Resumo em Português:

Este artigo visa contribuir para a discussão relacionada ao futuro da microbiologia no Brasil. Este trabalho apresenta um levantamento, realizado em 2001, que mostra um quadro da situação atual da microbiologia no Brasil. A maioria das conclusões são fundamentadas nos dados coletados dos cursos universitários e dos dados fornecidos pelo Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq) brasileiro e pela Coordenação para o Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). No entanto, algumas das afirmativas são baseadas mais nas experiências de ensino de pós-graduação em microbiologia do que nos dados fornecidos pelas instituições oficiais. Tais afirmativas foram feitas no sentidos de incrementar o desenvolvimento da microbiologia no Brasil. Além disso, é apresentado um plano que propõe maior número de bolsas concedidas para a área de microbiologia, para aumentar a possibilidade de formar uma massa crítica necessária para maior desenvolvimento da microbiologia brasileira, visando produzir discussão e mais debate sobre o futuro da microbiologia no Brasil.

Resumo em Inglês:

This paper aims to contribute to the discussion and concern on the future of microbiology in Brazil. This work presents a survey carried out in 2001 that shows a picture of Microbiology status in Brazil. Most of the conclusions are based on the data collected from the university courses and from the data supplied by the Brazilian National Research Council (CNPq) and the Coordination for the Improvement of Higher Level Personnel (CAPES). However, some of the affirmatives are more based on the experiences with postgraduate teaching in microbiology than on the data provided by official institutions. Such affirmatives were made in order to improve the development of the microbiology in Brazil. Also, a plan that proposes higher number of scholarships awarded to microbiology, to increase the possibility to form a critical mass necessary for further development of the Brazilian microbiology, is presented in order to produce discussion and more debate on the future of the Microbiology in Brazil.

Resumo em Inglês:

The stepwise release of phosphate from phytate, the major storage form of phosphate in plant seeds and pollen, is initiated by a class of enzymes that have been collectively called phytases. The classification is solely due to the in vitro capability of these enzymes to accept phytate as a substrate. Phytases have been studied intensively in recent years because of the great interest in such enzymes for reducing phytate content in animal feed and food for human consumption. They have a wide distribution in plants, microorganisms, and in some animal tissues. Due to several biological characteristics, such as substrate specificity, resistance to proteolysis and catalytic efficiency, bacterial phytases have considerable potential in commercial applications. In bacteria, phytase is an inducible enzyme and its expression is subjected to a complex regulation, but phytase formation is not controlled uniformly among different bacteria. It was suggested that phytase is not required for balanced growth of bacterial cells, but may be synthesised in response to a nutrient or energy limitation.

Resumo em Inglês:

Multidrug efflux mechanisms in bacteria contribute significantly to intrinsic and acquired resistance to antimicrobial agents. Genome analysis have confirmed the broad distribution of these systems in Gram-negative as well as in Gram-positive bacteria. Among resistance mechanisms, the multidrug efflux system or pump deserves special attention, since a cell that has acquired it can simultaneously diminish or even suppress the susceptibility to a wide range of antimicrobials. The efflux system is mediated by transport proteins which confer resistance to toxic compounds. In Gram-negative bacteria, a tripartite efflux system is necessary to expel the drug to the outer medium: a protein localized in the cytoplasmic membrane; another in the periplasmatic space (membrane fusion protein - MFP); and a third in the outer membrane (outer membrane factor - OMF). The drug transport is active, and depends either on the energy provided by ATP hydrolysis or is directly driven by the proton motive force. The transport proteins are grouped in families, according to the homology of the amino acid sequences and to similarity of mechanisms. Among Gram-negative bacteria, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa have most of the hitherto identified and studied multidrug efflux systems.

Resumo em Português:

PCR utilizando vários oligonucleotídeos para detecção de espécies de micobactérias em espécimes clínicas foi padronizado. Três diferentes fragmentos genômicos: da seqüência de inserção IS6110, presente no complexo M. tuberculosis, do gene responsável por proteína específica (32kDa) do gênero e do gene mtp40 espécie-específico do M. tuberculosis foram estudados. A sensibilidade e especificidade do método em 135 amostras clínicas foram de 94.5% e 95.9%, respectivamente, comparados com os resultados da cultura em meio Löwenstein-Jensen, e o limite de detecção foi de 0.05 ng of DNA. O ensaio mostrou-se confiável e rápido para detecção de espécies de Mycobacterium em amostras clínicas, diferenciando M. tuberculosis de M. bovis em uma única reação.

Resumo em Inglês:

We investigated the use of multiprimer-PCR for detection of mycobacteria species in clinical samples. Three different mycobacterial genomic fragments were investigated: the IS6110 insertion sequence, present in M. tuberculosis complex; the genus specific fragment (32kDa); and from M. tuberculosis species-specific mtp40 gene. The sensitivity and specificity using 135 clinical isolates were 94.5% and 95.9%, respectively, compared with culture in Löwenstein-Jensen medium; the detection limit was 0.05ng of DNA. In conclusion, this assay is reliable and rapid for detection of Mycobacterium species in clinical samples, and differentiates M. tuberculosis from M. bovis strains in a single-step assay.

Resumo em Português:

Nós comparamos a eficácia do álcool gel com a dos tradicionais agentes degermantes preconizados para a lavagem das mãos na remoção de amostras clínicas de Acinetobacter baumannii, Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Candida albicans das mãos artificialmente contaminadas. As pontas dos dedos dos voluntários (n=6) foram contaminadas com aproximadamente 10(6) de células/microrganismo teste. A seguir, as mãos foram lavadas com sabonete líquido não medicamentoso, álcool gel, álcool etílico 70% (concentração por peso) e soluções anti-sépticas detergentes de polivinilpirrolidona-iodo a 10% (PVP-I) e de gluconato de clorhexidina 4%. Os experimentos foram realizados segundo um quadrado latino com seis blocos aleatorizados 6 x 5. Os resultados foram estimados por ANOVA. Os produtos reduziram de 93,83% (sabão líquido) a 100% (PVP-I 10%) a população microbiana aplicada nas mãos. Em 4 dos 6 microrganismos testes analisados, o PVP-I 10%, o álcool gel, o álcool etílico 70% e a clorhexidina 4% mostraram uma taxa de remoção significantemente superior a do sabão líquido (P < 0,05). Os resultados confirmam a eficácia do álcool gel na higienização das mãos e sugerem que o PVP-I 10%, o álcool gel, o álcool etílico 70% e a clorhexidina 4% podem ser os agentes mais eficazes do que o sabão líquido não medicamentoso na remoção de Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Enterococcus faecalis e Candida albicans das mãos altamente contaminadas.

Resumo em Inglês:

We compared the effectiveness of alcohol gel with that of the traditional hand-cleansing agents in removing clinical strains of Acinetobacter baumannii, methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, and Candida albicans from artificially contaminated hands. The fingertips of 6 volunteers were contaminated with approximately 10(6) of microbial cells, and then were washed with: plain liquid soap, alcohol gel, 70% ethyl alcohol (by weight), 10% povidone-iodine liquid soap (PVP-I), and 4% chlorhexidine gluconate detergent. The experiments were performed using a Latin square statistical design, with six 6 x 5 randomized blocks, and the results were estimated by ANOVA. The products reduced from 93.83% (plain liquid soap) to 100% (PVP-I) of the microbial population applied to the hands. In 4 of 6 test microorganisms analyzed, 10% PVP-I, alcohol gel, 70% ethyl alcohol, and 4% chlorhexidine had significantly higher removal rates than plain liquid soap (P < 0.05). The results confirm the effectiveness of alcohol gel for hand hygiene and suggest that 10% PVP-I, alcohol gel, 70% ethyl alcohol, and 4% chlorhexidine may be more effective than plain liquid soap for removing A. baumannii, E. coli, E. faecalis, and C. albicans strains from heavily contaminated hands.

