RESUMO: Embora raros, os micoplasmas estão incluídos entre as causas de doenças respiratórias em répteis e, na ordem Squamata, já foram realizados três relatos destes microrganismos causando doença em pítons. Este estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de espécies de Mycoplasma em serpentes em cativeiro. Foram avaliadas 26 serpentes das famílias Pythonidae (13), Boidae (7), Viperidae (5) e Colubridae (1) do RioZoo, Brasil. Os animais foram examinados para determinar sinais clínicos consistentes com qualquer doença infecciosa. Amostras de swab traqueal de cobras foram coletadas em meio Frey e analisadas por isolamento microbiológico e pela técnica da PCR para identificar Mycoplasma spp. As amostras positivas para o gênero Mycoplasma spp. foram submetidas ao sequenciamento genético para identificação das espécies. No isolamento, 19,23% (5/26) foram positivos, enquanto 65,38% (17/26) dos animais foram positivos por PCR. Com base nas análises das seis sequências obtidas, houve similaridade com o Mycoplasma spp. descrito anteriormente em um píton e M. agassizii e M. testudineum encontrados em quelônios. Este é o primeiro relato de Mycoplasma spp. em animais das famílias Boidae e Viperidae. Mycoplasma spp. foi detectado em serpentes com e sem sinais clínicos. Os micoplasmas encontrados apresentaram semelhança genética com outros já descritos em répteis. Não houve relação entre a presença de Mycoplasma spp. e sinais clínicos.

ABSTRACT: Although rare, mycoplasmas are included among the causes of respiratory diseases in reptiles and, in the order Squamata, three reports of these microorganisms causing diseases in pythons have already been reported. This study aimed to evaluate the occurrence of Mycoplasma species in captive snakes. A total of 26 snakes of the families Pythonidae (13), Boidae (7), Viperidae (5) and Colubridae (1) from RioZoo, Brazil, were evaluated. Animals were examined to determine clinical signs consistent with any infectious disease. Tracheal swab samples from snakes were collected in Frey medium and analyzed for the presence of Mycoplasma spp.by isolation and a genus-specific PCR. DNA sequencing analyses of six positive samples by PCR were carried out to identify the species. Using isolation 19.23% (5/26) was positive, while 65.38% (17/26) of the animals were positive by PCR. Based on the analyses of the six sequences obtained, there was similarity with a Mycoplasma spp. previously described in a phyton and, M. agassizii and M. testudineum reported in chelonians. This is the first report of Mycoplasma spp. in animals of the families Boidae and Viperidae. Mycoplasma spp. were detected in snakes with and without clinical signs. The mycoplasmas reported resented identity (range, 95% to 100%) to others already described in reptiles. There was no relationship between the presence of Mycoplasma spp. and clinical signs.

RESUMO: A cepa F de Mycoplasma gallisepticum (MG-F) protege as galinhas de micoplasmose, e sua monitorização é feita por sorologia e histopatologia de traqueia. Este estudo utilizou 90 frangos, sendo 30 não vacinados (grupo G1); 30 vacinados via gota ocular a 8 semanas de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo, SP, Brasil) (G2); e 30 imunizados em 8 e 11 semanas de idade (G3). As amostras foram obtidas nas 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª e 24ª semanas para ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Fragmentos traqueais foram coletados após necropsias nas 15ª e 24ª semanas. Até a 12ª semana, as reações de ELISA em densidade óptica (DO) foram 0,165 (G1), 0,151 (G2) e 0,151 (G3), todas abaixo de 0,20, e não houve diferença significativa entre os grupos (p > 0,05). Após a 15ª semana , a reação de ELISA subiu, produzindo as seguintes médias dos grupos por datas de coleta: G1 (0,18, 0,19, 0,18 e 0,16), G2 (0,36, 0,49, 0,47 e 0,44) e G3 (0,41, 0,52, 0,59, 0,60), sendo as médias de G2 e G3 não significativamente diferentes entre si, mas significativamente diferentes da de G1. O peso inicial (592,71, 621,33, 594,40), o peso final (1.932,58, 1.987,59, 1.875,20) e o ganho de peso semanal (11,65, 11,90, 11,14) não foram significativamente diferentes entre os grupos. Na necropsia, as médias do escore da macroscopia de traqueia por grupo e data foram: 15ª semana (0,25, 0,61 e 0,54) e 24ª semana (0,54, 0,58 e 0,67), e não se apresentou diferença significativa (p > 0,05). Na microscopia, a média de escores de traqueia por grupos G1, G2 e G3, respectivamente, foram: 15ª semana (0,25, 0,32 e 0,47) e 24ª semana (0,07, 0,75 e 0,08). G2 apresentou maior média de escore do que G1 e G3 na 24ª semana. Alterações traqueais mais elevadas para G2 e G3 em relação a G1 poderiam ser atribuídas à vacinação por MG-F. Não houve efeitos prejudiciais evidentes no peso vivo nem no ganho de peso, tampouco alterações teciduais na aplicação de uma ou duas doses de vacinação.

