OBJETIVOS: Novos anticorpos monoclonais de coelho (RabMab) para a avaliação imuno-histoquímica de receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) e HER2 foram lançados comercialmente. Comparamos os RabMab anti-RE, anti-RP e anti-HER2 com os anticorpos monoclonais de camundongo (Mab) utilizando tissue microarrays (TMA) de carcinomas de mama. MÉTODOS: Foram construídos dois TMAs de carcinomas de mama. As secções foram marcadas usando anti-RE, anti-RP e anti-HER2, Mab e RabMab através de imuno-histoquímica. As secções marcadas para RE e RP foram avaliadas considerando positivos aqueles tumores nos quais mais de 1% dos núcleos coraram moderadamente ou forte. Para HER2, as secções foram avaliadas utilizando as recomendações da ASCO/CAP para HER2. Hibridização in situ cromogênica (CISH) foi usada como padrão-ouro para avaliação de HER2. CISH foi avaliado utilizando as recomendações da Zymed. RESULTADOS: Os RabMab anti-RE apresentam intensidade de coloração semelhante ao 6F11 (Mab), porém maior que o 1D5 (Mab) proveniente de três diferentes fabricantes. Os RabMab anti-RP apresentaram sinal imunoistoquímico mais forte e delimitado comparado aos Mab. A detecção da superexpressão da proteína HER2 foi mais prevalente entre os anticorpos policlonais e RabMab, que se mostraram mais sensíveis quando comparados com o CISH. CONCLUSÃO: Os novos RabMab anti-RE e RP proporcionaram maior intensidade de coloração que os Mab. O RabMab anti-HER2 apresentou maior sensibilidade que os Mab, porém os Mab apresentaram maior especificidade quando comparados com o CISH para a avaliação de HER2 em carcinomas de mama.

BACKGROUND: Novel rabbit monoclonal antibodies (RabMab) for estrogen (ER), progesterone (PR) receptors and HER2 evaluation by immunohistochemistry have recently been commercially released. We compared the RabMab anti-ER, anti-PR and anti-HER2 to mouse monoclonal antibodies (Mab) using tissue microarrays (TMA) of breast carcinomas. METHODS: Two TMA containing breast carcinomas were built. Sections were immunostained using anti-ER and anti-PR, Mab and RabMab. The sections stained for ER and PR were evaluated considering positive those tumors in which more than 1% of the tumor cell nuclei stained moderate or strong. For HER2, the immunostained sections were evaluated using the ASCO/CAP guidelines for HER2. Chromogenic in situ hybridization (CISH) was used as the gold standard for HER2 evaluation. CISH was evaluated using the Zymed HER2 CISH interpretation guidelines. RESULTS: RabMab against ER have similar staining patterns compared to the 6F11 (Mab), but stronger than 1D5 (Mab) from three different suppliers. The RabMab against PR provide stronger and sharper immunohistochemical signals compared to Mab. The detection of HER2 protein overexpression was more prevalent with the polyclonal antibodies and RabMab than with the Mab. These were more specific than the RabMab, which were more sensitive when compared to CISH. CONCLUSION: The novel RabMab against ER and PR showed higher intensity of staining than the Mab. The RabMab against HER2 is more sensitive than Mab, however, Mab presented more specificity than RabMab when compared to CISH for HER2 evaluation of breast carcinomas.

INTRODUÇÃO: Uma nova geração de anticorpos monoclonais de coelho tem sido produzida para detecção de receptores de estrógeno (RE) e progesterona (RP) pela imuno-histoquímica em câncer de mama. OBJETIVO: Comparamos os novos anticorpos monoclonais de coelho anti-RE SP1 (LabVision®) e B644 (Cell Marque®) com anticorpos monoclonais de camundongo 1D5 (DAKO®) e 6F11 (Novocastra®) utilizando um tissue microarray de carcinomas mamários. METODOLOGIA: Dois cilindros (2 mm de diâmetro) de tecido fixado em formol e embebido em parafina foram retirados de 24 carcinomas mamários invasivos e corados pela imuno-histoquímica utilizando-se os anticorpos de coelho e de camundongo anti-RE e o sistema de detecção estreptavidina-biotina peroxidase (Biogenex®). A coloração imuno-histoquímica foi avaliada considerando positivos os tumores nos quais mais de 10% dos núcleos das células tumorais estivessem corados. A coloração também foi classificada em fraca (1), moderada (2) e forte (3). RESULTADOS: Ambos os anticorpos monoclonais de coelho contra RE apresentaram intensidade de coloração semelhante àquela pelo anticorpo de camundongo 6F11, porém os anticorpos de coelho apresentaram intensidades de coloração significativamente mais fortes que as do clone de camundongo 1D5. As altas diluições possíveis utilizando anticorpos de coelho permitem melhor custo/benefício quando comparadas com as diluições possíveis utilizando anticorpos de camundongo. CONCLUSÃO: Os novos anticorpos monoclonais de coelho anti-RE são altamente sensíveis e fidedignos para testes imuno-histoquímicos tanto para a clínica quanto para pesquisa de tumores mamários.

