O sêmen das seguintes espécies de Characiformes neotropicais foi testado para armazenamento em ambiente resfriado: Brycon lundii, Piaractus mesopotamicus, Leporinus elongatus, Leporinus friderici, Prochilodus lineatus e Prochilodus marggravii. Amostras de sêmen, obtidas por massagem da parede celômica, foram armazenadas em saco plástico com ar ou oxigênio ou em tubo plástico com ar, e mantidas resfriadas entre 1,7-4,9º C. A taxa de motilidade espermática foi estimada usando-se NaCl 50 mM como solução ativadora. O sêmen com menor duração de viabilidade (7 h) foi o de L. friderici, quando a taxa de motilidade espermática alcançou ~30%, enquanto que o de maior duração (20 h) foi o de P. lineatus. A fertilização de ovócitos utilizando sêmen refrigerado por 8 h de Prochilodus marggravii produziu 88-90% de embriões viáveis. O método de armazenamento desenvolvido neste trabalho tem aplicações práticas, especialmente no manejo reprodutivo de peixes em estações de piscicultura.