RESUMO As lentiviroses de pequenos ruminantes (LVPRs) são infecções que afetam caprinos e ovinos, causando doenças multissistêmicas crônicas, ocasionando grandes perdas econômicas. Os agentes causadores, lentivírus caprino (LVC) e o lentivírus ovino (LVO), apresentam tropismo por células da linhagem monocítico--fagocitária, as quais estão diretamente associadas à principal via de transmissão, por meio da ingestão de leite e colostro provindos de animais infectados. Desse modo, o controle por esta via é de suma importância. Atualmente, pesquisas vêm sendo desenvolvidas para o uso de aditivos químicos no leite, que possam conservar o colostro ou leite, e inativar agentes microbiológicos presentes. Dentre estes, o dodecil sulfato de sódio (SDS) vem apresentando resultados satisfatórios na inativação química do HIV e LVC em leite, e ainda como biocida em colostro caprino.

ABSTRACT Infections by small ruminant lentiviruses (SRLVs) affect goats and sheep causing chronic multisystemic diseases that generate great economic losses. The caprine lentivirus (CLV) and the ovine lentivirus (OLV) present tropism for cells of the monocyte/macrophage lineage, which are directly associated with the main route of transmission through the ingestion of milk and colostrum from infected animals. In this manner, controlling this route is of paramount importance. Currently, researches have investigated the use of chemical additives in milk that can preserve colostrum or milk and inactivate microbiological agents. Among the compounds, sodium dodecyl sulfate (SDS) has been shown to be satisfactory in the chemical inactivation of HIV and CLV in milk, and also as a biocide in goat colostrum.

RESUMO O objetivo foi demonstrar a transmissão iatrogênica de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) de caprinos para ovinos e a transmissão horizontal entre ovinos. O estudo foi conduzido em propriedade com criação não consorciada de caprinos e ovinos, monitorada para ocorrência de lentiviroses, a partir de acompanhamento clínico e testes de immunoblotting (IB), imunodifusão em gel de agarose (IDGA) e reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR). Resultados positivos no rebanho ovino não haviam sido observados até então. Por outro lado, sabia-se que o rebanho caprino leiteiro era positivo. Por este motivo, a propriedade realizava programa de controle da artrite-encefalite caprina (CAE). O estudo foi delineado em um lote de ovinos que apresentou animais positivos para LVPR na nPCR. Verificou-se que três animais neonatos deste lote foram rejeitados por suas mães e por isso receberam leite do rebanho caprino. Estes três animais permaneceram com outros 20 ovinos de mesma faixa etária, totalizando 23 animais. Após um ano, durante a realização do monitoramento, dos 23 animais do lote, 11 apresentaram resultados positivos na nPCR e três demonstraram soroconversão por IB. Dos animais que haviam recebido leite do rebanho caprino, dois tiveram resultados positivos na nPCR e no IB. Os 11 animais positivos na nPCR foram acompanhados, verificando-se que cinco animais não apresentaram mais resultados positivos na nPCR, nem soroconverteram; dois continuaram apresentando resultados positivos na nPCR, mas negativos no IB e IDGA e quatro apresentaram-se positivos na nPCR, no IB e no IDGA. Dessa forma, foi possível demonstrar a infecção interespecífica de forma iatrogênica e a ocorrência de transmissão horizontal do lentivírus caprino entre ovinos.

SUMMARY The objective of this study was to demonstrate iatrogenic transmission of small ruminant lentivirus (SRLV) from goats to sheep and horizontal transmission between sheep. The study was conducted on a farm with separate goat and sheep rearing, and animals were monitored for lentivirus occurrence by clinical examination and testing by immunoblotting (IB), agar gel immunodiffusion (AGID), and nested polymerase chain reaction (nPCR). Positive results had not been observed in the sheep flock until this study. Conversely, virus positive dairy goats were known. For this reason, the farm performed the caprine arthritis-encephalitis (CAE) control program. The study was designed with a sheep group that presented positive animals for SRLV by nPCR. It was verified that three newborn animals in this group were rejected by their mothers and consequently received milk from the goat herd. These three animals remained with another 20 sheep of the same age, totaling 23 animals. After one year, during monitoring, 11 of the 23 animals in the group presented positive results in the nPCR and three demonstrated seroconversion by IB. Of the animals that had received goat milk, two had positive results in the nPCR and IB. The 11 animals positive in the nPCR were followed and it was verified that five animals did not present further positive results in the nPCR, nor seroconversion; two continued presenting positive results in the nPCR but were negative in the IB and AGID and four were positive in the nPCR, IB, and AGID. Thus, it was possible to demonstrate iatrogenic interspecific infection and the occurrence of horizontal caprine lentivirus transmission among sheep.

