RESUMO O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da suplementação com L-glutamina 2% na inervação mioentérica do íleo de ratos diabéticos, agrupados da seguinte forma: normoglicêmico (N); normoglicêmico suplementado com L-glutamina (NG); diabético (D); e diabético suplementado com L-glutamina (DG). Os íleos foram submetidos a técnicas imunohistoquímicas para localizar neurônios imunorreativos à proteína HuC/D (HuC/D-IR) e enzima óxido nítrico sintase neuronal (nNOS-IR) e para analisar varicosidades imunorreativas ao polipeptídeo intestinal vasoativo (VIP-IR) e peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP-IR). A L-Glutamina no grupo DG (i) preveniu o aumento na área do corpo celular de neurônios nNOS-IR, (ii) preveniu o aumento na área das varicosidades VIP-IR, (iii) não preveniu a perda de neurônios HuC/D-IR e nNOS-IR por gânglio, e (iv) reduziu o tamanho das varicosidades CGRP-IR. A L-Glutamina no grupo NG reduziu (i) o número de neurônios HuC/D-IR e nNOS-IR por gânglio, (ii) a área do corpo celular de neurônios nNOS-IR, e (iii) o tamanho das varicosidades VIP-IR e CGRP-IR. Suplementação com L-glutamina 2% exerceu efeitos neuroprotetores diferenciais na neuropatia diabética experimental que dependem do tipo de neurotransmissor analisado. Entretanto, os efeitos desta dose de L-glutamina em animais normoglicêmicos sugerem que existem ações adicionais desta além da sua capacidade antioxidante.

ABSTRACT The objective of this study was to investigate the effects of 2% L-glutamine supplementation on myenteric innervation in the ileum of diabetic rats, grouped as follows: normoglycemic (N); normoglycemic supplemented with L-glutamine (NG); diabetic (D); and diabetic supplemented with L-glutamine (DG). The ileums were subjected to immunohistochemical techniques to localize neurons immunoreactive to HuC/D protein (HuC/D-IR) and neuronal nitric oxide synthase enzyme (nNOS-IR) and to analyze varicosities immunoreactive to vasoactive intestinal polypeptide (VIP-IR) and calcitonin gene-related peptide (CGRP-IR). L-Glutamine in the DG group (i) prevented the increase in the cell body area of nNOS-IR neurons, (ii) prevented the increase in the area of VIP-IR varicosities, (iii) did not prevent the loss of HuC/D-IR and nNOS-IR neurons per ganglion, and (iv) reduced the size of CGRP-IR varicosities. L-Glutamine in the NG group reduced (i) the number of HuC/D-IR and nNOS-IR neurons per ganglion, (ii) the cell body area of nNOS-IR neurons, and (iii) the size of VIP-IR and CGRP-IR varicosities. 2% L-glutamine supplementation exerted differential neuroprotective effects in experimental diabetes neuropathy that depended on the type of neurotransmitter analyzed. However, the effects of this dose of L-glutamine on normoglycemic animals suggests there are additional actions of this beyond its antioxidant capacity.

O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da suplementação com L-glutamina para prevenir as alterações induzidas pelo diabetes sobre os neurônios mientéricos e também verificar o efeito sobre a mucosa do íleo de ratos Wistar. Os animais foram divididos em cinco grupos (n = 5): normoglicêmico não tratado (UN), normoglicêmico tratado com L-glutamina (NG), diabético não tratado (UD), diabético tratado com L-glutamina, iniciando no 4° (DG4) ou 45° (DG45) dias após a indução do diabetes. O aminoácido foi adicionado à dieta a 1%. A densidade e o tamanho dos neurônios, o índice metafásico nas criptas, a altura das vilosidades, a profundidade das criptas e o número de células caliciformes foram determinados. Não houve diferença na densidade neuronal e na área do corpo celular dos neurónios mientéricos miosina-V imunomarcados dos grupos DG4 e DG45 quando comparados com o grupo D. O índice metafásico e o número de células caliciformes não apresentaram diferenças significativas quando todos os grupos foram comparados (P > 0,05). A altura das vilosidades dos grupos DG4 e DG45 foi 45,5% (P < 0,05) e 32,4% (P > 0,05) superior que no grupo UD, respectivamente. As criptas analisadas apresentaram profundidade semelhante para todos os grupos estudados.

The objective of this work was to investigate the effect of the L-glutamine supplementation to prevent - diabetes induced changes in myenteric neurons and also to verify the effect on the mucosa of the ileum of Wistar rats. The animals were divided in five groups (n = 5): untreated normoglycaemic (UN), normoglycaemic treated with L-glutamine (NG), untreated diabetics (UD), diabetics treated with L-glutamine, starting on the 4th (DG4) or 45thday following diabetes induction (DG45). The amino acid was added to the diet at 1%. The density and size of neurons, the metaphasic index in the crypt, the height of the villus, the depth of the crypt and the number of globet cells were determined. There was no difference in the neuronal density and in the cellular body area of the myosin-stained myenteric neurons of groups DG4 and DG45 when compared to group D. The metaphase index and the number of goblet cells showed no significant differences when all groups were compared (P > 0.05). The villi height of groups DG4 and DG45 were 45.5% (P < 0.05) and 32.4% (P > 0.05) higher than those in group UD, respectively. The analyzed crypts showed similar depth for all studied groups.

