Sementes de Cratylia floribunda foram moídas e o seu extrato salino solúvel foi fracionado para obter-se as frações protéicas albumina, globulina, prolamina, glutelina ácida e glutelina básica. Estas frações protéicas foram examinadas quanto a presença de algum receptor endógeno para a lectina da semente através de eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de SDS, western blot, cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose 4B contendo a lectina de Cratylia floribunda (CFL) imobilizada e análise cinética em tempo real baseada em ressonância plasmônica de superfície. A fração prolamina foi a mais rica em proteínas, embora pobre em atividade hemaglutinante. Glutelina básica foi a fração menos interessante quanto ao teor protéico e atividade hemaglutinante, embora tenha considerável teor de carboidratos. A lectina estava presente em todas as frações protéicas de acordo com os testes de atividade hemaglutinante, porém a fração de glutelinas básicas quase não apresentou atividade. Exceto as prolaminas, bandas protéicas foram detectadas em todas as outras frações protéicas por SDS-PAGE. A técnica de western blot usando Con-A conjugada a digoxigenina revelou uma única banda nas frações albumina, globulina, prolamina, glutelinas ácidas e básicas, que interagiu especificamente com a ConA. Esta banda apresentou exatamente a mesma localização nestas frações e pareceu mais evidente nas globulinas. Cromatografia de afinidade das frações protéicas sobre a coluna de Sepharose 4B-CFL produziu um pico que foi eluído da coluna apenas após a adição de tampão glicina ou solução de um açúcar inibidor da lectina (alfa-D-manose). Estes resultados foram completamente confirmados através dos estudos de interação em tempo real das mesmas frações com a lectina CFL imobilizada, também sugerindo a presença de um receptor endógeno nas frações albumina, globulina e glutelinas básicas. Como um todo, os resultados sugerem que a lectina de sementes de Cratylia floribunda reconhece um receptor específico e que esta interação deveria ser mediada pelo sítio de interação a carboidratos.
interação; proteína-carboidrato; ressonância plasmônica de superfície; Western blot