Resumo em Português:

O objetivo da presente pesquisa foi analisar os graus de polimorfismos protéicos entre isolados de C. albicans provenientes de diversos sítios anatômicos de quarenta e dois pacientes clínicos, através do emprego da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e análise numérica, a fim de se identificar subespécies e suas similaridades nos diversos nichos infecciosos. Culturas celulares foram desenvolvidas em meio YEPD, coletadas por centrifugação e lavadas com solução salina gelada. As proteínas celulares totais, foram extraídas por rompimento celular, usando pérolas de vidro e submetidas à técnica de SDS-PAGE. Após a eletroforese, as bandas de proteínas foram coradas com coomassie-blue e analisadas pelo conjunto de programas estatístico NTSYS-pc versão 1,70. Matrizes de similaridade e dendrogramas foram gerados pela aplicação do coeficiente de similaridade simple-matching e do algoritmo UPGMA, respectivamente. Os resultados obtidos revelaram vários subtipos de C. albicans e seus graus de similaridade (80% a 100%). Tais dados permitiram demonstrar que, certos pacientes podem estar infectados com dois ou mais subtipos de C. albicans em determinados sítios anatômicos (i.e. apenas na cavidade oral de pacientes imunocomprometidos, sangue ou secreção traqueal), ou ainda, dois ou mais pacientes podem estar infectados em sítios anatômicos idênticos (i.e. apenas em lavagem brônquica, urina, cavidade oral, secreção traqueal, secreção vaginal ou saliva saudável) com um mesmo subtipo de C. albicans. No entanto, dois ou mais pacientes também podem apresentar infecções em sítios correspondentes (i.e. apenas na cavidade oral de pacientes imunocomprometidos, sangue, secreção orofaríngea, cavidade oral, secreção traqueal, secreção vaginal e saliva saudável) por diferentes subtipos de C. albicans. Além disso, dois ou mais pacientes também podem estar infectados com subtipos idênticos ou não de C. albicans em diferentes sítios anatômicos (i.e.1. idênticos subtipos na secreção vaginal, secreção traqueal e urina; secreção abdominal e escarro; drenagem e cavidade oral; cateter e saliva saudável - i.e.2. diferentes subtipos em lavagem brônquica, secreção orofaríngea, secreção pulmonar, cavidade oral de pacientes imunocomprometidos e sangue). Dados complementares envolvendo amostras de C. albicans isoladas de vários sítios anatômicos de pacientes imunocompetentes ou imunocomprometidos (antes, durante e após terapias específicas) e seus familiares ou trabalhadores hospitalares, deverão ser obtidos a fim de se estabelecer as possíveis fontes de colonização por esses microrganismos. De modo geral, os perfis de proteínas totais obtidos por SDS-PAGE associados com análise numérica computadorizada, permitem a obtenção de critérios adicionais para os estudos epidemiológicos e taxonômicos de C. albicans.

Resumo em Inglês:

The aim of the present research was to evaluate the protein polymorphism degrees among forty-eight C. albicans isolates from fourteen anatomical sites of clinical patients by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and numerical analyzes, in order to identify subspecies and their similarities in some infectious niches. Cell cultures were grown in YEPD medium, collected by centrifugation, and washed in cold saline solution. The whole-cell proteins were extracted by cell disruption using glass beads and submitted to SDS-PAGE technique. After electrophoresis, the protein bands were stained with coomassie-blue and analyzed by statistics package NTSYS-pc version 1.70 software. Similarity matrixes and dendrograms were generated by application of similarity coefficient of simple matching and UPGMA algorithm, respectively. The results obtained showed several C. albicans subtypes and their similarity degrees (80% to 100%). Such data showed that same patients may be infected by two or more C. albicans subtypes in certain anatomical sites (i.e. only in oral cavity of immunocompromised patients, blood, or tracheal secretion), or yet, two or more patients can be infected in identical anatomical sites (i.e. bronchial washing, urine, oral cavity, tracheal secretion, vaginal secretion, and healthy saliva) with a same C. albicans subtype. However, two or more patients also can show infections in corresponding sites (i.e. oral cavity of immunocompromised patients, blood, oropharyngeal secretion, oral cavity, tracheal secretion, vaginal secretion, and healthy saliva) by different C. albicans subtypes. Besides, two or more patients also can be infected with identical or different C. albicans subtypes in different anatomical sites (i.e.1. identical subtypes in vaginal secretion, tracheal secretion, and urine; abdominal secretion and spittle; drainage and oral cavity; catheter and healthy saliva - i.e.2. subtypes different in bronchial washing, oropharyngeal secretion, pulmonary secretion, oral cavity of immunocompromised patients, and blood). Complementary studies involving C. albicans sample isolated from several anatomical sites of immunocompetent or immunocompromised patients (before, during and after specifics therapies) and their families or hospital workers must be done in order to establish the sources of C. albicans colonization. The whole-cell proteins profile performed by SDS-PAGE associated with computer-assisted numerical analysis may provide preliminary criteria for taxonomic and epidemiological studies of such microorganisms.

Resumo em Português:

Realizou-se a comparação de metodologia para avaliação de pirogênios em produtos farmacêuticos. Otimizou-se o teste da hipertermia em coelhos elaborando a curva dose-resposta com o 2º Padrão Internacional de endotoxinas bacterianas, com base na qual determinou-se a concentração de 13,81 UE/mL por kg de peso corporal, necessária para produzir aumento de temperatura de 0,5ºC. Observou-se que o limite de 0,5ºC forneceu resultados comparáveis com as doses pirogênicas para o homem. Padronizou-se o teste do lisado de amebócitos do Limulus (LAL) com determinação do ponto final cromogênico e por geleificação, que foram utilizados para a avaliação de produtos farmacêuticos obtendo-se resultados concordantes. Avaliaram-se as respostas de reagentes LAL reativos e não-reativos a beta-glicanos, observando diferenças que poderiam reprovar amostras com base em resultados falso-positivos. Executou-se o teste de interferências, validou-se o procedimento e estabeleceu-se a máxima diluição válida para produtos farmacêuticos sem especificações farmacopéicas. Os resultados enfatizam a importância e as limitações dos ensaios preconizados para avaliação da pureza e controle da qualidade de produtos farmacêuticos parenterais, contribuindo para aprimorar as metodologias existentes no contexto da redução e substituição dos modelos animais.

Resumo em Inglês:

A comparison of methodologies for detection of pyrogens in pharmaceutical products was performed. The rabbit pyrogen test was optimized and the dose-response curve was obtained for the 2nd International Standard for bacterial endotoxins, establishing 13.81 EU/mL/kg as the concentration of endotoxin necessary to induce a temperature rise of 0.5ºC. The 0.5ºC cut-off was shown to give results that were more compatible with the pyrogenic doses for humans. The Limulus amoebocyte lysate test (LAL) was standardized with gel-clot and chromogenic endpoints, and used for the comparative evaluation of pharmaceutical products showing good agreement. The use of beta-glucan-reactive and non-reactive LAL reagents identified some products with false-positive results. The interference test was carried out and the specifications validated for some new products as the maximum valid dilution. The results emphasized the importance and limitations of the assays recommended for the evaluation of purity and quality control of parenteral medicinal products, improving the existing methodologies in the context of reduction and replacement in the use of animal models.

Resumo em Português:

Foram estudadas 25 amostras de Salmonella enterica sorotipo Enteritidis isoladas de diferentes fontes, em testes de hemaglutinação. Amostras bacterianas cultivadas em diferentes meios de cultura causavam hemaglutinação na presença de hemácias humanas, entretanto, não foi observada reação com hemácias de outras espécies. A expressão da atividade hemaglutinante foi melhor em ágar CFA a 37ºC. A hemaglutinação foi inibida por D-manose, D-manitol, melibiose, D-rafinose, L-ramnose e sacarose. A análise ultraestrutural não revelou a presença de estruturas filamentosas na superfície bacteriana, sugerindo que a hemaglutinina de Salmonella Enteritidis seja de natureza não fimbrial. Os dados sugerem que Salmonella Enteritidis produz uma hemaglutinina não fimbrial manose-sensível, específica para hemácias humanas, que pode ser extraída na forma solúvel.