RESUMO: O estudo foi conduzido para avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) entre ovinos, utilizando 15 cordeiros, distribuídos em dois grupos experimentais. O grupo exposto foi constituído por 10 cordeiros, mantidos com suas mães, que foram infectadas, experimentalmente, com CAEV. O grupo não exposto caracterizou-se como grupo controle e foi formado por cinco cordeiros, mantidos com suas matrizes, negativas para CAEV. Foram colhidas amostras de sangue mensalmente, do periodo que compreende o nascimento até um ano de vida. Para avaliar a transmissão, foram utilizadas as técnicas de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático (ELISA), immunoblotting (IB) e reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR). O grupo não exposto se manteve negativo aos testes durante todo o experimento. Já no grupo exposto, dois indivíduos apresentaram resultados positivos na nPCR. As amostras positivas na nPCR foram sequenciadas para serem comparadas com as cepas originais de caprinos, comprovando se tratar de lentivírus semelhante à cepa CAEV-Cork. A soroconversão não foi detectada e a manifestação clínica não foi observada. Sendo assim, após um ano de observação, verificou-se que a transmissão do CAEV entre ovinos é possível, entretanto, com discreta frequência. Este foi um estudo inicial, e outros experimentos são necessários para analisar a capacidade adaptativa do CAEV de permanecer em rebanho ovino infectado e, com isso, causar doença.

ABSTRACT: This study was conducted to evaluate caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) transmission among sheep using 15 lambs that were distributed in 2 experimental groups. The exposed group consisted of 10 lambs that remained with their mothers, who were experimentally infected with CAEV. The non-exposed group was characterized as the control group and was comprised of 5 lambs that remained with their CAEV-negative mothers. Blood samples were collected monthly from birth until 1 year of life. To evaluate the transmission, an agar gel immunodiffusion test (AGID), enzyme immunoassay (ELISA), immunoblotting (IB), and nested polymerase chain reaction (nPCR) techniques were used. The non-exposed group was negative in all of the tests throughout the whole experiment. In the exposed group, 2 individuals had positive nPCR results. Positive nPCR samples were sequenced for comparison with the original goat strains and were shown to be similar to the CAEV-Cork strain. Seroconversion was not detected, and clinical manifestations were not observed. Thus, after 1 year of observation, it was verified that CAEV transmission among sheep is possible; however, with discreet frequency. This was an initial study, and other experiments are needed to analyze the adaptive capacity of the CAEV to remain in an infected sheep flock and cause the disease.

RESUMO: Os lentivírus de pequenos ruminantes, o vírus da artrite encefalite caprina e o vírus Maedi-Visna causam enfermidades que ocasionam perdas produtivas significativas, principalmente em animais com aptidão leiteira. Esses vírus pertencem à família Retroviridae e ao gênero Lentivirus e formam um grupo genético heterogêneo, o que pode ocasionar implicações para o diagnóstico e o controle dos lentivírus de pequenos ruminantes. As perdas causadas pelos lentivírus de pequenos ruminantes estão relacionadas com falhas reprodutivas, vida produtiva curta e diminuição da produção leiteira dos animais infectados. Além disso, esses vírus podem promover a redução da qualidade do leite, afetando a produção de laticínios, tal como o queijo. Os lentivírus de pequenos ruminantes levam a perdas indiretas, reduzindo o valor dos rebanhos e forçando o desenvolvimento de barreiras comerciais epidemiológicas para germoplasma animal. O controle dos lentivírus de pequenos ruminantes é importante para promover uma maior produção de leite e reduzir os custos com medicamentos e assistência técnica. Esse controle pode variar de acordo com a população caprina e ovina de cada país em termos de soroprevalência, variedade de raças e particularidades do manejo adotado.

ABSTRACT: Small ruminant lentiviruses, caprine arthritis encephalitis virus, and Maedi-Visna virus cause diseases that result in significant productive losses, mostly in dairy animals. These viruses belong to the Retroviridae family, Lentivirus genus, and constitute a heterogeneous group, which may generate implications for the diagnosis and control of small ruminant lentiviruses. Losses caused by them are associated with reproductive failure, short productive life, and decreased milk production by the infected animals. In addition, these viruses may reduce milk quality, affecting the production of dairy products such as cheese. Small ruminant lentiviruses lead to indirect losses, decreasing herd value and forcing the development of epidemiological trade barriers for animal germplasm. Control of small ruminant lentiviruses is important to promote optimal milk production and to reduce costs with medicine and technical assistance. This control may vary in caprine and ovine populations of each country, according to seroprevalence, variety of breeds, and peculiarities of the practiced management.