ABSTRACT: The F strain of Mycoplasma gallisepticum (MG-F) protects chickens against mycoplasma infections, in which monitoring is made by serology and histopathology of trachea. This trial used 90 chickens, being 30 unvaccinated (G1 group), 30 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F (Ceva Animal Health, São Paulo, SP, Brazil) (G2), and 30 immunized at 8 and 11 weeks of age (G3). Samples were obtained from chickens on the 8, 12, 15, 18, 20 and 24th weeks of age for the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test. Tracheal fragments were collected after necropsies on the 15 and 24th weeks of age. Up to 12 weeks, the ELISA reactions in optical density (OD) were 0.165 (G1), 0.151 (G2) and 0.151(G3), all below 0.20 and with no significant difference among groups (p > 0.05). After the 15th week, the ELISA reactions rose, yielding the following group averages by collecting dates: G1 (0.18, 0.19, 0.18, and 0.16), G2 (0.36, 0.49, 0.47, and 0.44) and G3 (0.41, 0.52, 0.59, 0.60), being the means in G2 and G3 not significantly different between than, but significantly different from G1. The initial weight (592.71, 621.33, and 594.40), the final weight (1,932.58, 1,987.59, and 1,875.20) and the weekly weight gain (11.65, 11.90, and 11.14) were not significantly different among groups. At necropsy the gross tracheal score means by group and dates were: 15th week (0.25, 0.61, and 0.54) and 24th week (0.54, 0.58, and 0.67), being these difference not significantly (p > 0.05). On microscopy, the tracheal score averages by groups G1, G2 and G3, respectively, were: 15th week (0.25, 0.32, and 0.47) and 24th week (0.07, 0.75, and 0.08). G2 yielded higher score average than G1 and G3 on the 24th week. Higher tracheal changes for G2 and G3 as compared to G1 could be ascribed to MG-F infection. There were no evident prejudicial effects on live weight, weight gain and tissue changes by applying one or two vaccination doses.

O objetivo deste trabalho foi comparar a análise individual (plano de duas classes) e a análise por lotes (plano de três classes), priorizado pelo plano amostragem oficial da ANVISA, na influência do pré-resfriamento de carcaças de frangos de corte na redução da contaminação por coliformes termotolerantes. Foram analisadas 240 carcaças de frangos de corte, sendo coletadas 120 amostras antes e 120 após a etapa de pré-resfriamento, para quantificação de coliformes termotolerantes pela técnica de contagem em placas. As médias das contagens obtidas das carcaças coletadas antes e após o pré-resfriamento foram diferentes, com uma redução média de 0,99log10 UFC g-1 de coliformes termotolerantes. Na interpretação dos resultados obtidos antes do pré-resfriamento pela análise individual, 16,7% (20/120) das carcaças foram classificadas como inaceitáveis, enquanto, pela análise por lotes, foram 37,5% (45/120). Houve associação entre a aceitabilidade dos lotes e a passagem pelo chiller com um valor de Odds Ratio de 35,48. Ficou demonstrada a importância da utilização do plano de análise por lotes e da etapa de pré-resfriamento no processo de produção, sendo decisivos para a aceitação dos lotes de carcaças de aves para comercialização pelos parâmetros vigentes na legislação nacional.

The objective of this study was to assess the influence of immersion chilling on broiler carcasses contamination by fecal coliforms counting in a poultry slaughterhouse under Federal Sanitary Inspection by individual and three class plan interpretation of the results. Two hundred and forty broiler carcasses, being collected 120 before and 120 after passage thought chillers, were analyzed for coliform counting by plate count technique. The averages of the counts obtained from all carcasses collected before and after immersion chilling were different, with an average reduction of 0.99log10 CFU g-1 of fecal coliforms. Regarding individual results (two class plan) before chilling, 16.7% (20/120) of the carcasses were classified as unacceptable, against 37.5% (45/120) regarding lots results (three class plan). There was a strong association between the acceptability of lots and immersion chilling with an Odds Ratio value of 35.48. It was demonstrated the importance of the official sampling plan and immersion chilling in the production process, being decisive for the acceptance of the chicken carcass lots by the national legislation standards.