Resumo em Inglês:

Twenty-five strains of Salmonella enterica serovar Enteritidis isolated from different sources were examined for hemagglutinating activity. Bacteria cultured in different media induced hemagglutination of human erythrocytes, but no reaction was observed with erythrocytes from other animal species. The hemagglutinating expression activity was better for cultures on CFA agar at 37ºC than other conditions examined. The hemagglutination was inhibited by D-mannose, D-mannitol, melibiose, D-raffinose, L-rhamnose and sucrose. The absence of cell-surface appendages in electron microscope examinations suggested a nonfimbrial hemagglutinin. The data suggest that Salmonella Enteritidis produces nonfimbrial mannose-sensitive hemagglutinin, specific for human erythrocytes, which could be extracted in soluble form.

Resumo em Português:

Recente atenção tem sido dada aos anticorpos naturais como componentes da imunidade natural e como parte integrante da rede idiotípica. Todavia, seu papel funcional em diferentes infecções tem, raramente, sido estudado. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença de anticorpos naturais na paracoccidioidomicose (PCM). Em adição, analisamos os anticorpos específicos anti-P. brasiliensis e sua distribuição em subclasses a fim de adquirir mais conhecimento sobre a resposta imune humoral nesta micose. Nossos achados mostram que a resposta de anticorpos naturais não é acentuada na PCM quando comparada com outras infecções por parasitas e, é restrita a poucas especificidades, sugerindo que o P. brasiliensis estimula moderadamente as células B CD5+. O anticorpo anti-actina foi a principal especificidade encontrada na PCM. Os anticorpos especificos para P. brasiliensis, nos pacientes crônicos, eram, principalmente, da subclasse IgG1.

Resumo em Inglês:

Recent attention has been focused on the natural antibodies as a component of natural immunity and as integral part of the idiotypic network. However, their functional role in different infections has rarely been studied. This work was undertaken to investigate the presence of natural antibodies in paracoccidioidomycosis (PCM). In addition, we analyzed anti-P. brasiliensis antibodies and their distribution in IgG subclasses in order to acquire better knowledge about the humoral immune response in this mycosis. Our findings show that the natural antibody response is not very much increased in PCM when compared with other parasite infections and this response is restricted to a few specificities, suggesting that P. brasiliensis moderately triggers CD5+ B cells. The anti-actin antibody was the main antibody specificity found in PCM. Specific antibodies to P. brasiliensis were mainly found in the IgG1 subclass in chronic patients of PCM.

Resumo em Português:

Staphylococcus spp. não são usualmente isolados a partir da cavidade bucal. Quando presentes, são considerados pertencentes à microbiota transitória. Indivíduos que apresentam doença periodontal representam possíveis reservatórios dessas bactérias oportunistas na cavidade bucal. O uso de antibióticos para o tratamento da doença periodontal ou outras infecções pode predispor o aumento do número de Staphylococcus spp. na boca, pois estes adquirem facilmente resistência aos antibióticos, podendo resultar em superinfecção. O objetivo deste estudo foi verificar a presença de Staphylococcus spp. na cavidade bucal e nas bolsas periodontais de pacientes com periodontite crônica; identificar as cepas isoladas; verificar a relação entre a presença de Staphylococcus spp. na cavidade bucal e presença de bolsa periodontal. Participaram deste estudo 88 pacientes, entre 25 e 60 anos de idade e apresentando periodontite crônica, com pelo menos dois sítios com profundidade de sondagem maior ou igual a 5mm. Após anamnese e exame clínico periodontal foram feitas coletas de material da bolsa periodontal com cones de papel e da cavidade bucal por meio de bochechos. Do total de pacientes 37,50% apresentaram Staphylococcus spp. na bolsa periodontal e 61,36% na cavidade bucal, sendo que 27,27% apresentaram a bactéria nos 2 sítios. S. epidermidis foi a espécie mais prevalente para bolsa periodontal (15,9%) e cavidade bucal (27,27%). Não houve diferença estatística significante quanto à presença desses microrganismos entre as faixas etárias e aumento da profundidade de sondagem. A presença de bactérias oportunistas na cavidade bucal pode representar dificuldades para a manutenção do tratamento periodontal.

Resumo em Inglês:

Staphylococcus spp are not usually isolated from the oral cavity, and when this occurs, they are considered to belong to the transitory microbiota. Individuals with periodontal disease represent possible reservoirs of these opportunistic bacteria in the oral cavity. The use of antibiotics for treatment of periodontal disease or other infections may predispose to the increase of the number of Staphylococcus spp. in the oral cavity. These microorganisms easily become resistant to antibiotics, and may result in superinfection. The purpose of this study was to evaluate the presence of Staphylococcus spp. in the oral cavity and in periodontal pockets of patients with chronic periodontitis, identify the isolates and verify the relationship between the presence of Staphylococcus spp. in the oral cavity and presence of periodontal pockets. The study included eighty-eight patients, 25-60 years of age, with chronic periodontitis, and at least two sites with probing depth > 5 mm. Individual data examination was assessed. Then, samples were colleted from the periodontal pocket with the aid of paper tips and from the oral cavity through mouth rinses. Out of the total of patients, 37.50% presented Staphylococcus spp. in the periodontal pocket and 61.36% in the oral cavity, 27.27% presented the bacteria in both sites. S. epidermidis was the most prevalent specie in the periodontal pocket (15.9%) and oral cavity (27.27%). The occurrence of higher proportions of nonresident's microorganisms in subgingival samples and oral sites may represent significant problem in causing and maintaining periodontal infections.

Resumo em Português:

A freqüência dos HLA foi analisada em 25 Judeus Ashkenazitas, não consangüíneos, residentes em São Paulo, Brasil, com dermatofitose crônica causada por T. rubrum e em 25 indivíduos sadios, pertencentes ao mesmo grupo étnico dos pacientes. Observou-se valor estatisticamente significante (p<0,05) para HLA-B14 associado a resistência à dermatofitose crônica enquanto HLA-DQB1*06 (p=0,05) possivelmente relacionado a susceptibilidade. Estes achados indicam que o desenvolvimento da dermatofitose crônica pode ser influenciado por genes localizados no cromossomo 6, na região do complexo principal de histocompatibilidade.

Resumo em Inglês:

The frequency of HLA (Human Leucocyte Antigens) was analyzed in 25 non-consanguineous Brazilian Ashkenazic Jews, resident in the city of São Paulo, Brazil, suffering from chronic dermatophytosis caused by T. rubrum, and in 25 non-infected individuals belonging to the same ethnic group. Statistically significant values (p<0.05) were observed for HLA-B14 associated with resistance to chronic dermatophytosis and HLA-DQB1*06 (p=0.05) possibly related to susceptibility. These findings suggest that genes on the chromosome 6, in the region of the major histocompatibility complex, may influence the development of chronic dermatophytosis.

Resumo em Português:

No presente estudo, foi encontrado polimorfismo no gene ipa em cinco sorotipos de EIEC, de nove estudados. Quando enzimas de restrição SalI e HindII foram utilizadas no ensaio de PCR-RFLP, amostras de EIEC apresentaram polimorfismo em ipaB e ipaD. Por outro lado, não foram observados polimorfismos nos genes ipaA e ipaC nestas cepas, quando diversas enzimas de restrição foram utilizadas. O polimorfismo presente em cepas de EIEC é sorotipo-dependente, uma vez que os padrões de restrição foram conservados entre as cepas pertencentes ao mesmo sorotipo. Quando a seqüência deduzida de aminoácidos de IpaB de S. flexneri M90T e FBC124-13 foram comparadas, mudanças foram observadas em dez aminoácidos na região amino-terminal. A seqüência deduzida de aminoácidos de IpaD de EIEC apresentou similaridade de 91% com a cepa de Shigella. Neste caso, mudanças de aminoácidos ocorreram em toda a estrutura da molécula de IpaD, exceto na região carboxi-terminal.

