amodiaquine (AQ) and sulfadoxine-pyrimethamine (SP) is the firstchoice treatment for uncomplicated falciparum malaria (UCFM) in Antioquia (northwestern Colombia) since 1985 and in the country at large, since 2000. Objective: To measure the frequency of therapeutic failure of AQ-SP in patients with UCFM, residents of Turbo (Urabá zone) and El Bagre (Bajo Cauca zone) of Antioquia in northwestern Colombia. Methodology: This study is part of a larger one which has balanced design, with eight groups; the sample size in each municipality was 50 patients and it was obtained with statistical and epidemiological criteria; treatment was administered in the order of admission of patients according to the usual schedule; follow-up was done during 21 days; not-blind evaluation of the effect with the 1998 WHO protocol. Results: Ninety patients with UCFM were evaluated; therapeutic failure frequency was 2%; that is 2 cases, one early and one late. Conclusion: Treatment of UCFM with AQ-SP is highly effective and should be maintained as the first therapeutic choice; its effectiveness is reinforced by its low cost and good tolerance; also by the fact that undesirable effects attributable to the treatment are few and mild.

LA MALARIA CEREBRAL (MC) es la complicación más frecuente de la malaria por P. falciparum; aproximadamente el 90% de las personas que la han padecido se recuperan completamente sin secuelas neurológicas. Aún no se conoce con claridad su patogénesis pero se han postulado cuatro hipótesis o mecanismos posibles: 1) citoadherencia y secuestro de glóbulos rojos parasitados en la microvasculatura cerebral; 2) formación de rosetas y aglutinación de glóbulos rojos parasitados; 3) producción de citoquinas y activación de segundos mensajeros y, 4) apertura de la barrera hematoencefálica. Sin embargo, queda un interrogante sin resolver aún: ¿qué proceso se lleva a cabo para que el parásito, desde el espacio microvascular, pueda interferir transitoriamente con la función cerebral? Recientemente se ha utilizado el precursor de la proteína β-Amiloide como un marcador de daño neuronal en MC; este precursor será de gran ayuda en futuras investigaciones realizadas en nuestro medio que aporten información para comprender la patogénesis de la MC.

CEREBRAL MALARIA(CM) is the most common complication of P. falciparum malaria; nearly 90% of people who have suffered CM can recover without neurological problems. Currently there are four hypotheses that explain pathogenesis of CM: cytoadherence and sequestering of parasitized red blood cells to cerebral capillaries; rosette formation and parasitized red blood cells agglutination; production of cytokines and activation of second messengers and opening of the blood-brain barrier. However the main question remains to be answered; how the host-parasite interaction in the vascular space interferes transiently with cerebral function? Recently, the beta amyloid precursor peptide has been employed as marker of neural injury in CM. It is expected that the beta amyloid precursor peptide will help to understand the pathogenesis of CM in complicated patients of endemic areas of Colombia.