BACKGROUND: A novel generation of rabbit monoclonal antibodies has been released recently for estrogen (ER) and progesterone (PR) receptor evaluation in breast cancer by immunohistochemistry. Aims: We compared novel rabbit monoclonal antibodies anti-ER SP1 (LabVision®) and B644 (Cell Marque®) to mouse monoclonal antibodies 1D5 (Dako®) and 6F11 (Novocastra®) using a tissue microarray of breast carcinomas. METHODS: Two cylinders (2 mm diameter) of formalin-fixed paraffin embedded tissue were obtained from 24 invasive breast carcinomas and immunostained by using the anti-ER rabbit and mouse antibodies and the streptavidin-biotin detection system (Biogenex®). Immunostaining was evaluated considering positive those tumors in which more than 10% of the tumor cell nuclei stained. The stain intensity was also evaluated as weak (1), moderate (2), and strong (3). Results: Both rabbit antibodies against ER have similar staining pattern to each other and also to 6F11, but significantly stronger scores compared to mouse 1D5. The rabbit antibodies allow better cost/benefit because of higher working dilutions compared to mouse antibodies using the same procedure. CONCLUSION: The new rabbit antibodies against ER are highly sensitive and reliable in clinical and research immunohistochemical testing of breast carcinomas.

INTRODUÇÃO: Tissue microarrays (TMA) são blocos contendo numerosos cilindros de tecido parafinado organizados em linhas e colunas que permitem analisar muitas amostras numa única lâmina. Equipamentos disponíveis comercialmente são importados e têm alto custo (entre 11 e 24 mil dólares). OBJETIVOS: Descrever uma forma alternativa de construção de arrays de tumores mamários de baixo custo e relatar nossa experiência na sua utilização em estudo imuno-histoquímico (IIQ). METODOLOGIA: Utilizou-se modelo que consiste numa minirretífica com agulha de biópsia hepática de 2mm de diâmetro acoplada à bancada com suporte (Dremel). Inicialmente preparou-se o bloco receptor fazendo o número de furos desejável (55). Cilindros de tecido foram obtidos com o mesmo dispositivo e colocados nos orifícios do bloco receptor. De cada bloco doador, obteve-se dois cilindros de diferentes áreas representativas do tumor. Em cada array foram incluídos cilindros de tumor (controle positivo e negativo) para cada anticorpo testado na IIQ, e cilindro marcador de iniciação da leitura da lâmina (fígado). Cortes seqüenciais de 4µm obtidos do array foram submetidos à IIQ. A primeira e a última lâmina foram coradas pela hematoxilina e eosina (HE) para avaliar: número de discos de tecido, preservação tecidual e adequabilidade da amostra. Foi realizada IIQ empregando anticorpos anti-receptores de estrógeno, progesterona, Ki67, p53 e Her2. RESULTADOS: O custo total do equipamento foi apenas US$180,00. Cortes histológicos do array apresentaram boa preservação tecidual, sendo adequados para avaliação morfológica e suficientes para confirmação diagnóstica. A qualidade das reações IIQ foi semelhante à obtida nos blocos doadores. CONCLUSÃO: Esse equipamento e a técnica representam uma alternativa econômica aos equipamentos comerciais.

BACKGROUND: Tissue microarrays (TMA) are blocks containing numerous cylinders of paraffinized tissue organized in lines and columns allowing analysis of numerous samples in one slide. Commercially available equipment is imported and have high cost (US$ 11,000.00 to 24,000.00). AIM: we describe a low cost breast-tumor TMA and our experience in its use for immunohistochemistry (IHC). MATERIAL AND METHODS: A model that consists of a work station (Dremel) to which a liver biopsy needle of 2mm of diameter was connected. A receptor block was prepared perforating it until the desired number of rows (55) was reached. Then, the cylinders of tissue were obtained using the same equipment and included in the holes of the receptor block. Two samples were obtained from different tumor areas of each donor block. Cylinders of previously tested positive control tumors for each antibody and one marker (liver sample) that indicated the beginning of slide reading were also included. IHC was performed in sequential 4µm sections from the same array using antibodies against estrogen and progesterone receptors, Ki67, p53 and Her2. The first and the last slides were stained by hematoxylin and eosin to evaluate: number of tissue discs, tissue preservation, and adequacy of the tissue sample. RESULTS: The equipment total cost was US$ 180,00. The slides showed fine tissue preservation, adequate for morphologic evaluation, and sufficient to confirm diagnosis. The IHC quality was similar to the donor blocks. CONCLUSION: This equipment and technique represent an economical alternative when compared to commercial equipments.