Resumo em Inglês:

In this study, polymorphism in ipa genes was found in five out of nine EIEC serotypes studied. When SalI and HindII were used in RFLP-PCR assays many EIEC serotypes showed polymorphism in ipaB and ipaD. On the other hand, no polymorphism was observed in ipaA and ipaC in these strains. The polymorphism present in EIEC strains is serotype-dependent, since restriction patterns were conserved amongst strains belonging to the same serotype. When IpaB deduced amino acid sequences of S. flexneri M90T and FBC124-13 were compared, ten amino acids changes could be observed mainly in the amino-terminal region. The deduced EIEC IpaD amino-acid sequence presented 91% similarity with the Shigella strain. In this case, amino acid changes were spread out through the whole structure, except in the carboxyl-terminal region.

Resumo em Português:

Alguns isolados bacterianos foram avaliados quanto à capacidade de produção de biossurfatantes a partir de melaço, soro de leite e manipueira como substratos. A produção nestes meios alternativos foi comparada com a produção em meio de cultura convencional. Dentre os meios testados, a manipueira demonstrou a maior percentagem de redução na tensão superficial atingindo valores ao redor de 42%. Dos onze isolados testados, oito foram capazes de diminuir a tensão superficial para níveis inferiores à 30mN/m utilizando manipueira como substrato. Os isolados LB 5a, LB2a, LB262, LBB e LB1a apresentaram tensão superficial em torno de 26 mN/m sendo selecionados e posteriormente identificados como pertencentes ao gênero Bacillus sp. A manipueira natural (alto teor de sólidos) e a manipueira decantada (ausência de sólidos) foram investigadas como meios de cultivo para produção de biossurfatantes pelos microrganismos selecionados. O meio de manipueira natural apresentou tensão superficial minima de 28 mN/m (isolado LB5a) enquanto que o meio de manipueira decantada apresentou tensão superficial mínima de 26 mN/m (isolado LB2a). O diâmetro de crescimento médio do isolado LB5a em ágar manipueira foi de 7.2 cm sugerindo maior capacidade de crescimento neste substrato. A manipueira demonstrou potencial como meio de cultura alternativo para a produção de biossurfatantes pelos isolados selecionados.

Resumo em Inglês:

Biosurfactant production by some bacterial isolates using molasses, milk whey and cassava flour wastewater (manipueira) as substrates was evaluated and compared with the production in conventional medium. Isolates growing in manipueira medium decreased the surface tension around 42%, the highest reduction among all the substrates tested. From the eleven isolates tested, eight were able to decrease the surface tension to levels below 30 mN/m using manipueira as substrate. The isolates LB5a, LB2a, LB262, LBB and LB1a that gave surface tension about 26 mN/m were identified as Bacillus sp. Natural manipueira (high solids content) and decanted manipueira (no solids) were investigated as culture media for biosurfactant production by selected microorganisms. Natural manipueira medium showed minimum surface tension of 28 mN/m (LB5a isolate) whereas for decanted manipueira the lowest value was 26 mN/m (isolate LB2a). Average diameter of growth on manipueira agar was 7.2 cm for isolate LB5a suggesting a high growth capacity on this substrate. Manipueira comprises a potential alternative culture medium for biosurfactant production by the selected isolates.

Resumo em Português:

O fungo termofílico Humicola grisea var. secreta xilanase extracelular quando cultivado em meios sólidos e líquidos contendo farelo de trigo e engaço de bananeira como substratos, respectivamente. À temperatura de 55ºC, xilanase do filtrado de meio de cultura de H. grisea var. thermoidea cultivado em engaço de bananeira reteve 50% de sua atividade após 28 de incubação. Uma xilanase (X2) foi isolada de culturas de estado sólido contendo farelo de trigo como fonte de carbono. X2 foi purificada por ultrafiltração, seguido por cromatografias de interação hidrofóbica e troca iônica em resinas de Phenyl-Sepharose e DEAE-Sepharose, respectivamente. A enzima apresentou peso molecular de 29 kDa, como determinado por SDS-PAGE. A enzima purificada foi mais ativa em intervalos de pH e temperatura de 4,5-6,5 and 55-60ºC, respectivamente. Além disso, X2 mostrou termoestabilidade a 60ºC com meia vida de aproximadamente 5,5 h. Os valores de Km aparente, utilizando arabinoxilanas solúveis e insolúveis, foram 10,87 and 11,20 mg/ml, respectivamente.

Resumo em Inglês:

The thermophilic fungus Humicola grisea var. thermoidea secretes extracellular xylanase when grown on solid and in liquid media containing wheat bran and banana plant residue as substrates, respectively. At 55ºC, xylanase from the culture filtrate of H. grisea var. thermoidea grown on banana stalk retained 50% of its activity after 28 h of incubation. A xylanase (X2) was isolated from solid state cultures with wheat bran as the carbon source. It was purified to apparent homogeneity by ultrafiltration followed by ion-exchange and hydrophobic interaction chromatography on DEAE-Sepharose and Phenyl-Sepharose resins, respectively. The enzyme had an apparent molecular weight of 29 kDa, as determined by SDS-PAGE. The purified enzyme was most active at pH and temperature ranges of 4.5-6.5 and 55-60ºC, respectively. In addition, X2 showed thermostability at 60ºC with a half-life of approx. 5.5 h. The apparent Km values, using soluble and insoluble arabinoxylans as substrates, were 10.87 and 11.20 mg/ml, respectively.

Resumo em Português:

A produção de protease pelo termofílico Bacillus sp cepa SMIA-2 cultivado em culturas líquidas contendo citrato trissódico alcançou o máximo em 9h, com níveis de 1,93U/mg de proteína. O microrganismo utilizou várias fontes de carbono para a produção da protease, sendo que o amido foi o melhor substrato seguido por citrato trissódico, ácido cítrico e sacarose. Entre as várias fontes de nitrogênio orgânico e inorgânico, o nitrato de amônio foi a melhor. Estudos sobre a caracterização da protease revelaram que a temperatura ótima desta enzima foi 60ºC. A enzima foi estável por 2h a 30ºC, enquanto a 40ºC and 80ºC, 14% e 84% da atividade original foram perdidas, respectivamente. O valor ótimo de pH encontrado para a enzima foi 8,0. Após a incubação da solução enzimática bruta por 24h a pH 5,5, 8,0, e 9,0 foi observado um decréscimo de em torno de 51%, 18% e 66% da sua atividade original, respectivamente. Um forte efeito inibitório foi observado na presença de K+, Hg2+, Cu2+. A presença de Hg+ resultou na perda completa da atividade da enzima na concentração de 1mM. A atividade foi estimulada pela presença do Mn2+ e Ca+2, indicando que estes íons tiveram um papel funcional na estrutura molecular da enzima.

Resumo em Inglês:

Protease production by thermophilic Bacillus sp strain SMIA-2 cultivated in liquid cultures containing trisodium citrate reached a maximum in 9h, with levels of 1.93U/mg protein. The microorganism utilized several carbon sources for the production of protease. Starch was the best substrate, followed by trisodium citrate, citric acid and sucrose. Among the various organic and inorganic nitrogen sources, ammonium nitrate was found to be the best. Studies on the protease characterization revealed that the optimum temperature of this enzyme was 60ºC. The enzyme was stable for 2h at 30ºC, while at 40ºC and 80ºC, 14% and 84% of the original activities were lost, respectively. The optimum pH of the enzyme was found to be 8.0. After incubation of crude enzyme solution for 24h at pH 5.5, 8.0 and 9.0, a decrease of about 51%, 18% and 66% of its original activity was observed respectively. A stronger inhibitory effect was observed in the presence of K+, Hg2+and Cu2+. Hg+ resulted in the complete loss of activity at 1mM concentrations. Activity was stimulated by Mn2+ and Ca+2, indicating that these ions had a functional role in the molecular structure of the enzyme.

