Efeito de thidiazuron na indução e manutenção de calos de erva-baleeira (Cordia verbenacea L.)

Effects of thidiazuron on callus induction and maintenance of Cordia verbenacea L

Resumos

O trabalho teve como objetivo avaliar a influência do Thidiazuron (TDZ) na formação e manutenção de calos de Cordia verbenacea. Segmentos caulinares com 3 a 4cm de comprimento provenientes de mudas cultivadas em casa de vegetação foram desinfestados em solução contendo hipoclorito de sódio comercial a 30% e duas gotas de detergente por 10 minutos, sendo 5 minutos em agitação. Posteriormente, foram excisados e inoculados com 5mm de tamanho em meio sólido a 0,6% de Murashige & Skoog (MURASHIGE & SKOOG, 1962) - MS, complementado com 0,22; 0,68: 2,04 e 6,l3uM de TDZ. A formação de calos ocorreu em todos os tratamentos com 10 a 15 dias de cultivo Os tratamentos que apresentaram o explante com a maior área coberta com calos, em média 75%, foram 2,04 e 6,13miM de TDZ. Somente nesses tratamentos os calos aumentaram de volume e mantiveram a coloração inicial quando transferidos para o meio fresco de cultura. Os tratamentos com menores concentrações de TDZ apresentaram explantes com 50% da área coberta com calos e quando transferidos para o meio fresco de cultura ocorreu a paralisação do crescimento com a posterior morte dos calos.

planta medicinal; Cordia; thidiazuron

The influence of thidiazuron on calius formation and maintenance of Corola verbenacea was evaluated. Stem segments with 3 to 4cm length were excisedfrom greenhouse plants and surface sterilized with 30% commercial sodium hypochiorite for 10 minutes. Explants were inoculated with 5mm on Murashige and Skoog (MVRASHIGE & SKOOG, 1962) - MSsolid médium (0.6%) suppiemented with 0.22, 0.68, 2.04 and 6.13muM TDZ. Calius induction was observed 10 to 15 days after incubation. The media contaming, 2.04 and 6.13uM TDZ induced 75% expiam with calius. The calius when transferred to fresh culture médium exhibited active growth. The treatments containing lower concentration induced 50% expiam with caltus that when transferred to fresh culture médium, showed no development.

medicinal piam; Cordia; thidiazuron

EFEITO DE THIDIAZURON NA INDUÇÃO E MANUTENÇÃO DE CALOS DE ERVA-BALEEIRA (Cordia verbenacea L.)

EFFECTS OF THIDIAZURON ON CALLUS INDUCTION AND MAINTENANCE OF Cordia verbenacea L

Osmar Alves Lameira¹ José Eduardo Brasil Pereira Pinto² Maria das Graças Cardoso³ Manuel Losada Gavilanes⁴

RESUMO

O trabalho teve como objetivo avaliar a influência do Thidiazuron (TDZ) na formação e manutenção de calos de Cordia verbenacea. Segmentos caulinares com 3 a 4cm de comprimento provenientes de mudas cultivadas em casa de vegetação foram desinfestados em solução contendo hipoclorito de sódio comercial a 30% e duas gotas de detergente por 10 minutos, sendo 5 minutos em agitação. Posteriormente, foram excisados e inoculados com 5mm de tamanho em meio sólido a 0,6% de Murashige & Skoog (MURASHIGE & SKOOG, 1962) - MS, complementado com 0,22; 0,68: 2,04 e 6,l3uM de TDZ. A formação de calos ocorreu em todos os tratamentos com 10 a 15 dias de cultivo Os tratamentos que apresentaram o explante com a maior área coberta com calos, em média 75%, foram 2,04 e 6,13mM de TDZ. Somente nesses tratamentos os calos aumentaram de volume e mantiveram a coloração inicial quando transferidos para o meio fresco de cultura. Os tratamentos com menores concentrações de TDZ apresentaram explantes com 50% da área coberta com calos e quando transferidos para o meio fresco de cultura ocorreu a paralisação do crescimento com a posterior morte dos calos.

Palavras-chave: planta medicinal, Cordia, thidiazuron.

SUMMARY

The influence of thidiazuron on calius formation and maintenance of Corola verbenacea was evaluated. Stem segments with 3 to 4cm length were excisedfrom greenhouse plants and surface sterilized with 30% commercial sodium hypochiorite for 10 minutes. Explants were inoculated with 5mm on Murashige and Skoog (MVRASHIGE & SKOOG, 1962) - MSsolid médium (0.6%) suppiemented with 0.22, 0.68, 2.04 and 6.13mM TDZ. Calius induction was observed 10 to 15 days after incubation. The media contaming, 2.04 and 6.13uM TDZ induced 75% expiam with calius. The calius when transferred to fresh culture médium exhibited active growth. The treatments containing lower concentration induced 50% expiam with caltus that when transferred to fresh culture médium, showed no development.

