This study aimed at implementing a Nested-polymerase chain reaction (Nested-PCR) for the molecular diagnosis of human T-cell lymphotropic virus type I/II (HTLV-I and HTLV-II) infections in peripheral blood mononuclear cells of infected subjects in Argentina. The sensitivity and specificity of the assay for the detection of regional strains were assessed by comparing them with the molecular assay of reference PCR-hybridization. The Nested-PCR detected 1 MT-2 cell (³ 8 proviral copies)/1x106 non-infected cells showing high sensitivity for provirus detection. While both molecular assays showed high specificity (100%) for HTLV-I and HTLV-II detection, the sensitivity values differed: 100% for Nested-PCR and 67% for PCR-hybridization assay. Moreover, this technique showed less sensitivity for the detection of DNA sequences of HTLV-II (33%) than for the detection of DNA sequences of HTLV-I (75%). The high sensitivity and specificity of the Nested-PCR for regional strains and its low costs indicate that this assay could replace the PCR-hybridization assay for the molecular diagnosis of HTLV-I/II infections. It will be interesting to assess the usefulness of this assay as a tool for the molecular diagnosis of HTLV-I/II infections in other developing countries. Other studies that include a greater number of samples should be conducted.

Amostras de soro sangüíneo (n: 110) de indivíduos de comportamento de risco e doadores de sangue da cidade de Córdoba, na Argentina, com perfis de reactividade para HIV-1 e HTLV-I/II indeterminada por Western blot (Wb), foram estudadas para anticorpos específicos contra HTLV-I/II e HIV-1 por meio do Ensaio de Imunofluorescência Indireta (IFI). Este estudo foi realizado para caracterizar as reações putativas com proteínas HIV-1 e HTLV-I/II e resolver o estado da infecção por retrovírus destes indivíduos. Os resultados mostram que os soros dos doadores sangüíneos que apresentam padrões indeterminados para HTLV-I/II e HIV-1 no Wb não são reagentes contra HTLV-I/II e HIV-1 por IFI. Mas, um alto índice de amostras de individuos com alto risco com resultado indeterminado no Wb para HIV-1 e HTLV-I/II apresentaram resultados positivos para HTLV-I/II e HIV-1 por IFI, respectivamente. Nosso estudo sugere que a reatividade indeterminada para HTLV-HIV na população de baixo risco deve-se a uma reação cruzada contra antígenos não virais; e que na população de alto risco as amostras indeterminadas apresentam reação cruzada entre as proteínas HIV-1 e HTLV-I/II no Wb. Estes resultados indicam que se faz preciso pesquisar a reatividade de HTLV-I/II nas amostras indeterminadas de HIV-1 e vice-versa, para confirmar o diagnóstico. Por último, este trabalho mostra a utilidade potencial da IFI para determinar o estado de infecção HIV-1 e HTLV-I/II dos indivíduos com perfis indeterminados por Wb, permitindo assim, a resolução do estado real de infecção por retrovírus.

Serum samples (n: 110) from blood donors and high risk individuals from Cordoba, Argentina with indeterminate HIV-1 and HTLV-I/II Wb profiles were studied for specific antibodies to HTLV-I/II and HIV-1 by indirect immunofluorescence assay (IFA) and for the presence or absence of HIV-1 and HTLV-I/II specific bands by Wb. This study was carried out in order to characterize their putative reactions with HIV-1 and HTLV-I/II proteins and to resolve the retrovirus infection status of these individuals. Results indicated that blood donors sera displaying indeterminate HIV-1 or HTLV-I/II Wb patterns were not immunoreactive to HTLV-I/II and HIV-1 on IFA. However, a high rate of indeterminate HIV-1 and HTLV-I/II Wb samples from high risk individuals had positive HTLV-I/II and HIV-1 IFA results respectively. Our study supports the growing evidence that HTLV-HIV indeterminate seroreactivity in low risk population is due to a cross reaction against nonviral antigens, and in high risk populations the indeterminate samples show serological cross-recognition between HIV-1 proteins and HTLV-I/II proteins on Wb. These results point out the necessity to investigate the HTLV-I/II reactivity in indeterminate HIV-1 samples and viceversa in order to confirm the diagnosis. Finally, this study shows the potential usefulness of IFA in elucidating the status of HIV-1 and HTLV-I/II infection of individuals with indeterminate Wb profiles, thus enabling resolution of retrovirus infection status.