Resumo em Português:

Modulação do potencial de membrana celular endógeno por um campo elétrico externo influencia a estrutura e função dos compartimentos da membrana, de suas proteínas e da bi-camada lipídica. Neste trabalho, os efeitos da aplicação de potencial no crescimento de Saccharomyces cerevisiae foram caracterizados por experimentos simples, mas conclusivos. O perfil temporal de crescimento celular e a divisão celular foram investigados como respostas macroscópicas ao estímulo elétrico. Experimentos controle foram conduzidos em condições idênticas, exceto pela ausência de potencial aplicado. Através de análise comparativa, verificou-se que o estímulo elétrico alterou o ciclo celular como foi possível observar através da medida da dispersão de tamanho celular de cada população, sugerindo um possível sincronismo na divisão celular. Análise do espectro de potência foi empregada para sustentar o aumento no sincronismo, e uma modelagem matemática foi conduzida para determinar mudanças na cinética de crescimento celular. Parâmetros cinéticos do modelo tipo Monod para crescimento foram determinados por regressão não-linear. A constante de afinidade (a saber, K S) apresentou uma dependência com o potencial aplicado, sugerindo mudanças no transporte através da membrana celular. Verificou-se, também, que o estresse promovido eletroquimicamente inibiu o crescimento e induziu mudanças na viabilidade celular.

Resumo em Inglês:

Modulation of cell endogenous membrane potential by an external electrical field influences the structure and function of membrane compartments, proteins and lipid bi-layer. In this work, the effects of applied potential on Saccharomyces cerevisiae growth were characterized through simple yet conclusive experiments. Cell growth time profile and cell division were investigated as macroscopic response to the electrical stimulation. Control experiments were conducted under identical conditions except for the absence of applied potential. Through comparative analysis, electrical stimulation was verified to alter cell cycle as smaller sized population was observed, suggesting that a synchrony in cell division was promoted. Power spectral analysis was employed to sustain synchrony enhancement, and mathematical modeling was conducted for determining kinetic growth changes. Monod type kinetic parameters for growth were determined by non-linear regression. The affinity constant (namely kS) presented a dependence on applied potential suggesting changes on transport across cell membrane. Electrochemically promoted stress was also verified to inhibit growth as well as to induce changes on cell viability.

Resumo em Português:

Própolis brasileira, proveniente do estado de São Paulo, foi submetida à extração usando vários solventes, resultando em extratos com diferentes composições. Estes extratos foram submetidos à Cromatografia em Camada Delgada (CCD). Análise bioautográfica das placas de CCD permitiu identificar as frações com atividade antimicrobiana, que foram então analisadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Ensaios in vitro freqüentemente utilizados para avaliar a atividade de própolis frente a bactérias Gram-positivas foram comparados para determinar qual renderia os resultados mais consistentes. A atividade bactericida destes extratos foi analisada por Diluição Seriada em Tubos e por testes de Difusão em Agar. O método de Diluição em Tubos permitiu obter os resultados mais consistentes e a Concentração Bactericida Mínima dos extratos variou entre 2,5 e 20,0 mg/mL, para as espécies de bactérias Gram-positivas testadas. Os resultados do método de Difusão em Agar foram diretamente proporcionais à hidrossolubilidade dos extratos, e não avaliaram a atividade bactericida corretamente. A atividade bactericida desta amostra resultou da combinação de vários componentes, identificados por CLAE, que foram extraídos preferencialmente usando etanol 50% como solvente.

Resumo em Inglês:

Brazilian propolis from São Paulo state was submitted to extraction using several solvents, resulting in extracts with different composition. These extracts were submitted to Thin Layer Chromatography (TLC). Bioauthographic analysis of the TLC plates identified fractions with inhibitory activity, which were then analysed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). In vitro assays, commonly used to evaluate the activity of propolis against Gram-positive bacteria, were compared to determine which rendered the most consistent results. The bactericidal activity of these extracts were analysed by Serial Dilution in Tubes and Agar Plate Diffusion. Serial Dilution in Tubes obtained the most consistent results, with the Minimal Bactericidal Concentration of the extracts ranging between 2.5 and 20.0 mg/mL, for the species of Gram-positive bacteria tested. The results of the Agar Plate Diffusion were directly proportional to the hydro-solubility of the extracts and did not evaluate their bactericidal activity correctly. The bactericidal activity of this sample of propolis was due to the combined effect of several components that were identified by HPLC and were best extracted using 50% ethanol as a solvent.

Resumo em Português:

A atividade de glicosidases durante a degradação do polissacarídeo extracelular (EPS) produzido por Anabaena spiroides foi detectada e quantificada utilizando-se MUF-substratos (MUF-monossacarídeos). O consumo total do polissacarídeo efetuou-se em duas fases, uma primeira de alta atividade enzimática que rapidamente consumiu 41% do polissacarídeo e uma segunda, mais lenta, que consumiu o polissacarídeo restante (59%). A mudança de fase coincidiu com a sucessão de uma população de bactérias cocóides por outra de bacilos. A biomassa bacteriana, quantificada por contagens de células, aumentou com a degradação do EPS. As atividades registradas através dos substratos 4-MUF-alfa-D- e 4-MUF-beta-D- glicosídeo foram mais altas quando comparadas aos demais substratos testados que foram: MUF-alfa-L-ramnopiranosídeo, MUF-beta-D-galactosídeo, MUF-alfa-D-manopiranosídeo, MUF-beta-D-fucosídeo, MUF-beta-D-manopiranosídeo, MUF-alfa-L-arabinopiranosídeo, e MUF-beta-L-fucosídeo. A fluorescência emitida a partir de cada um dos diferentes MUF-substratos foi, de modo geral, proporcional à concentração dos monossacarídeos correspondentes constituintes do polissacarídeo, um indício da susceptibilidade ao ataque enzimático microbiano do EPS produzido por A. spiroides.

Resumo em Inglês:

The activity of specific glycosidases during the degradation of the extracellular polysaccharide (EPS) produced by Anabaena spiroides was determined using MUF-substrates (MUF-monosaccharides). Polysaccharide degradation was found to occur in a two-phase process. The first consisted of high enzymatic activity that consumed 41% of the EPS at a relatively high rate, while the second consumed the remaining polysaccharide (59%) at a slower rate. A transition phase from the higher to the slower degradation rates was marked by a replacement of bacterial populations from coccoid to bacillus cells. During the degradation process, the bacterial biomass increased with the decrease of EPS, as revealed by bacterial cell counts. The enzymatic activity detected through the substrates MUF-alpha-D- and MUF-beta-D-glucoside was higher than that detected by other substrates tested. The remaining glycosides were MUF-alpha-L-rhamnopyranoside, MUF-beta-D-galactoside, MUF-alpha-D-mannopyranoside, MUF-beta-D-fucoside, MUF-beta-D-mannopyranoside, MUF-alpha-L-arabinopyranoside, and MUF-beta-L-fucoside. The fluorescence emitted by each MUF-substrate was proportional to the concentration of the corresponding monosaccharide in A. spiroides EPS. This demonstrates the susceptibility of EPS produced by A. spiroides to enzymatic attack by bacterial populations.

Resumo em Português:

Uma linhagem de levedura identificada como Geotrichum sp. JR1 foi capaz de utilizar acetonitrila, em concentrações de 0,5 a 2M, como única fonte de carbono e de nitrogênio. A geração de amônia durante o crescimento do microrganismo indica a presença de sistema enzimático capaz de degradar acetonitrila. Durante os ensaios enzimáticos, com células cultivadas em acetonitrila, foram detectados ácido acético e acetamida como produtos indicando a presença de sistema enzimático capaz de degradar acetonitrila e acetamida. Este trabalho é o primeiro a descrever a utilização de acetonitrila como única fonte de carbono e de nitrogênio por uma levedura.