RESUMO: A artrite encefalite caprina causa perdas consideráveis para a produção caprina. A principal forma de transmissão do vírus da artrite encefalite caprina é a ingestão de colostro ou leite de fêmeas infectadas. No entanto, algumas transmissões não podem ser explicadas por esta via. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina por via transplacentária (vertical). Foram realizadas coletas de sangue em 283 crias recém-nascidas das raças Anglo-Nubiana e Saanen, provenientes de progenitores soropositivos e soronegativos. As amostras foram coletadas logo após o nascimento e analisadas pelas técnicas de imunodifusão em gel de agarose e western blot. No teste de imunodifusão em gel de agarose, nenhum cabrito foi detectado reagente. Porém, no teste de western blot, quatro cabritos nasceram soropositivos. Esse resultado indica que, apesar de baixa frequência (1,4%), existe a possibilidade de transmissão via transplacentária do lentivírus de pequenos ruminantes.

ABSTRACT: Caprine arthritis encephalitis causes considerable losses in goat production. The main form of the caprine arthritis encephalitis virus transmission is through the ingestion of colostrum or milk from infected females. However, some transmissions cannot be explained in this manner. Therefore, this study aimed to evaluate transplacental transmission of caprine arthritis encephalitis virus. Blood samples were collected from 283 newborn kids of Anglo-Nubian and Saanen breeds born from seropositive and seronegative goats. Samples were collected immediately after birth and analyzed with agarose gel immunodiffusion and western blot. All samples were negative in the agarose gel immunodiffusion. However, the western blot test demonstrated that four kids were born positive for caprine arthritis encephalitis virus. This result indicates that although in a low frequency (1.4%), there is a possibility of transplacental transmission of small ruminant lentivirus.

This study was conducted in order to evaluate the transmission of caprine lentivirus to sheep using different experimental groups. The first one (colostrum group) was formed by nine lambs receiving colostrum from goats positive for small ruminant lentiviruses (SRLV). The second group (milk group) was established by nine lambs that received milk of these goats. Third was a control group, consisting of lambs that suckled colostrum and milk of negative mothers. Another experimental group (contact group) was formed by eight adult sheep, confined with two naturally infected goats. The groups were monitored by immunoblotting (IB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), agar gel immunodiffusion (AGID) and nested polymerase chain reaction (nPCR). All lambs that suckled colostrum and milk of infected goats and six sheep of the contact group had positive results in the nPCR, although seroconversion was detected only in three of the exposed animals, with no clinical lentiviruses manifestation, in 720 days of observation. There was a close relationship between viral sequences obtained from infected animals and the prototype CAEV-Cork. Thus, it was concluded that SRLV can be transmitted from goats to sheep, however, the degree of adaptation of the virus strain to the host species probably interferes with the infection persistence and seroconversion rate.

A Artrite Encefalite Caprina (CAE) é uma enfermidade infectocontagiosa causada por um vírus pertencente ao gênero lentivírus, denominado de vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). O CAEV é encontrado em vários tecidos, como o nervoso, o pulmonar, o da glândula mamária e do trato genital masculino e feminino. Desta forma, objetivou-se com este trabalho identificar a presença do CAEV, pelas técnicas de diagnóstico moleculares, em ovócitos e fluido uterino, visando avaliar a possibilidade de transmissão do CAEV pela reprodução. Foram selecionadas 13 cabras comprovadamente infectadas, as quais foram submetidas à eutanásia para coleta do aparelho reprodutor, aspiração do fluido uterino e dissecção dos ovários para coleta de ovócitos. Para identificação do CAEV nas amostras coletadas, na forma de provírus e na forma livre, foram realizadas as técnicas de PCRn e RT-PCRn, respectivamente. Observaram-se que 53,8% dos ovócitos foram positivos à técnica de RT-PCRn, enquanto apenas 9,1% foram positivos à PCRn. A técnica de RT-PCRn também identificou o vírus no fluido uterino de 46,1% das fêmeas testadas. Embora as 13 cabras em experimento fossem portadoras do CAEV, 30,8% apresentaram resultados negativos na PCRn e RT-PCRn em todas as amostras analisadas (ovócito e fluido uterino). Conclui-se que a PCRn e a RT-PCRn podem ser utilizadas no diagnóstico da CAE tendo os ovócitos e o fluido uterino como materiais de análise, e que a presença do CAEV nestes materiais aponta para o risco da transmissão do CAEV através das tecnologias reprodutivas aplicadas às fêmeas.

Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is an infectious disease caused by the caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV), belonging to the lentivirus genus. The presence of the virus has been observed in the nervous system, respiratory tract and mammary gland, and also in the male and female genital tract. The objective of this study is to identify the virus in oocyte and uterine fluid of infected goats by molecular diagnostic techniques, in order to assess the possibility of CAEV transmission with reproduction. Thirteen infected goats were selected and submitted to euthanasia for the collection of the reproductive system, aspiration of the uterine fluid and dissection of ovaries for oocyte collection. In order to identify the CAEV in the collected material, in the protovirus and free forms, it was submitted to the nRT-PCR and nPCR techniques, respectively. As a result, it was observed that 53.8% of oocytes were positive to nRT-PCR, while only 9.1% were positive to nPCR. The nRT-PCR also identified the virus in the uterine fluid of 46.1% of the tested females. Even though the 13 goats had CAEV, 30.8% presented negative results in nPCR and nRT-PCR in all of the analyzed samples (oocyte and uterine fluid). This work concludes that nRT-PCR and nPCR can be used in the diagnosis of CAE for the analysis with oocytes and uterine fluid, and that the presence of CAEV in these materials points out to the risk of CAEV transmission through reproductive technologies used in females.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença do DNA pró-viral do lentivírus caprino (LVC) em ejaculados de machos infectados naturalmente, e verificar a influência da lavagem do sêmen e da presença de inflamação testicular sobre a carga viral. Foram realizadas oito coletas de sêmen de sete reprodutores soropositivos para o LVC: quatro antes dos animais sofrerem dano testicular e quatro depois. Entre as coletas realizadas na mesma semana, em uma, o ejaculado era lavado, para retirada do plasma seminal, e na outra, não. O DNA pró-viral do LVC foi identificado pela reação em cadeia da polimerase Nested (PCR Nested), e pelo isolamento viral. O vírus foi isolado em 7,1% das amostras. A PCR identificou o DNA pró-viral em 35,7% do total das amostras: 17,9% nas amostras lavadas e 53,6% das amostras de sêmen integrais. O dano ao testículo permite maior fluxo do vírus para o sêmen, pois antes do dano, 21,4% das amostras foram positivas e pós-dano, 50%. A transmissão do LVC pelo sêmen de reprodutores caprinos é potencializada pela presença de inflamações testiculares e pelo fato de o sêmen criopreservado conter o LVC na forma infectante.

The objective of this work was to evaluate the presence of the DNA provirus of the caprine lentivirus (LVC) in ejaculates of naturally infected males, and to verify the influence of the wash of the semen as well as the presence of testicle inflammation on the viral load. Eight semen collections of seven soropositive reproducers were accomplished, four before testicle injury and four after injury. Amongst the collections carried out at the same week, in one the ejaculate was washed, to withdraw the plasma seminal, and in the other it was not. The provirus DNA was identified both by Nested polymerase chain reaction technique (Nested PCR) and by the viral isolation. The virus was isolated in 7.1% of the samples. The PCR identified the provirus DNA in 35.7% of all samples, 17.9% in the washed samples and 53.6% of the integral semen samples. The injury of the testicle tends to greater flow of virus for the semen, therefore, before injury, 21.4% of the samples were positive and after-injury, 50%. Risk of transmission of the LVC by semen of goat reproducers is strengthened by the presence of testicle inflammations and the fact that the criopreserved semen contains the LVC in infecting form.

O objetivo deste trabalho foi avaliar as taxas de manifestação de sintomas de estro, de resposta superovulatória e de recuperação de embriões em 20 cabras da raça Moxotó em três tratamentos consecutivos, em intervalos de 56 dias. O ciclo estral das fêmeas foi sincronizado com esponjas vaginais contendo 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MGA) durante 11 dias e com 100 mig de cloprostenol (PGF2alfa ) administrado no nono dia. Neste dia, iniciou-se o tratamento superovulatório com 250 UI de FSH-p por cabra, fracionadas em oito doses decrescentes, com intervalo de 12 horas. A repetição do tratamento superovulatório com FSH-p diminuiu a taxa de manifestação de sintomas de estro, porém não afetou a taxa de ovulação e reduziu a taxa de regressão prematura de corpos lúteos. A taxa de recuperação de embriões foi influenciada pela ocorrência de regressão prematura de corpos lúteos e pela ação das repetidas colheitas de embriões sobre o genital. Não foi possível avaliar o efeito das repetidas superovulações sobre a taxa de recuperação de embriões.

