ESTUDIO DE LA VACUNACIÓN EXPERIMENTAL EN GALLINA DE GUINEA (NUMIDA MELEAGRIS) CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE E INVESTIGACIÓN DEL ESTADO DEL PORTADOR DE VIRUS

ESTUDO DA VACINAÇÃO EXPERIMENTAL EM GALINHAS D'ANGOLA (NUMIDA MELEAGRIS GALEATA)CONTRA A DOENÇA DE NEWCASTLE E INVESTIGAÇÃO DO ESTADO DE PORTADOR DE VÍRUS.

RESÚMEN

El trabajo tuvo como objetivo estudiar la importancia de la vacunación contra la enfermedad de Newcastle en pintadas (Numida meleagris galeata), como tanbién investigar el estado de portador del virus en esta especie. Fueron usadas 300 gallina de guinea, distribuidas, aleatoriamente, en 5 grupos vacunados o no. A las 5 y 12 semanas, todos los grupos fueron desafiados con una suspensión de virus patogénico (NVD), EID₅₀ = 10 ^8,15/0,1 mL. Para aislamiento viral, realizado en huevos embrionados LPE, después de 5, 10, 15, 20 y 30 días (5 colectas) para el grupo testigo y 15 días (colecta única) después de cada desafío para los demás grupos, fueron usados hisopados de cloaca. Las gallina de guinea de todos los grupos no demostraron síntomas de la enfermedad de Newcastle. Las gallina de guinea entonces se mostraron refractarias a la enfermedad clínica con el NVD. En las gallina de guinea del grupo testigo, el aislamiento viral se obtuvo de 5 hasta 30 días después de cada desafío. Quedó demostrado así el estado de portador de NVD de la gallina de guinea. En las pintadas de los grupos vacunados, el aislamiento viral fue nulo. Quedó demostrado también así la importancia de la vacunación en la supresión del estado de portador del NVD de la gallina de guinea.

PALABRAS CLAVES
Gallina de guinea; Numida meleagris galeata ; vacunación; enfermedad de Newcastle; estado de portador del virus

RESUMO

O trabalho teve como objetivo estudar a importância da vacinação contra a doença de Newcastle em galinhas d’angola (Numida meleagris galeata),bem como investigar o estado de portador de vírus nesta espécie. Foram utilizadas 300 galinhas d'angola, distribuídas, aleatoriamente, em 5 grupos vacinados ou não. As 5 e 12 semanas todos os grupos foram desafiados com uma suspensão de vírus patogênico (NVD), EID₅₀ = 10 ^8,15/0,1 mL. Para isolamento viral, realizado em ovos embrionados de galinhas livres de patógenos específicos (SPF), depois de 5, 10, 15, 20 e 30 dias (5 colheitas) para o grupo controle e 15 dias (colheita única) depois de cada desafio para os demais grupos, foram colhidos suabes de cloaca. As galinhas d'angola de todos os grupos não demonstraram sinais da doença de Newcastle. As galinhas d’angola então se mostraram refratárias à doença clínica com o NVD. Nas galinhas d'angola do grupo controle, o isolamento viral se obteve de 5 até 30 dias depois de cada desafio. Ficou demonstrado assim o estado de portador de NVD das galinhas d’angola. Nas galinhas d'angola dos grupos vacinados, o isolamento viral foi nulo, demonstrando-se assim a importância da vacinação na supressão do estado de portador de NVD em galinhas d'angola.

PALAVRAS-CHAVE
Galinhas d'angola; Numida meleagris galeata ; vacinação; doença de Newcastle; estado de portador de vírus

INTRODUCCIÓN

La enfermedad de Newcastle permanece como principal virosis de la avicultura y es altamente infecciosa, afectando aves domésticas y silvestres. La vacunación de rutina y sacrificio combinado com la cuarentena han ayudado a controlar la muy virulenta enfermedad causada por el NVD, clasificado como un Parainfluenzavirus aviário tipo 1. La enfermedad de Newcastle ha sido, y es hasta ahora, la principal barrera sanitaria para el libre comercio de aves y sus productos entre los países en todo el mundo (OFFICE INTERNATIONAL DES EPIZOOTES, 1996). Actualmente, la enfermedad tiene una distribución mundial com un amplio rango de hospederos en que 27 de las 50 órdenes de aves han sido reportadas como infectadas por su agente etiológico (KALETA & BELDAUF, 1988). En este contexto, se insere la especie Numida meleagris galeata, popularmente conocida como pintadas, cuya crianza comercial, visando el mercado de carne de elevado valor nutritivo, viene desenvolviéndose en Brasil, especialmente en la region Nordeste del país. Esto es probable debido al potencial de retorno económico. Estos animales son facilmente adaptables al cautiveiro, com elevado potencial zootécnico; no obstante, hasta el presente, no se han realizado trabajos en relación al control sanitario para su preservación en confinamiento. De este modo, la crianza intensiva de estas aves, sus movimientos y el aumento de la concentración de los planteles podrá sobretodo favorecer la diseminación del NVD. Por esta razón, fue proyectada esta investigación com el objetivo de estudiar la importancia de la vacunación en esta especie contra la enfermedad de Newcastle, como también investigar el estado de portador de laspintadas del NVD.