O ácido ascórbico (AA) neutraliza essas espécies reativas de oxigênio e é imprescindível para a síntese do colágeno. No processo de envelhecimento ocorre aumento do estresse oxidativo. Objetivamos investigar o efeito da suplementação com AA sobre o ligamento periodontal (LP) de ratos durante o processo de envelhecimento. Foram utilizados 25 ratos divididos em cinco grupos: J90 (90 dias de idade), E345 (345 dias de idade), E428 (428 dias de idade), EA345 (tratados com AA do 90º ao 345º dia) e EA428 (tratados com AA do 90º ao 428º dia). Foram analisadas espessura, densidade de fibroblastos e vasos sanguíneos, e o tipo de fibra colágena presente no LP. No grupo J90 houve um predomínio de fibras colágenas do tipo III (87,64%). Nos animais suplementados com AA, a área ocupada pelas fibras tipo I (grupo EA345 - 65,67%; grupo EA428 - 52,23%) foi maior que aquelas do tipo III. A espessura do LP no grupo EA428 foi maior do que a observada no grupo E428 (P < 0,05). No processo de envelhecimento natural o AA atuou na maturação das fibras colágenas e estimulou a angiogênese no ligamento periodontal. Pode-se concluir que a suplementação com AA foi positiva para o LP de ratos envelhecidos.

Ascorbic acid (AA) is able to neutralize reactive oxygen species and is essential for collagen synthesis. In aging process oxidative stress is elevated. This study aims to investigate the effects of AA supplementation on the periodontal ligament (PL) of rats during aging. Twenty five rats were used and divided into groups: J90 (90-day-old control), E345 (345-day-old control), E428 (428-day-old control), EA345 (345-day-old supplemented with AA from 90-day-old on) and EA428 (428-day-old supplemented with AA from 90-day-old on). We analyzed the thickness, density of fibroblasts and blood vessels and collagen fibers types in the PL. In group J90 there was predominantly type III collagen fibers (87.64%). In animals supplemented with AA, the area filled by type I fibers (group EA345: 65.67%, group EA428: 52.23%) was higher than type III fibers. PL in group EA428 was thicker than the one observed in group E428 (P < 0.05). During natural aging process, AA promoted the maturation of collagen fibers and enhanced angiogenesis in periodontal ligament. One can conclude that the supplementation with AA represented a beneficial factor for the development of PL in aged rats.

Durante o processo de envelhecimento o Sistema Nervoso Entérico sofre alterações morfofuncionais, como a neurodegeneração entérica. A morte neuronal pode ser atribuída ao aumento de radicas livres, e o ácido ascórbico (AA), conhecido antioxidante, poderia minimizar danos causados pelo estresse oxidativo. O objetivo deste estudo é analisar o comportamento morfoquantitativo dos neurônios mioentéricos no duodeno de ratos Wistar adultos com 90(C90), 345(E345) e 428(E428) dias e animais de mesma idade que receberam suplementação de ácido ascórbico por 120 dias (EA345 e EA428). Preparados totais da túnica muscular do duodeno dos animais foram imunomarcados pelo método Miosina V. Foram quantificados 80 campos microscópicos (14,8 mm2/animal) e mensurados 100 corpos celulares neuronais por animal. Durante o processo de envelhecimento houve uma redução na densidade neuronal nos animais de todos os grupos, indicando que os efeitos da idade não foram amenizados com a suplementação de AA. O Aumento na área dos corpos celulares neuronais nos animais com 428 dias comprovou a influência da idade sobre este parâmetro. Não foi observado um efeito neuroprotetor do AA (1 mL/g peso corporal) sobre a população neuronal mioentérica Miosina V imunoreativa.

During the ageing process the enteric nervous system undergoes morphofunctional changes, such as enteric neurodegeneration. Neuronal death can be attributed to increase radicals free, and ascorbic acid (AA), known antioxidant, could minimize damage cause by oxidative stress. The objective of this study is to analyse the behaviour of morphoquantative myenteric neurons in the duodenum of adult Wistar rats with aged 90 (C90), 345 (E345) and 428 (E428) days, as well as animals of the same age who received ascorbic acid supplementation for 120 days (EA345 and EA428). Whole-mount preparations of muscle layer from the duodenum of the animals were immunostained by the method myosin V. 80 microscopic fields were quantified (14.8 mm2/animal) and measured 100 neuronal cell bodies per animal. During the aging process, there was a reduction in neuronal density in all animals groups, indicating that the effects of age were not attenuated with AA supplementation. The increase in the neuronal area of the cell bodies in 428-day-old animals proved the influence of age on this parameter. There was no observed a neuroprotective effect of AA (1 mL/g body weight) on the neuronal population myenteric myosin V immunoreactive.