Resumen El aislamiento y selección de linfocitos T puros de cultivo primario de bazo de ratón puede obtenerse de manera rápida y fácil utilizando kits comerciales con microesferas magnéticas para capturar y purificar las células. A pesar de estas ventajas, la carga financiera que puede representar para el presupuesto de un laboratorio, la adquisición constante de estos kits justifica la evaluación de otras opciones de menor costo. Por ello, se comparó el porcentaje de recuperación celular, viabilidad y pureza de tres métodos de aislamiento y purificación de linfocitos T; dos de bajo costo y fácil implementación (aislamiento con amortiguador de amonio-cloruro-potasio (ACK)-adhesión celular y aislamiento con Ficoll), y un kit comercial de selección negativa con microesferas magnéticas. Con el método de amortiguador ACK-adhesión celular se obtuvo un porcentaje de recuperación y purificación de linfocitos T viables comparable al obtenido con el kit. Aunque este método requiere más tiempo, dado que las células deben ser incubadas durante toda la noche, es de fácil implementación y tiene una eficiencia comparable al kit, así como un menor costo. Este método puede ser tomado en cuenta para utilizar en experimentos que puedan trabajar con linfocitos activados.

Abstract The isolation and selection of pure T lymphocytes from spleen primary culture can be obtained easily and quickly using commercial kits that use magnetics microbeads to capture and purify the cells. Despite these advantages, the financial burden that the constant acquisition of these kits can impose to a laboratory budget makes it important to evaluate other options. We compared the cell recovery, viability and purity percentage of three isolation and purification methods; two of them of low cost and easy implementation (cell adhesion of cultures treated with Ammonium-Chloride-Potassium (ACK) buffer, and Ficoll), and a commercial with kit of negative selection with magnetics microbeads. With the ACK-cell adhesion method, we found a recovery and purity percentage of lymphocytes T comparable to the one obtained with the kit. Although this method requires more time, as cells must be incubated overnight, it is easily implemented and has a comparable efficiency to the kit, as well as a lower cost. This method can be taken into account for experiments that can use activated cells.

The in vitro activity of four 2-nitropropene derivatives, 1-(3-benzothienyl)-2-nitropropene (N1), 1-(3-thienyl)-2-nitropropene (N2), 1-(5-bromo-2-thienyl)-2-nitropropene (N3) and 1-(4-bromo-2-thienyl)-2-nitropropene (N4), were tested against cultures of the parasite Trypanosoma cruzi. Cytotoxicity studies were performed using Vero cells. The blood trypomastigotes, amastigotes and epimastigotes showed differential degrees of sensitivity towards the four tested compounds; the highest activity against the epimastigotes and blood tripomastigotes was exhibited by N1, followed by N3, N4 and finally N2. In contrast, whereas the compounds N1, N3 and N4 exerted similar magnitudes of activity against amastigotes, N2 was found to be a much less potent compound. According to our results, the compound N1 had the highest level of activity (IC50: 0.6 μM) against epimastigotes.

Se evaluaron los efectos tóxicos de los venenos de cinco serpientes costarricenses en cuanto a su capacidad tripanocida contra dos cepas de Trypanosoma cruzi y sus efectos en cuanto a los mecanismos de muerte celular. Los venenos de Bothrops asper, Bothriechis schlegelii, Crotalus durissus durissus, Atropoides nummifer y A. picadoi, mostraron actividad tripanocida contra las formas de epimastigoto, amastigoto y tripomastigoto. Los venenos de B. asper y de A. nummifer presentaron la más alta citotoxicidad para las células Vero. Los de B. asper y B. schlegelii presentaron la más alta actividad en los epimastigotos de la cepa CL, mientras que los venenos de B. asper y el de A. nummifer fueron más eficientes contra los epimastigotos de la cepa Jennifer. El veneno de B. schlegelii produce un efecto proliferativo en las células Vero; mientras que el de C. d. durissus produce el mismo efecto en los epimastigotos de la cepa CL, ambos a la concentración de 2,5 μg/mL. Los valores de CI50 mostraron que se requieren menores cantidades contra los amastigotos en relación con los epimastigotos. Los venenos de B. asper y B. schlegelii presentan la más alta actividad contra los amastigotos de ambas cepas. Con los tripomastigotos sanguíneos de la cepa GA, los cinco venenos ocasionaron una disminución de la motilidad en los diferentes tiempos de exposición, pero el veneno de A. nummifer, en las concentraciones más bajas, mostró una actividad más marcada en comparación con los otros veneno. En cuanto a los efectos de los venenos, mediados por los grados de apoptosis, necrosis o proliferación celular, se observó que estos fenómenos se presentan y tienen relación con el tipo de veneno, su concentración y el tiempo de exposición.

The trypanocide effect of venoms from five Costa Rican species of snakes was evaluated against two strains of Trypanosoma cruzi and their cellular toxic effects were likewise observed. The venoms of Bothrops asper, Bothriechis schlegelii, Crotalus durissus durissus, Atropoide nummifer and A. picadoi showed evident trypanocide action against epimastigotes, amastigotes and trypomastigotes. The venoms of B. asper and B. schlegelii were shown to be the most active against the epimastigotes of the CL strain, whereas those of B. asper and A. nummifer were more effective against the epimastigotes of the Jennifer strain. The venoms of B. schlegelii and C.d. durissus, at the lowest concentrations of 2.5 μg/mL, were able to trigger a proliferative effect on Vero cells and epimastigotes of the CL strain, respectively. The IC50 values showed that lower amounts of venoms are necessary in order to inhibit amastigotes as compared to epimastigotes. The venoms of B. asper and B. schlegelii exhibited the highest activity against amastigotes of both T. cruzi strains. All venoms were able to arrest motility of blood trypomastigotes of the GA strain at different times and the most active in this case was A. nummifer venom. The toxic effects of the venoms measured by the degree of apoptosis, necrosis and cell proliferation that they produced showed that all these events occur and are related to the type of venom, its concentration and exposure time.