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Identificação e quantificação de genes diferencialmente expressos associados ao declínio dos citros (Citrus spp.)

O Brasil é o maior produtor de citros do mundo, sendo responsável por mais de 20% de sua produção. No entanto, a produção ainda é baixa, em decorrência de problemas fitossanitários, como o Declínio do Citros que é uma anomalia cuja causa ainda não foi determinada e, consequentemente, não existem medidas de controle para minimizar as perdas na produção. O uso de variedades resistentes é considerado como a medida de controle mais adequada. Contudo, pouco se conhece sobre os genes envolvidos na resposta de defesa das plantas a essa anomalia. Considerando que muitas alterações fisiológicas associadas com respostas a estresses em plantas são controladas em nível transcripcional, neste estudo objetivou-se a identificação e caracterização dos produtos de expressão gênica diferencialmente expressos na resposta ao Declínio dos Citros. Por meio da técnica de hibridação subtrativa supressiva, bibliotecas de cDNAs expressos foram construídas utilizando mRNAs isolados de raízes de limoeiro "Cravo" (Citrus limonia L. Osbeck) sob laranja "Pera" (Citrus sinensis L. Osbeck) de plantas sadias e doentes. Cento e vinte e nove clones foram obtidos por subtração e suas sequências foram comparadas em bancos de dados. Trinta e quatro delas relacionaram-se a proteínas associadas a processos de estresses, enquanto as outras foram similares a sequências de funções desconhecidas ou não apresentaram similaridade com sequências depositadas nos bancos de dados. Três genes foram selecionados e suas expressões foram estudadas por RT- qPCR em tempo real. Plantas com Declínio dos Citros apresentaram um aumento no nível de expressão em dois desses genes, sugerindo que estes podem estar diretamente envolvidos com essa anomalia.

Expressão gênica diferencial; hibridação subtrativa; RT-qPCR


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