Resumo em Inglês:

A yeast strain identified as Geotrichum sp. JR1 was able to use acetonitrile as the sole carbon and nitrogen source. The strain grew in 0.5 to 2M acetonitrile. Ammonia generation as enzymatic product during the strain growth indicates the presence of an acetonitrile degrading enzyme. Acetic acid and acetamide were detected during assays with the resting cells cultivated in acetonitrile, indicating the presence of nitrile and amide degrading enzymes. This paper is the first to describe the use of acetonitrile as the sole carbon and nitrogen source by a yeast.

Resumo em Português:

A capacidade de Bacillus sp. e Pseudomonas sp. solubilizar zinco foi avaliada usando óxido de zinco, sulfeto de zinco e carbonato de zinco, em ensaios em placas e em caldo. A cultura ZSB-O-1 (Bacillus sp.) apresentou maior dissolução no sulfeto de zinco, com 2,80 cm de zona de dissolução e 14,50 cm² de área no ensaio em placa e 13,60 mg kg-1 de zinco no ensaio em caldo, no 15º dia de incubação. A cultura ZSB-S-2 (Pseudomonas sp.) apresentou maior capacidade de dissolução no óxido de zinco, com 3,30 cm de zona de dissolução e 20,43 cm² de área no ensaio em placa e 16,40 mg kg-1 de zinco no ensaio em caldo no mesmo período de inoculação. A cultura ZSB-S-4 (Pseudomonas sp.) apresentou maior potencial de solubilização em carbonato de zinco, com 6,20 cm de zona de dissolução e 13,40 cm² de área no ensaio em placa e 13,40 mg kg-1 de zinco no ensaio em caldo. Assim, o potencial de solubilização variou de acordo com a cultura. A solubilização pode ser devida à produção de ácido, uma vez que o pH do caldo abaixou de 7,0-7,3 para 4,8-6,5 após 15 dias de incubação. O limite de tolerância ao zinco para as duas culturas (ZSB-O-1 and ZSB-S-2) foi mensurada, verificando-se ser 100 mg kg-1 no ensaio in vitro em caldo.

Resumo em Inglês:

Zinc solubilizing ability of Bacillus sp. and Pseudomonas sp. was assessed using zinc oxide, zinc sulphide (sphalerite) and zinc carbonate in both plate and broth assays. ZSB-O-1 (Bacillus sp.) showed highest dissolution in the zinc sulphide (Sphalerite ore), with 2.80 cm of dissolution zone and 14.50 cm² of area in the plate assay and 13.60 mg kg-1 of zinc in the broth assay on the 15th day after inoculation. The ZSB-S-2 (Pseudomonas sp.) showed more solubilizing ability in the zinc oxide, with 3.30 cm clearing zone and 20.43 cm² area in the plate assay and 16.40 mg kg-1 of zinc in the broth assay over the same inoculation period. The isolate ZSB-S-4 (Pseudomonas sp.) has highest solubilizing potential in zinc carbonate with 6.20 cm of dissolution zone and 13.40 cm² area in the plate assay and 13.40 mg kg-1 of zinc in the broth assay. Thus, the solubilization potential varies among different cultures. The solubilization might be due to production of acids by the culture, since the pH of the culture broth has been shifted form 7.0-7.3 to 4.8-6.5 after 15 days of inoculation. The zinc tolerance limit for two cultures (ZSB-O-1 and ZSB-S-2) was studied and determined to be upto 100 mg kg-1 of zinc in the in vitro broth assay.

Resumo em Português:

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade microbiológica da ostra de mangue (Crassostrea rhizophorae) originária de um criadouro natural no estuário do Rio Cocó, Fortaleza, Ceará, Brasil. Para isso, foram realizadas as estimativas do Número Mais Provável (NMP) de Coliformes Totais (CT) e de Fecais (CF) e de Enterococcus spp. Os valores encontrados para CT e CF no músculo (com líquido intervalvar) variaram de <1,8 a >1.600 e <1,8 a 920 por grama, respectivamente. O valor do NMP de Enterococcus spp. variou de <3,0 a >1.100/g. Não houve correlação entre os parâmetros físico-químicos (temperatura, salinidade e pH) da água na área do criadouro e os níveis de contaminação encontrados nas ostras. Somente houve correlação entre os valores de CT e CF. Cepas de Enterococcus spp. foram isoladas e submetidas a testes bioquímicos para identificação das espécies e, posteriormente, foram testadas para verificar a produção de substância inibitória semelhante à bacteriocina utilizando a cepa-teste Escherichia coli ATCC 25922. De um total de 121 cepas de Enterococcus spp. testadas apenas uma, E. faecalis, apresentou atividade inibitória.

Resumo em Inglês:

This study was aimed at evaluating the microbiological quality of mangrove oysters (Crassostrea rhizophorae), collected at a natural oyster bed in the estuary of Cocó river (Fortaleza, Ceará, Brazil). MPN values were used for estimating the total (TC) and fecal (FC) coliforms and Enterococcus spp. TC and FC MPN values in the whole muscle and intervalve liquid ranged from <1.8 to >1,600/g and from <1.8 to 920/g, respectively. The MPN estimates for Enterococcus spp. were between <3.0 and >1,100/g. No correlation was found between the physico-chemical parameters (temperature, salinity and pH) of the surrounding water and the bacteriological contamination levels found in the tested oysters. The only correlation found was between TC and FC values. Enterococcus spp. strains were isolated and subjected to biochemical tests for species identification. The capacity of those strains for production of a bacteriocin-like inhibitory substance was tested using the Escherichia coli strain ATCC 25922 as a testing organism. Only one, E. faecalis, out of 121 Enterococcus strains tested, presented the inhibitory activity.

Resumo em Português:

Neste estudo procedeu-se a avaliação da atividade antibacteriana e antifúngica dos extratos brutos de Alternanthera maritima (Amaranthaceae) planta in natura de duas coletas distintas e obtidos por cultura de células buscando-se averiguar a manutenção da atividade antimicrobiana dos extratos obtidos da planta in vivo e in vitro. A ação antibacteriana e antifúngica foi determinada pelo método de difusão em ágar (técnica do poço) utilizando-se trinta cepas de microrganismos indicadores (bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, leveduras e dermatófitos). Todos os extratos obtidos com solventes orgânicos avaliados apresentaram-se bioativos com halos de inibição de 6 a 20 mm. Os extratos da planta in natura das duas coletas (Restinga de Marica (RJ), verão de 1995 e 1998) inibiram o desenvolvimento de diferentes microrganismos (bactérias, leveduras e dermatófitos). Os extratos obtidos da cultura de calos desenvolvidos em duas condições de cultivo diferentes, também se mantiveram bioativos. Assim, os resultados obtidos encorajam a realização de novos estudos com esta espécie vegetal para se determinar quais as substâncias presentes nos extratos e que contribuem para a atividade biológica, como também para entender seu mecanismo de ação e avaliar sua toxicidade, visando uma possível aplicação farmacêutica.

Resumo em Inglês:

The aim of this study was to evaluate the antibacterial and antifungal activity of callus culture (two different hormonal combination culture medium) and adult plants (two collect) extracts from Alternanthera maritima (Amaranthaceae) investigating the maintenance of antimicrobial activity in vivo and in vitro. The antibacterial and antifungal activity was determined by the agar-well diffusion method against thirty strains of microorganisms including Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts and dermatophytes. All the organic crude extracts studied were bioactive. Extracts of aerial parts and roots of adult plants collected during the same period of years of 1995 and 1998 (Restinga de Maricá (RJ), collect 1 and 2) inhibited the growth of several microorganisms (bacteria, yeasts and dermatophytes) with inhibition halo between 6 and 20 mm. Plant cell callus culture extracts obtained from two culture conditions were also bioactive. Thus, the positive results suggest that the A. maritima extracts should be further studied to determine the bioactive chemical compounds as well as to understand the possible mechanisms of action and evaluate their toxicity looking toward a pharmaceutical employment.

