Caracterização molecular dos genes de virulência cctA, nanA e fliC em Clostridium chauvoei isolados no Rio Grande do Sul e São Paulo, Brasil

Ziech, Rosangela Estel; Farias, Luana D’Avila; Ardisson-Araújo, Daniel Mendes Pereira; Camargo, Gregório Miguel Ferreira de; Frey, Joachim; Vargas, Agueda Castagna de

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MICROBIOLOGY • Cienc. Rural 49 (5) • 2019 • https://doi.org/10.1590/0103-8478cr20181006 copiar

Caracterização molecular dos genes de virulência cctA, nanA e fliC em Clostridium chauvoei isolados no Rio Grande do Sul e São Paulo, Brasil

Autoria SCIMAGO INSTITUTIONS RANKINGS

RESUMO:

Toxina A de Clostridium chauvoei (CctA), neuraminidase (NanA) e flagelina (FliC) são proteínas que contribuem para a patogenicidade de Clostridium chauvoei, o agente causador do carbúnculo sintomático em bovinos. O objetivo deste estudo foi analisar a variabilidade genética dos genes cctA, nanA, e fliC em C. chauvoei isolados em diferentes períodos no Rio Grande do Sul e São Paulo. A presença destes genes foi verificada pela amplificação dos produtos da PCR e sequenciamento parcial dos genes de 17 cepas. Os alinhamentos da amplificação dos produtos da PCR combinados com a análise de bioinformática foram utilizados na tentativa de avaliar a variabilidade dos genes entre os isolados de C. chauvoei. A similaridade do sequenciamento parcial dos genes cctA e nanA foi 100%. O sequenciamento do fliC revelou três alelos paralogos diferentes de flagelina e duas cepas mostraram polimorfismos, causando alterações na sequência de aminoácidos. As cepas de C. chauvoei isoladas no Brasil mostraram-se altamente conservadas em relação aos fatores de virulência avaliados neste estudo.

Palavras-chave:
carbúnculo sintomático; Clostridium chauvoei toxina A; neuraminidase; flagelina

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[1] E-mail: reziech@gmail.com. ^*Corresponding author.

	Strain designation/Year	City (geographical coordinates)	State
1	2655/2003	Araçatuba (21º12’S/ 50º25’W)	SP
2	2828/2004^*	Luiziânia (21º40’S/ 50º19’W)	SP
3	2974/2005^*	Piracicaba (22º43’S/ 47º38’W)	SP
4	NF	Pelotas (31º46’S/ 51º20’W)	RS
5	SBP 07/2009^*	São Martinho da Serra (29º32’S/ 53º51’W)	RS
6	SB 52/2011^*	São Pedro do Sul (29º37’S/ 54º10’W)	RS
7	SB 65/2011	Santa Maria (29º41’S/ 53º48’W)	RS
8	SB 97/2011^*	Jaguari (29º29’S/ 54º41’W)	RS
9	SB 105/2011	Jaguari (29º29’S/ 54º41’W)	RS
10	3270/2002^*	Canguçu (31º23’S/ 52º40’W)	RS
11	SB 87/2013 286^*	Toropi (29º28’S/ 54º13’W)	RS
12	SB 87/2013 285	Toropi (29º28’S/ 54º13’W)	RS
13	SB 131/2013	São Vicente do Sul (29º41’S/54º40’W)	RS
14	SB 46/2014	Jaguari (29º29’S/ 54º41’W)	RS
15	SBP 17/2015	Jaguari (29º29’S/ 54º41’W)	RS
16	SBP 43/2015^*	Jaguari (29º29’S/ 54º41’W)	RS
17	SBP 59/2016	Ijuí (28º23’S/ 53º54’W)	RS

Primer	Sequence 5’ ( 3’	Bp	Temperature	Reference
cctA-F cctA-R	TGCTTGCTTTAGCAACAACAACT GGATGCGTCAACAATTTCTCA	1120	61 ºC	JQ728486^* Strain JF3703/1956
nanA-F nanA-R	TCTTTGGCATACACCGTGGG CATCCCAAGTTACCCCACCA	1100	62 ºC	FM213082^* Strain JF4135/2004
fliC-F fliC-R	AGCTAACGATACAAACGTAG GCTGAATTTATAGTCTTTATGC	708	58 ºC	Adapted from (USHARANI et al., 2015USHARANI, J. et al. Development of a recombinant flagellin based ELISA for the detection of Clostridium chauvoei. Anaerobe, v.33, p.48-54, 2015. Available from: <Available from: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1075996415000220 >. Accessed: Mar. 20, 2018. doi: 10.1016/j.anaerobe.2015.02.001. http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/... )