A patogenicidade das cepas de Escherichia coli está relacionada à expressão de fatores de virulência encontrados em elementos genéticos denominados plasmídios. O patotipo APEC, responsável por diferentes tipos de doenças em aves, pode apresentar o gene iss que aumenta a resistência das cepas de E. coli aos efeitos líticos do soro, além da resistência a diversos antimicrobianos. Este estudo foi conduzido para detectar E. coli em traquéias de codornas destinadas ao abate e avaliar, pela presença do gene iss e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana, o potencial patogênico para aves e humanos dos isolados obtidos. Foram coletadas 180 traquéias de codornas para detecção de E. coli, determinação do perfil de resistência a agentes antimicrobianos e posterior detecção, por reação em cadeia da polimerase (PCR), do gene iss. Das traquéias analisadas, 8,9 % (16/180) foram positivas para E. coli, sendo obtidos 20 isolados deste agente. A maioria dos isolados foi resistente à Tetraciclina (16/20), seguida pela Ceftazidima (13/20) e Ácido Nalidíxico (12/20), sendo apenas um resistente à Amoxicilina. A detecção do gene iss ocorreu em 55% (11/20) dos isolados. A presença do gene iss e a resistência a múltiplos antimicrobianos dos isolados obtidos neste estudo pode indicar um possível potencial patogênico das cepas de E. coli tanto para codornas quanto para outros tipos de aves e animais e mesmo para o ser humano que fique em contato com as mesmas.

The pathogenicity of Escherichia coli strains is partially related to the expression of virulence factors genes, present in genetic elements called plasmids. APEC strains responsible for diseases in birds may present the iss gene which increases the resistance of E. coli strains to the lityc effect of the host's serum, besides resistance to several antimicrobials. This study was conduced in order to detect E. coli in tracheae of meat-type quails and to evaluate, by the presence of the iss gene and the profile of antimicrobial susceptibility, the pathogenic potential of the isolated samples for birds and humans. One hundred and eighty tracheae of quails were collected for detection of E. coli, antimicrobial sensitivity tests, and for polymerase chain reaction (PCR), for detection of iss gene. From the examined quails, 8.9 % (16/180) were positive for E. coli, from which 20 strains of this bacterium were obtained. Most of them were resistant to Tetracycline (16/20), followed by Ceftadizime (13/20) and Nalidixic-acid (12/20) and only one isolate was resistant to Amoxicillin. The detection of iss gene occurred in 55% (11/20) of the isolates, indicating that these strains had the potential to be pathogenic not only for quails, but also for other kinds of birds, other animals and even human beings that would be in contact with these E. coli isolates.

O Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) foi diagnosticado por PCR-REA e imunoperoxidase indireta (IPI) em amostras de lavados de conduto auditivo de bovinos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. 60 bovinos foram selecionados aleatoriamente. As lavagens foram feitas com uso de seringas estéreis contendo um volume de 60 mL de solução salina tamponada (PBS pH 7.2). As amostras obtidas foram estocadas em glicerol (1:2) e congeladas a 20ºC até uso. Estas amostras foram diluídas até 10-5 e repicadas em meio Hayflick modificado, sólido e líquido, sendo incubados a 37ºC por 48-72 horas. As placas foram mantidas em microaerofilia e observadas diariamente, para visualização das colônias típicas em “ovo-frito”. Das 60 amostras cultivadas, 48 (80,00%) foram positivas para Mycoplasma spp. A prevalência obtida para o GMM na IPI foi de 20,0% (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7% (25/60). Das cepas tipificadas pela IPI 58,3% (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7% (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA o grupo M. mycoides foi confirmado pela visualização de um amplicon de 785bp, compatível com este grupo. O valor encontrado no teste Kappa para associação entre estes testes foi de 0,14 (P>0,05. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição AluI, de cepas de referências e dos isolados de ouvido os fragmentos obtidos foram de 81, 98, 186 e 236pb, mas não de 370pb, que é específica para o agente da Pleuropneumonia Contagiosa Bovina. A presença de espécies de micoplasmas no conduto auditivo de bovinos assintomáticos representa um risco para propagação de Mycoplasma spp. entre rebanhos bovinos no Brasil.

Mycoplasma mycoides cluster (MMC) was diagnosed by polimerase chain reaction-restriction endonuclease analysis (PCR-REA) and indirect immunoperoxidase (IPI), both, carried out in flushing from external ear canal, collected from bovine at slaughter time in the State of Rio de Janeiro, southeastern, Brazil. A total of 60 bovines were randomly selected. Sterile syringes (60mL) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. The obtained samples were stored in glycerol (1:2) and frozen at -20ºC until use. These specimens were diluted up to 10-5, inoculated in liquid and solid modified Hayflick´s media and incubated at 37ºC for 2-3 days. The plates were kept in a microaerophilia condition and examined every two days under a stereomicroscope for the presence of typical colonies “fried-egg”. In this study, 35 strains selected in agreement with their biochemistry and physiologic proprieties, were used. From the 60 cultivated samples, 48 (80.00%) were positive for Mycoplasma spp. Under IPI the prevalence obtained for MMC was 20.0% (12/60) while by PCR-REA it was 41.7% (25/60). The IPI typing of these isolates resulted in 58.3% (7/12) for M.mycoides mycoides LC and 41.7% (5/12) for M. capricolum. PCR-REA for MMC was confirmed by the amplicon size of 785bp, compatible with this group. The Kappa value for the association between these two tests was 0.14 (p>0.05). After restriction analysis with AluI in all MMC strains the fragments size obtained were of 81, 98, 186 and 236bp, but not of 370bp that is compatible with Mycoides mycoides mycoides SC of bovine type. The presence of mycoplasmas species in the ear canal of asymptomatic bovines represent a risk of subsequent propagation of Mycoplasma spp. among bovine herds in Brazil.