Key words: medicinal piam; Cordia; thidiazuron.

INTRODUÇÃO

Cordia verbenacea também conhecida como erva-baleeira é uma planta medicinal usada como antiinflamatório e analgésico pela ação terapêutica do seu princípio ativo artemetina, sendo indicada para a artrite, reumatismo e problemas de coluna, quando administrada internamente na forma de chá (SILVA JÚNIOR et al., 1995).

O Thidiazuron (TDZ) foi desenvolvido originalmente pela empresa Schering AG (Berlim, Alemanha) para ser utilizado como desfolhante do algodoeiro (ARNDT et al., 1976) tendo demonstradoefeitos semelhantes aos das citocininas quando aplicado em concentrações muito reduzidas.

A atividade de citocinina do TDZ foi detectada em bioensaios de calos de Phaseolus lunatus L. cv. Kingston, onde ele foi mais ativo que a zeatina. É um composto do grupo das feniluréias e não apresenta o anel purina comum às citocininas tipo adenina, tais como, benzilaminopurina, cinetina ou zeatina, podendo ser a mais potente das difenil uréias que já foram avaliadas para uso em cultura de tecidos vegetais (MOK et al., 1982). Estudos com o TDZ mostram que este é mais ativo biologicamente em baixas concentrações que outras citocininas sintéticas como cinetina e benzilaminopurina, é mais resistente às oxidases, além de ser mais estável (MOK et al., 1987).

O crescimento de calos é desejável para induzir variação somaclonal e estudos fisiológicos, principalmente, quando se deseja relacionar a presença de produtos secundários com o crescimento celular. O TDZ é uma potente citocinina para estimular a formação de calos em explantes lenhosos, especialmente, quando usado em concentrações igual ou maior que l,0mM (HUETTEMAN & PREECE, 1993).

O objetivo do trabalho foi avaliar a influência do TDZ na formação e manutenção de calos visando o estabelecimento da curva de crescimento celular para posterior correlação com o princípio ativo.

MATERIAIS E MÉTODOS

Como fonte de explantes foram usadas mudas de erva-baleeira cultivadas em casa de vegetação. Segmentos caulinares com 3-4cm de comprimento foram lavados em água corrente, em seguida desinfestados em solução contendo hipoclorito de sódio comercial a 30% e duas gotas de detergente por l00ml de solução durante 10 minutos, sendo 5 minutos em agitação. Posteriormente, em câmara de fluxo laminar, foram lavados quatro vezes em água destilada autoclavada. Em seguida foram excisados e inoculados com 5mm de tamanho em meio sólido a 0,6% de Murashige & Skoog (MURASHIGE & SKOOG, 1962)-MS, complementado com 0,22; 0,68; 2,04 e 6,13mM de TDZ. O fotoperíodo foi de 16 horas luz sob 1000 lux. Cada tratamento continha 20 explantes.

O percentual de indução de calos foi realizada no início da formação dos calos sobre todos os explantes cultivados. Na avaliação da área dos explantes coberta com calos, três avaliadores atribuíram notas de l, 2, 3 e 4 para os explantes que apresentavam, respectivamente, 25, 50, 75 e 100% da área coberta com calos, 30 dias após o cultivo inicial. Em seguida foi realizado o peso fresco dos calos. O percentual de manutenção dos calos foi realizado 30 dias após serem transferidos para o meio fresco de cultivo. O delineamento estatístico usado foi o inteiramente casualizado e os tratamentos foram comparados pelo Teste de Duncan ao nível de 1% de probabilidade.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Na tabela l são apresentados os dados percentuais referentes a indução, manutenção e peso fresco dos calos. A formação de calos ocorreu em todos os tratamentos com 10 a 15 dias de cultivo e as colorações predominantes foram verde e verde cinza As maiores concentrações foram as mais eficientes, onde todos os explantes formaram calos, apresentaram a maior área coberta com calos e os maiores pesos e quando transferidos para o meio fresco de cultivo continuaram crescendo.

Os tratamentos com as menores concentrações de TDZ foram menos eficientes, apresentaram explantes com 50% da área coberta com calos (Figura l) e quando transferidos para o meio fresco nas mesmas concentrações ocorreu a paralização do crescimento com a posterior morte dos calos (Tabela l). Não foi observada a proliferação de brotos neste trabalho.