The aim of the work was to evaluate the rates of estrous, superovulatory response and embryos recovery in Moxotó goats after three treatments with porcine FSH. Twenty goats were synchronised with medroxyprogesterone acetate sponges (60 mg for 11days) and cloprostenol (l00 mug on ninth day). The animals were superovulated with 250 IU of FSH-p in 8 decreasing doses at intervals of 12 hours. The repetition of superovulatory treatment decreased estrous symptoms, but didn’t affect the ovulation rate and decreased the regressed corpus luteum rate. The embryos recovery was affected by regressed corpus luteum and embryo collection technique.

O objetivo deste experimento foi comparar a eficiência e o efeito de consecutivas colheitas de embriões, por três diferentes métodos (transcervical-T1, laparoscopia-T2 e laparotomia-T3), sobre a atividade reprodutiva de doadoras da espécie caprina. Utilizaram-se 10 cabras em cada método (T1, T2 e T3), sendo as colheitas de embriões repetidas três vezes consecutivas, nas mesmas fêmeas, com intervalo de 56 dias. As fêmeas foram sincronizadas com esponjas vaginais impregnadas com 60 mg de acetato de medroxiprogesterona durante 10 dias e 100 µg de cloprostenol aplicados pela via IM no oitavo dia da sincronização. No 8º dia, iniciou-se a superovulação com 250 UI de FSH de origem suína, divididas em oito doses decrescentes, aplicadas em intervalo de 12 horas. As fêmeas foram acasaladas e as colheitas de embriões realizadas no 5º ou 6º dia após a última cobertura. Após 56 dias da terceira colheita de embriões, foram realizados o abate e a necrópsia das doadoras. O tempo necessário para a colheita de embriões em cada método foi de 21 minutos e 32 segundos; 37 minutos e 14 segundos e 56 minutos e 22 segundos, respectivamente, para T1, T2 e T3 (p<0,01). A maior taxa de recuperação da solução de lavagem foi no T3 (83,7%), seguido por T2 (72,2%) e T1 (64,3%) (p<0,05). As taxas médias de recuperação dos embriões foram 57,1; 81,1 e 27,3% para T1, T2 e T3, respectivamente, com variação entre 0-100%. A taxa de recuperação de embriões sofreu influência de vários fatores, como a presença de corpos lúteos regredidos, a taxa de ovulação e a presença de aderências no sistema genital, mas, isoladamente, a taxa de recuperação de embriões foi satisfatória nos três métodos. O T1 causou eversão do endométrio e aderência entre o corno uterino e o epíploo em uma única fêmea, o T2 causou eversão do endométrio em 30%, 40% e 60% e aderências do sistema genital em 10%, 10% e 70% das fêmeas à 1ª, 2ª e 3ª colheitas, respectivamente. O T3 causou aderências no sistema genital em 80% das doadoras após a primeira e 100% após a segunda colheita. O T1 e o T2 permitem o uso de doadoras em repetidas colheitas de embriões, o que não ocorre com o T3, que causa aderências no sistema genital e órgãos circunvizinhos em 100% dos casos.

The purpose of this trial was to compare the efficiency and effect of consecutive embryo recoveries by three different methods (T1 - transcervical; T2 laparoscopy and T3 laparotomy) on the reproductive activity of goat donors. Ten goats were allocated into each treatment (T1, T2 and T3) and submitted to three consecutive embryo recoveries. These were performed 56 days apart. The superovulation begun on 8th day of oestrus synchronization and all goats received 250 UI of porcine FSH splited into eight decreasing dosages at 12 hours intervals. The embryo recovery took place on the 5th or 6th day from the last mating. Fifty-six days after the third recovery of embryos, the animals were sacrified and the genital tract was evaluated. The time spent to recovery the embryos was 21min 32sec; 37min 14sec and 56min 22sec, respectively to T1; T2 and T3 (p<0.01). T3 showed the highest recovery rate of washing solution (83.7%), followed by T2 (72.2%) and T1 (64.3%) (p<0.05). Embryo recovery rate had as mean values, 57.1; 81.1 and 27.3%, respectivily to T1, T2 and T3. The variation ranged between 0 and 100%. Several factors affected the embryo recovery rate, such as the presence of demised corpora lutea, the ovulation rate and the presence of adhesions in the genital tract. Nonetheless, embryo recevery rate was acceptable in all treatments. The T1 caused eversion of endometrium and adherence between the uterine horn and epiploon in one animal, the T2 caused 30, 40 and 60% of endometrium eversion and 10, 10 and 70% adherence on genital tract, respectively, for the first, second and third embryo recovery. The T3 caused 80% of adherence on genital tract after the first embryo recovery and 100% after the second. It is possible to use the methods T1 and T2 to recovery embryos in goats.