Avaliou-se a eficiência da técnica de Imunofluorescência Indireta (IFI) como método confirmatório no diagnóstico da infecção por HIV-1 e HTLV-I/II. Para isto, processaram-se amostras com sorologia positiva ou negativa por Western blot (Wb) para ambos vírus, pertencentes a populações em diferentes graus de risco de adquirir a infecção e determinaram-se os valores de sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo e o índice de concordância Kappa da IFI para cada sistema viral em comparação com o Wb. Como fontes de antígenos da IFI empregaram-se as linhas celulares H9 (HTLV-III b), MT-2 e MT-4 (persistentemente infectadas com HTLV-I), MO-T (persistentemente infectadas com HTLV-II). Os valores globais de sensibilidade e especificidade para o sistema HIV-1, foram 96,80% e 98,60% respectivamente, enquanto os valores preditivos positivo e negativo 99,50% e 92,00% respectivamente. Não foram achadas diferenças na eficiência da técnica para a detecção de anticorpos anti HIV-1 entre as diversas populações estudadas. A respeito do sistema MT-2-HTLV-I os valores achados de sensibilidade e especificidade da IFI foram de 97,91% e 100% respectivamente sendo os valores preditivos positivo e negativo de 100% e 97,92% respectivamente. Do mesmo jeito para o sistema HTLV se demonstrou que a IFI implementada foi mais sensível quando se defrontaram as amostras com os dois antígenos virais (HTLV-I e HTLV-II) simultaneamente. A concordância global entre a IFI versus Wb para o sistema HIV-1 e HTLV foi ótima (índices de Kappa 0,93 e 0,98 respectivamente). Estes resultados indicam que a IFI é uma técnica altamente sensível e específica resultando adequada para o diagnóstico confirmatório da infecção pelos retrovirus humanos HIV-1 e HTLV-I/II em populações em diferentes graus de risco, podendo substituir ao Wb no algoritmo proposto para o diagnóstico sorológico da infecção por estes agentes.

We compared the indirect immunofluorescence assay (IFA) with Western blot (Wb) as a confirmatory method to detect antibodies anti retrovirus (HIV-1 and HTLV-I/II). Positive and negative HIV-1 and HTLV-I/II serum samples from different risk populations were studied. Sensitivity, specificity, positive, negative predictive and kappa index values were assayed, to assess the IFA efficiency versus Wb. The following cell lines were used as a source of viral antigens: H9 ( HTLV-III b); MT-2 and MT-4 (persistently infected with HTLV-I) and MO-T (persistently infected with HTLV-II). Sensitivity and specificity rates for HIV-1 were 96.80% and 98.60% respectively, while predictive positive and negative values were 99.50% and 92.00% respectively. No differences were found in HIV IFA performance between the various populations studied. As for IFA HTLV system, the sensitivity and specificity values were 97.91% and 100% respectively with positive and negative predictive values of 100% and 97.92%. Moreover, the sensitivity of the IFA for HTLV-I/II proved to be higher when the samples were tested simultaneously against both antigens (HTLV-I-MT-2 and HTLV-II-MO-T). The overall IFA efficiency for HIV-1 and HTLV-I/II-MT-2 antibody detection probed to be very satisfactory with an excellent correlation with Wb (Kappa indexes 0.93 and 0.98 respectively). These results confirmed that the IFA is a sensitive and specific alternative method for the confirmatory diagnosis of HIV-1 and HTLV-I/II infection in populations at different levels of risk to acquire the infection and suggest that IFA could be included in the serologic diagnostic algorithm.