MATERIAL Y MÉTODOS

Instalaciones, aves experimentales, manejo y nutrición

La parte de campo fue realizada en la unidad experimental avícola y las pruebas de laboratorio en el Departamento de Patología Veterinaria de la Facultad de Ciências Agrarias y Veterinarias de la Universidad Estadual Paulista, sediada en el Campus de Jaboticabal, São Paulo, Brasil y en el Laboratório de Referencia Animal – LARA, Campinas, São Paulo, Brasil.

Fueron utilizadas 300 pintadas con un día de edad, distribuidas, aleatoreamente, en 5 tratamientos (grupos) de 60 aves cada uno, conforme la Tabla 1. Esos animales fueron vacunados (con excepción de las gallina de guinea del grupo testigo) contra la enfermedad de Newcastle, durante el período experimental a los 15 días e revacunadas a los 35 y 58 días de edad.

Tabla 1
Distribución de las pintadas en grupos experimentales.

Grupo	Vacunación	Vía de	Revacunación
	(15 días)	administración	vía ocular
			(35 y 58 días)
I	Ulster 2C	Ocular	Ulster 2C
II	B1	Ocular	B1
III	LaSota	Ocular	LaSota
IV	Oleosa	Subcutanea	—-
V*	Control	—-	—-

• ^*
  Grupo testigo – no vacunado

Para la nutrición de las pintadas, fse les ofrecio ración balanceada compatible con las diferentes fases de su ciclo de vida. De una manera general, las aves fueron sometidas a condiciones similares al manejo usual en avicultura.

Vacunas

Fueron usadas vacunas vivas o inactivadas, conforme el grupo exprimental, por la vía ocular o subcutanea, de acurdo con PAULILLO (1980, 1984 y 1989), PAULILLO et al. (1982), PAULILLO et al. (1987) y PAULILLO et al. (1996). El título de las vacunas fue expreso a través de su dosis infecciosa 50% (DIE₅₀) en embriones de pollos libres de patógenos específicos (LPE).

Las vacunas vivas (liofilizadas) fueron preparadas con las estirpes LaSota y Ulster 2C (EID₅₀ = 10^7,15/0,1mL) y aún B1 (EID₅₀ =10^7,35/0,1 mL). La vacuna oleosa fue preparada con la cepa LaSota (EID₅₀ = 10^9,50/mL), inactivada y emulsionada en aceite mineral.

Pruebas de desafío

A las 5 y 12 semanas de vida de los animales, 12 pintadas de cada grupo fueron desafiadas inoculándolas con 200 microlitros de una suspensión del virus patogénico, cepa velogénica viscerotropica (VENC), con tiempo promedio de muerte del embrión (TPM) y el índice de patogenicidad intracerebral en pollitos de uno día de edad (IPIC), respectivamente, de 48 horas y 1,78 y aún con EID₅₀ = 10^8,15/0,1 mL, por la vía oculo-nasal, según PAULILLO (1989) y de acuerdo con lo que recomienda el code of federal regulations. Para el control de la patogenicidad de la estirpe virulenta del NVD fue usado un grupo de aves livres de patógenos específicos. Las aves permanecieron en cámara de aislamiento com presión negativa, aire filtrado, agua y alimento "ad libitum".

Aislamiento viral

Para el aislamiento viral (virus patógeno), realizado en huevos embrionados de gallinas LPE, pasados 5, 10, 15, 20 y 30 días (5 colectas) para el grupo testigo (control) y 15 días (colecta única) después de cada desafío para los otros grupos, fueron usados hisopados de cloaca.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los resultados de los desafíos con el virus velogénico viscerotrópico de la enfermedad de Newcastle, en las pintadas, respectivamente, en las 5 y 12 semanas de edad, se encuentran en la Tabla 2.

Tabla 2
Resultados de los desafíos con el virus velogénico viscerotrópico de la enfermedad de Newcastle, en pintadas, en las 5 y 12 semanas de edad.