Resumo em Português:

Um total de 285 amostras de carnes e produtos cárneos foi avaliado para detecção de culturas produtoras de bacteriocinas pelo método do "sanduíche". A partir de 174 destas amostras, 813 linhagens de bactérias lácticas com atividade inibitória sobre Staphylococcus aureus CTC 033 e/ou Listeria innocua Lin 11 foram isoladas. Quando examinadas pelo método de antagonismo simultâneo em poços, 128 destas linhagens inibiram o crescimento dos microrganismos indicadores. O espectro de atividade das linhagens isoladas foi avaliado com diversos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos. De um modo geral, S. aureus foi o microrganismo indicador mais sensível, enquanto Enterococcus faecalis e Lactobacillus plantarum foram os mais resistentes. Todos os compostos antimicrobianos produzidos pelas bactérias lácticas testadas foram completa ou parcialmente inativados por enzimas proteolíticas, o que indica sua natureza protéica. A atividade antimicrobiana das bacteriocinas produzidas pelas linhagens de bactérias lácticas isoladas neste trabalho pode atuar como uma barreira potencial para inibir o crescimento de bactérias deterioradoras e patogênicas de origem alimentar.

Resumo em Inglês:

A total of 285 samples of meat and meat products were evaluated for the presence of bacteriocin-producing lactic acid bacteria by the "sandwich" test. From 174 of these samples, 813 strains of lactic acid bacteria were isolated. They were able to inhibit the growth of Staphylococcus aureus CTC 33 and/or Listeria innocua Lin 11. When evaluated by the well-diffusion assay, 128 of these strains inhibited the growth of the indicator strains. The inhibitory spectra of activity of the isolates were evaluated against a range of Gram-positive and Gram-negative test organisms. S. aureus was the most sensitive indicator tested, whereas Enterococcus faecalis and Lactobacillus plantarum were the most resistant ones. All the compounds produced by the lactic acid bacteria were fully or partially inactivated by some of the proteolytic enzymes, which indicates their proteinaceous nature. The antimicrobial activity of the bacteriocins produced by the lactic acid bacteria isolated in this work could act as a potential barrier to inhibit the growth of spoilage bacteria and foodborne pathogens.

Resumo em Português:

H. pylori é o agente da maioria dos casos de gastrites e úlceras pépticas. Entretanto, sua forma de transmissão não foi completamente elucidada. Para avaliar a sobrevivência de H. pylori (uma cepa de referência e uma clínica), artificialmente inoculado em amostras de cenoura e alface, porções de 25g das amostras receberam aproximadamente 10(6) UFC/g de H. pylori, e foram embaladas em atmosfera normal e/ou modificada (3% oxigênio, 10% dióxido de carbono, e 87% nitrogênio). Em seguida, foram armazenadas a 8ºC, com enumeração diária da população de H. pylori em ágar Columbia sangue (CBA) e/ou Helicobacter pylori Special Peptone Agar (HPSPA). Quando usamos CBA com antibióticos, o isolado clínico de H. pylori (HP1) foi detectado por até 72 horas nas amostras de alface e cenoura sanitizadas. Em amostras de cenoura esterilizadas, H. pylori HP1 permaneceu viável por até 96 horas. CBA sem antibióticos permitiu a recuperação de H. pylori ATCC 43629, a partir de amostras de cenoura embaladas em ambas as atmosferas, por até 120 horas. Nossos resultados reforçam que a transmissão de H. pylori, através do consumo de água e alimento contaminados, ainda não pode ser descartado.

Resumo em Inglês:

Helicobacter pylori is known, worldwide, as the causative agent of gastric diseases. However, its transmission route has not been completely understood. To evaluate the survival of H. pylori (a clinical and a reference strain) artificially inoculated on lettuce and carrot samples, portions of 25 g were inoculated with approximately 10(6) CFU/g of H. pylori and packed under normal and/or modified atmosphere (3% oxygen, 10% carbon dioxide, and 87% nitrogen). The inoculated food samples were stored at 8ºC, with daily enumeration of H. pylori populations on Columbia blood agar (CBA) and/ or Helicobacter pylori Special Peptone Agar (HPSPA). When CBA with antibiotics was used, the clinical isolate H. pylori HP1 was detected for up to 72 h in sanitized lettuce and carrot. In sterilized carrot samples, H. pylori HP1 remained viable for up to 96 h. The CBA without antibiotics allowed the recovery of H. pylori ATCC 43629, from carrot samples stored in both atmospheres tested, for up to 120 hours. Our results reinforce that foodborne transmission of H. pylori cannot be disregarded yet.

Resumo em Português:

Este trabalho avaliou a estabilidade de Bifidobacterium lactis (Bb-12) e de Lactobacillus acidophilus (La-05) nas formas livre e imobilizada em alginato de cálcio, em leite e leite acidificado (pHs 5.0, 4.4 e 3.8), e a estabilidade de B. lactis imobilizado em iogurte (fermentado até pH 4.2), durante 28 dias de estocagem refrigerada. Também foi estudada a eficiência de dois meios de cultura (ágar MRS modificado e Reinforced Clostridial Agar, acrescido de Prussian Blue) para enumerar B. lactis em iogurte. Ágar Lee foi usado para enumeração de Streptococcus thermophilus e Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus quando B. lactis era enumerado no meio MRS. Ambos os microrganismos, nas formas livre e imobilizada, apresentaram uma taxa de sobrevivência adequada nos leites acidificados, uma vez que houve redução de apenas um ciclo log, após 21 dias de estocagem refrigerada. O número de células viáveis de B. lactis imobilizado mostrou um declínio gradual durante o período de armazenamento do iogurte, passando de 10(8) ufc/ml até não ter mais contagem na diluição 10-1. Quando as culturas não estavam em equilíbrio, o meio MRS modificado foi mais eficiente para a contagem de B. lactis em iogurte. Em vista destes resultados pode-se concluir que ambos os microrganismos podem ser incorporados em leite e leite acidificados, haja visto que a redução na população foi pequena durante o período de armazenagem estudado. A presença da cultura tradicional de iogurte parece ter afetado negativamente a sobrevivência de B. lactis e a imobilização não proveu proteção às células, em nenhum dos tratamentos estudados.

Resumo em Inglês:

This study evaluated the stability of Bifidobacterium lactis (Bb-12) and of Lactobacillus acidophilus (La-05) both free and immobilized in calcium alginate, in milk and in acidified milk (pH 5.0, 4.4 and 3.8). The stability of immobilized B. lactis in yoghurt (fermented to pH 4.2), during 28 days of refrigerated storage was also evaluated. The efficiency of two culture media (modified MRS agar and Reinforced Clostridial Agar plus Prussian Blue) for counting of B. lactis in yoghurt was determined. Lee's agar was used to count Streptococcus thermophilus and Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus when B. lactis were counted in the MRS medium. B. lactis and L. acidophilus in both free and immobilized forms presented satisfactory rates of survival in milk and acidified milk because the average reduction of the population was only one log cycle after 21 days of storage. The number of viable cells of immobilized B. lactis in yoghurt presented a gradual decline throughout the storage period, passing from 10(8) cfu/ml to no count after 28 days of storage. When the cultures were not in equilibrium just the selective medium was efficient in counting B. lactis in yoghurt. The results showed that both microorganisms can be added to milk and acidified milk, because their population was only slightly affected during storage. The presence of traditional culture of yoghurt seems to be harmful for survival of immobilized B. lactis and the immobilization in calcium alginate failed as an effective barrier to protect the cells in all analysed treatments.