Foram pesquisados micoplasmas no conduto auditivo de 60 bovinos no Brasil. A prevalência obtida foi de 80%. A porcentagem das espécies tipificadas foi de M. alkalenses, 12,5%; M. arginini, 2,1%; M. bovirhinis, 8,35%; M. bovis, 2,1%; M. conjunctivae, 25,0%; M. mycoides subsp. mycoides LC, 14,6% e M. capricolum, 10,4%.

Mycoplasmas were searched in the ear canal flushing of 60 bovine in Brazil. The prevalence obtained was 80%. The percentages of typified species were 12.5%, for M. alkalenses; 2.1%, M. arginini; 8.35%, M. bovirhinis; 2.1%, M. bovis; 25.0%, M. conjunctivae; 14.6%, M. mycoides subsp. mycoides LC and 10.4% M. capricolum.

A doença de Newcastle é caracterizada por manifestações respiratórias associadas a sintomas nervosos e/ou digestivos. Sua prevenção é feita pela vacinação com vacinas vivas atenuadas (cepas lentogênicas) e/ou inativadas. As cepas lentogênicas podem determinar acentuada reação pós-vacinal, principalmente na presença de outros patógenos. Entre eles, o Mycoplasma synoviae tem importância mundial, principalmente no Brasil. A disseminação deste agente nos planteís avícolas tem sido facilitada, devido a dificuldades de reprodução e diagnóstico da doença em aves, variação de virulência entre as diferentes cepas de M.synoviae e atribuição a outros patógenos de manifestação típica da micoplasmose por M.synoviae. Este estudo experimental em aves (Gallus gallus) SPF, previamente infectadas por M.synoviae e depois vacinadas contra Newcastle, foi realizado com objetivo de avaliar a patogenicidade do M.synoviae pela obtenção dareação respiratória pós-vacinal e a resposta sorológica para o vírus vacinal da doença de Newcastle, na ausência de fatores ambientais. Um total de 86 aves, com três dias de idade foram utilizadas, sendo 57 infectadas via ocular e intranasal, com cepa MS WVU 1853, ativada em galinhas. Sete dias depois, 21 aves infectadas por micoplasma e 29 não infectadas foram vacinadas contra a doença de Newcastle. Como resultados, aves não infectadas e vacinadas produziram resposta sorológica para o vírus vacinal da doença de Newcastle, significativamente mais elevada e mais duradora que aquelas infectadas e vacinadas. Igualmente, aves infectadas e vacinadas produziram reações sorológicas para M.synoviae mais baixa, que aquelas apenas infectadas. Não foram observadas reações respiratórias pós-vacinal nas aves vacinadas.

Newcastle disease is characterized by respiratory manifestations in association with nervous and/or digestive symptoms. Its prevention is done by vaccination with live attenuated (lentogenic strains) and/or killed vaccines. The lentogenic strains can lead to strong post-vaccination reaction, principally due to the presence of other pathogenic agents. Among them, Mycoplasma synoviae is worldwide important, mainly in Brazil. The dissemination of this agent in poultry flocks has been achieved due to difficulties in diagnosis and disease reproduction, virulence variations among different M.synoviae strains, and attribution of typical M.synoviae disease manifestation to other disease agents. This experimental study in SPF chicks (Gallus gallus), previously infected by M.synoviae and thereafter vaccinated against Newcastle disease, was done with the objective of evaluating M.synoviae pathogenicity through assessment of post-vaccinal respiratory reactions and serologic responses to Newcastle disease virus vaccine in the absence of environmental factors. A total of 86 three days old chicks were used, being 57 infected by eye and nostril drop, with chicken activated M. synoviae strain WVU 1853. Seven days later, 21 mycoplasma infected birds plus 29 not mycoplasma infected ones were vaccinated against Newcastle disease. As results, the not infected and vaccinated birds yielded, significantly, higher and longer lasting serologic responses to Newcastle disease vaccine virus than those infected and vaccinated. Similarly, the infected and vaccinated birds yielded lower serologic reactions to M.synoviae than those only mycoplasma infected. No post-vaccinal respiratory reaction was observed in the vaccinated birds.