Grupo	Vacunación (15 días)	Vía de administración	Revacunación vía ocular (35 y 58 días)	Nº de aves testadas	% Média de proteccióntotal
I	Ulster 2C	Ocular	Ulster 2C	12	100,0
II	B1	Ocular	B1	12	100,0
III	LaSota	Ocular	LaSota	12	100,0
IV	Oleosa	Subcutânea	-	12	100,0
V*	Control	-	-	12	100,0
Aves livres de patógeno específico**				12	0,0

• ^*
  Grupo testigo – no vacunado
• ^**
  Control de la patogenicidad del VENC

Principalmente, en el grupo de las aves livres de patógenos específicos, como se observa en la Tabla 2, 100% de las aves murieron a los desafíos.

Los síntomas clínicos más frecuentes, com inicio 72h después de la inoculación del NVD, fueron caracterizados a principio por depresión, anorexia, plumas erizadas y conjuntivitis, seguidos de estornudos y por estertores húmedos de la tráquea. En la secuencia, fueron observados signos clínicos más severos, como disnea intensa, diarrea profusa y verdosa, corrimiento oculo-nasal abundante y mucoso, terminando com prostración y muerte.

Las alteraciones anatomopatológicas más comunes en el grupo de las aves livres de patógenos específicos (lote control de la patogenicidad del NVD) fueron aquellas de naturaleza hemorrágica.

Transtornos circulatórios fueron los hallazgos dominantes al examen anatomopatológico “postmortem”, siendo el principal cuadro de lesiones de la enfermedad de Newcastle.

Fueron observados procesos hemorrágicos en la mucosa del proventrículo en forma de petequias. Tambén, alteraciones severas de carácter necróticohemorrágicas fueron observadas a nivel intestinal y de tonsilas cecales.

Las alteraciones circulatórias en las vías aéreas superiores se caracterizarón por hemorragias entre los anillos traqueales, acompañados de exudado catarral en el lumen.

Otro aspecto son los resultados de los desafíos de las pintadas vacunadas o no contra la enfermedad de Newcastle (Grupos I al V) (Tabla 2). Curiosamente, las pintadas del grupo testigo o control (Grupo V) no evidenciaron síntomas de la enfermedad de Newcastle, mostrandose refractarias a la enfermedad clínica con el VENC.

Desde este punto de vista, la investigación está compatible con los datos de MATHIVANAN et al. (2004), pues este autor discribe el aislamiento y la caracterización molecular del NVD, confirmando la naturaliza velogénicad e los aislados, en pintadas aparentemente normales.

En los lotes de animales vacunados (Grupos I al IV), como se podía esperar, el porcentaje de protección a los desafíos fue elevado, 100% (Tabla 2).

Es importante resaltar, una vez más, que 100% de los pollos de engorde murieron en los desafios. La observación clínica y la necroscopia evidenciaron señales clínicos y lesiones compatibles con la enfermedad de Newcastle (forma velogénica viscerotrópica), lo que demuestra que el virus usado en las pruebas de desafio fue adecuado y refuerza la validez de los resultados obtenidos.

Los resultados del aislamiento de la cepa velogénica viscerotrópica, del NDV, de las pintadas, después de cada desafío, en los diferentes grupos, se encuentran en las Tablas 3 y 4.

Tabla 3
Resultado del aislamiento de la cepa velogénica viscerotrópica, del NVD, de las pintadas, en período postdesafío (5 semanas de edad), según los grupos experimentales.

Grupo	Vacunación	Revacunación vía	Aislamiento viral
	(15 días)	ocular (35 y 58 días)	5 DDD		10DDD		15DDD		20 DDD		30DDD
			T	C	T	C	T	C	T	C	T	C
I	Ulster 2C	Ulster 2C	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
II	B1	B1	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
III	LaSota	LaSota	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
IV	Oleosa	- - -	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
V*	Control	- - -	+	+	+	+	+	+	+	+	-	-

• ^*
  Grupo testigo – no vacunado
  DDD - Días después del desafio realizado a las 5 semanas de vida de las aves experimentales T = Tráquea
  C = Cloaca
  NR = No realizado
  + = cepa positiva
  = cepa negativa

Tabla 4
Resultado del aislamiento de la cepa velogénica viscerotrópica, del NVD, de las pintadas, en período post-desafío (12 semanas de edad), según los grupos experimentales.