Resumo em Português:

Dois métodos de purificação de plantaricin ST31, uma bacteriocina produzida por Lactobacillus plantarum ST31 foram usados neste estudo - o método de precipitação pelo sulfato de amônia usando cartucho Sep-pack C18 para a filtração e HPLC de fase reversa em coluna de C18 Nucleosil, e o método de purificação direta por troca catiônica SP Sepharose "Fast Flow column Amersham" (Pharmacia Biotech). A pureza dos produtos obtidos pelos dois protocolos foi examinada através da determinação dos pesos moleculares, composição e seqüência dos aminoácidos. A comparação destes resultados revelou que, em termos da pureza dos produtos, não havia diferenças entre os dois métodos de purificação podendo-se, portanto, utilizar qualquer um dos protocolos de purificação testados. No entanto, o rendimento da purificação pelo método da troca catiônica foi de 5.9% enquanto o do método HPLC foi de 0.8%.

Resumo em Inglês:

Two methods of purification of the plantaricin ST31, a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum ST31 are used in this study - the method of ammonium sulfate precipitation, Sep-pack C18 cartridge and reverse-phase HPLC chromatography on C18 Nucleosil column, and the method of direct purification by cation exchange SP Sepharose Fast Flow column Amersham (Pharmacia Biotech). The purity of the products from the two experimental protocols are examined for their molecular weight, aminoacid composition and sequence. Comparison of results show that the plantaricins purified with the two methods are identical. Both methods may be used to purify plantaricin ST31. Comparison of the yield in the purification protocols is 0.8% in the HPLC experimental protocol and 5.9% in the cation-exchange chromatography method.

Resumo em Português:

Cães provenientes de 12 canis comerciais do estado de São Paulo foram submetidos à investigação clínica e a provas laboratoriais para o diagnóstico de infecção por Brucella spp. A colheita de amostras foi realizada entre os meses de abril de 2000 e fevereiro de 2002 e os exames laboratoriais empregados foram a imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a hemocultura. De 171 cães examinados, 39 (22,80 %) apresentaram pelo menos um sinal clínico compatível com brucelose, 58 (33,91%) foram positivos pela IDGA e 24 (14,03%) pela hemocultura. Bactérias Gram negativas com perfil bioquímico compatível com o gênero Brucella foram isoladas das 24 amostras de sangue positivas pelo isolamento bacteriano. De acordo com o coeficiente Kappa e o teste de McNemar, não foi observada concordância entre os resultados obtidos na hemocultura e IDGA (k=0,360 com intervalo de confiança de 95%; X²=25,93, p=0,000), entre resultados da IDGA e do exame clínico (k=0,248 com intervalo de confiança de 95%; X²=6,11, p=0,013) e entre os resultados da hemocultura e do exame clínico (k=0,442 com intervalo de confiança de 95%; X²=6,76, p=0,009). A associação dos resultados obtidos pelos exames clínicos e laboratoriais com o sexo dos animais não foi estatisticamente significante (Qui-Quadrado), sendo observado X²=1,35 e p=0,2447 para o exame clínico, X²=1,58 e p=0,2086 para IDGA e X²=1,48 e p=0,2230 para hemocultura. Dos 12 canis examinados, sete apresentaram pelo menos um animal positivo pela hemocultura e nove pelo menos um animal positivo pela imunodifusão. A associação de dados epidemiológicos com testes laboratoriais diretos e indiretos deve ser enfatizada para o diagnóstico definitivo da brucelose canina. Resultados positivos pela imunodifusão em gel de ágar podem ser conseqüência de reações inespecíficas e devem ser confirmados pela hemocultura. Os resultados negativos obtidos pela imunodifusão também devem ser confirmados utilizando-se métodos diretos de diagnósticos ou repetindo-se o teste sorológico com 30 dias de intervalo, devido à baixa sensibilidade desse teste diagnóstico.

Resumo em Inglês:

Dogs from 12 commercial breeding kennels were submitted to clinical investigation and laboratorial tests for diagnosis of Brucella spp. infection. The sampling was carried out between April 2000 and February 2002 and the laboratorial tests employed were agar gel immunediffusion test (AGID) and blood culture. From 171 dogs examinated, 39 (22.8%) showed at least one clinical sign compatible with brucellosis, 58 (33.91%) were AGID positive and 24 (14.03%) were positive by blood culture. Gram negative bacterial cells with a biochemical pattern compatible with that of bacteria belonging to genus Brucella were isolated from blood specimens of 24 animals. According to Kappa index and McNemar test, the association between AGID and blood culture (k=0.360 with 95% of confidence interval; X²=25.93, p=0.000), between AGID and clinical test (k=0.248 with 95% of confidence interval; X²=6.11, p=0.013), and between blood culture and clinical examination (k=0.442 with 95% of confidence interval; X²=6.76, p=0.009) were not statistically significant. Qui-Square test indicated no association of sex and the results of clinical examination (X²=1.35 and p=0.2447), AGID (X²=1.58 and p=0.2086) or bacterial isolation (X²=1.48 and p=0.2230). Within 12 kennels, seven had at least one dog positive by blood culture and nine had at least one animal positive by AGID. The association of epidemiological data with direct and indirect methods of diagnosis is necessary to perform a definitive diagnosis of Brucella infection in dogs, as positive results by AGID can be consequence of non-specific reactions and must be confirmed by blood culture. Negative results by AGID must also be confirmed using direct methods of diagnosis or repeating the serologic test after 30 days, because of the low sensitivity of this test.

Resumo em Português:

O Vírus Sincicial Respiratório Humano (HRSV) foi isolado e caracterizado pela primeira vez em 1957 e é considerado como o patógeno viral mais freqüente do trato respiratório de bebês e crianças. Apesar de muitos anos de pesquisa, não há ainda um tratamento específico ou uma vacina licenciada. Seu genoma é composto por uma fita simples de RNA polaridade negativa e o vírion consiste em um nucleocapsídeo empacotado por um envelope lipídico. O envelope contém projeções, chamadas espículas, constituídas de homoligômeros de uma das 3 glicoproteínas de membrana: a proteína de ligação G ("attachment"), a proteína de fusão F ("fusion") e a proteína SH ("small hydrofobic"). O objetivo deste trabalho foi construir dois adenovirus recombinantes defectivos em replicação expressando separadamente os genes F e G do HRSV. Este sistema foi escolhido porque os vetores adenovirais possuem a capacidade de inserir genes em uma grande variedade de linhagens celulares in vitro e in vivo. Para obtenção destes vetores adenovirais, um RT-PCR de RNA extraído do protótipo A2 de HRSV foi feito e os genes F e G clonados em vetores pAdeno-X. pAdeno-F e pAdeno-G foram transfectados em células HEK-293 para a produção do vírus recombinante, que expressaram corretamente essas duas proteínas constituem-se ferramentas para imunização e estudos funcionais.

Resumo em Inglês:

Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) was first characterized in 1957 and has since been recognized as the most common viral cause of severe respiratory tract infection in young infants worldwide. Despite many years of research there is still no effective treatment or any immediate prospect of a vaccine. The HRSV genome is composed of single stranded negative sense RNA and the virion consists of a nucleocapsid packaged within a lipid envelope. The envelope contains spike-like projections, each being a homo-oligomer of one of three transmembrane viral envelope proteins: the attachment protein G, the fusion protein F involved in viral penetration and the small hydrofobic protein SH. The aim of this work was to construct two recombinant replication-defective adenoviruses carrying separately F and G genes from HRSV. This system was chosen because adenovirus delivers genes into target cells with high efficiency in a variety of cell lines and can be used in vitro and in vivo. In order to obtain the recombinant viruses, we did RT-PCR of RNA extracted from the HRSV A2 strain, the genes F and G were cloned in to pAdeno-X vectors. pAdeno-F and pAdeno-G were transfected in HEK-293 cells for the production of recombinant viruses, that expressed efficiently these two proteins and provide us the means for doing functional assays and immunization tests.