RESUMO
O Straw Test é um ensaio desenvolvido para avaliar a resistência do feijoeiro ao mofo branco, no qual as hastes da planta são inoculados e os sintomas da doença são monitorados. É plausível admitir que a investigação da expressão gênica em tecidos infectados por patógenos possa ser estrategicamente interessante. No entanto, obter um RNA de qualidade é um requisito básico para essa finalidade. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar ajustes em protocolos de kits comerciais na expectativa de melhorar a qualidade do RNA obtido a partir de hastes de feijão. Para tanto, plantas de duas linhagenslinees foram inoculadas e as hastes infectadas pelo patógeno foram coletadas após 72 horas. Para extração de RNA, dois reagentes comerciais foram utilizados inicialmente seguindo as recomendações do fabricante e seguindo as adaptações desses protocolos. Em especial, as modificações propostas referem-se aos volumes de sobrenadante recuperados nos passos de purificação, etapa adicional de purificação por clorofórmio e maior tempo para precipitação dos ácidos nucleicos. O RNA obtido foi analisado por espectrofotômetro, eletroforese e bioanalyzer, posteriormente convertido em cDNA e, por fim, submetido à PCR. A partir dos dados obtidos, observou-se que as adaptações feitas nos protocolos contribuíram para resultados melhores e que quando os valores indicativos de qualidade do RNA são garantidos, as reações subsequentes são mais puras, precisas e representativas.
Termos para indexação:
Phaseolus vulgaris L.; isolamento de RNA; mofo branco; interação planta-patógeno.
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