Grupo	Vacunación	Revacunación vía	Aislamiento viral
	(15 días)	ocular (35 y 58 días)	5 DDD		10DDD		15DDD		20 DDD		30DDD
			T	C	T	C	T	C	T	C	T	C
I	Ulster 2C	Ulster 2C	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
II	B1	B1	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
III	LaSota	LaSota	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
IV	Oleosa	- - -	NR	NR	NR	NR	-	-	-	-	-	-
V*	Control	- - -	+	+	+	+	+	+	-	-	+	+

• ^*
  Grupo testigo – no vacunado
• DDD - Días después del desafio realizado a las 12 semanas de vida de las aves experimentales T = Tráquea
  C = Cloaca
  NR = No realizado
  + = cepa positiva
  -= cepa negativa

En las pintadas del lote testigo (Grupo V) el aislamiento viral de la cloaca fue de 5 hasta 30 días después del desafío confirmando de este modo la susceptibilidad de esta especie al NVD, de acuerdo con CAPUA et al. (2002) y MISHRA et al (2000).

A través de estos resultados quedó demostrado que el estado de portador de la pintada del NVD, pasados hasta 30 días de la infección experimental con este patógeno, lo que puede resultar muy importante desde el punto de vista epidemiológico.

Desafortunamente, nada se sabe sobre la importancia del estado de portador de la pintada (Numida meleagris galeata) del NVD, como fuente de infección o como factor iniciador de epidemias de la enfermedad en poblaciones de pollos de engorde, ponedoras comerciales y otras especies de aves silvestres que convivan en proximidad a su habitat natural o en confinamiento.

Por otro lado, en las pintadas de los grupos vacunados (Grupos I al IV), pasados 15 días después de los desafíos, el aislamiento viral de la cloaca y tráquea fue nulo (Tablas 3 y 4).

El hecho de no haber sido aislado el NVD de pintadas vacunadas (Grupos I al IV), resulta evidente la importancia de la vacunación en esta especie, pues no habrían posibilidades de replicación del NVD en cantidades suficientes para una infección posterior de otras especies de aves domésticas o silvestres.

Sobre este enfoque, se realza una vez más, que la amplia cobertura vacunal recibida por las pintadas (Numida meleagris galeata) (Grupos I al IV), sin duda alguna, contribuyó efectivamente para evitar el NVD reaislamiento en esta especie animal. En verdad, la instituición de programas inmunoprofilácticos contra la enfermedad de Newcastle para las pintadas, por lo menos, en este estudio, ha pasado a constituirse, en un, factor muy importante para creaciones de aves domésticas convivientes, enriqueciendo la literatura especializada.

Finalmente, sobre el punto de vista epidemiológico deben ser realizados estudios en pintadas inoculadas experimentalmente con el NVD, para establecer su importancia de estado de portador.

CONCLUSIONES

1. Las pintadas demostraron ser refractarias a la molestia clínica frente a los desafíos con el virus de la enfermedad de Newcastle.

2. Quedó demostrada la condición de portador del NVD de la pintada, pasados hasta 30 días de la infección experimental con este patógeno.

3. Se demostó la importancia de la vacunación en la supresión de estado del portador del NVD, de la pintada.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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• OFFICE INTERNATIONAL DES EPIZOOTES. Manual for animal disease reporting to the OIE Paris: World Organization for Animal Health, 1996.
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• PAULILLO, A.C.; PINTO, A.; ARIKI, J.; BERCHIERI JUNIOR, A. Doença de Newcastle. I. Estudo experimental da resposta imune às estirpes vacinais B₁ e LaSota. Rev. Fac. Med. Vet. Zootec. Univ. São Paulo, v.19, n.1, p.9-43, 1982.
• PAULILLO, A.C.; MOSTASSIER, H.J.; RICHTZENHAIN, L.J.; NAKAGHI, L.S.L.; BARBOSA, J.C.; CEVINTANA, J.L.; MONTASSIER, H.J.; BERCHIERI JUNIOR, A.; ARIKI, J. Doença de Newcastle. IV. Ensaio experimental de diferentes vias de vacinação com a estirpe lentogênica LaSota em frangos de corte. Ars Vet, v.3, n.1, p.73-79, 1987.
• PAULILLO, A.C. Estudo zootécnico e imunológico de aves de corte submetidas a diferentes programas de vacinação contra a doença de Newcastle. In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE ZOOTECNIA, 33., 1996, Fortaleza, CE. Anais Fortaleza: 1996. p.388-390.

Fechas de Publicación

• Publicación en esta colección
  01 Abr 2021
• Fecha del número
  Jan-Mar 2005

Histórico

• Recibido
  25 Ago 2004
• Acepto
  25 Mar 2005