Os tratamentos que apresentaram o explante com a maior área coberta com calos, em média 75%, foram 2,04 e 6,13 mM de TDZ (Figura l). Somente nesses tratamentos os calos mostraram serem friáveis, aumentaram de volume e mantiveram a coloração inicial quando transferidos para o meio fresco de cultura. A inabilidade dos calos é muito importante para o início da suspensão celular.

Apesar do TDZ ter um efeito maior na proliferação de brotações, conforme os resultados obtidos por BARNA & WAKHLU (1995) na micropropagação de roseira, PREECE et al. (1991) trabalhando com propágulos de silver maple (Acer saccharinum L.) verificaram que TDZ nas concentrações 0,l; 0,5 e l,0mM, apresentaram efeito inibitório no crescimento de brotos axilares, mostrando, entretanto, efeito crescente na formação de calos com o aumento da concentração.

RAMANA et al. (1995) relatam a inibição de brotos de batata doce em cinco dos sete genótipos testados na presença de 0,9mM de TDZ porém, o desenvolvimento de calos foi observado. Nos demais genótipos embora tenha ocorrido a regeneração de brotos, uma pequena formação de calos em tomo da base do explante pode ser observada.

Segundo HUETTEMAN & PREECE (1993) o aumento na concentração de TDZ tende a estimular a formação de calos à custa do crescimento de brotos axilares, tal como ocorreu neste trabalho com a erva-baleeira. Fato semelhante foi evidenciado por SATO (1994) estudando gérbera de vaso, o qual observou que a partir de 2,3 mM de DZ já se iniciavao processo de indução de calos com a inibição da regeneração de brotos e folhas.

Portanto, fica evidenciado que a formação de calos induzida por altas concentrações de TDZ, certamente, inibirá a proliferação de brotos axilares, consequentemente, induzindo à variação somaclonal (HUETTEMAN & PREECE, 1993).

² Engenheiro Agrônomo, Professor Titular, Departamento de Agricultura, UFLA, Caixa Postal 37, 37200-000, Lavras – MG. Autor para

correspondência.

³ Professora, Doutora, Departamento de Química, UFLA.

⁴ Professor Titular, Departamento de Biologia, UFLA.

Recebido para publicação em 11.07.96. Aprovado em 25.09.96

• ARNDT, F.R., RUSCH, R., STILFRIED, H.V., et al A new cotton defoliant. Plant Physiology, Washington, v. 57, p. 99. 1976.(Abst.
• BARNA, K.S., WAKHLU, A.K. Eflects of thidiazuron on micropropagation of rose. In Vitro Cellular Developmental Biology, Columbia, v. 31, n. l, p. 44-46, 1995.
• HUETTEMAN, C.A., PREECE, J.E. Thiadizuron: a potent eytokinin for woody plant tissue culture. Plant Cell, Tissue and Organ Cultura Netherlands, v. 33, n. 2, p. 105-119, 1993.
• MOK, M.C., MOK, D.W.S., ARMSTRONG, D.J., et al Cytokinin activity of N-phenyl-N'-1, 2, 3-Thiadiazol-5-yl urea (thidiazuron). Phytochemistry, Elmsford, v. 21, p. 1509- 1511, 1982.
• MOK, M.C., MOK, D.W.S., TURNER, J.E., et al Biológical And biochemical effects ofcytokinin-active phenylurea derivatives in tissue culture systems. HortScience, Virgínia, v. 22, n. 6, p. 119-1197, 1987.
• MURASHIGE, T., SKOOG, F. A revised médium for rapid growth and biossays with tobacco tissue cultures. Physiology Plantarum, v. 15, p. 473-497, 1962.
• PREECE, J.E., HUETTEMAN, C.A., ASHBY, W.C., et al Micro and cutting propagation of silver maple: I Results with adult and juvenile propagules. Journal American Society Horticultural Science v. 116, p. 142-148, 1991.
• RAMANA, M.G., ANANTA, P., ESSIE, B., et al Thidiazuroninduced adventitious shoot regeneration of sweetpotato (Ipomea batatas). In Vitro Cellular Developmental Biolology, Columbia, v. 31, n. 2, p. 65-71, 1995.
• SATO, A.Y. Propagação de gérbera de vaso através da cultura de tecidos Lavras - MG. 95 p. Dissertação (Mestrado em Fitotecnia) - Curso de Pós-graduaçâo em Fitotecnia, Escola Superior de Agricultura de Lavras, 1994.
• SILVA JÚNIOR, A.A., VIZZOTO, V.J., GIORGI, E., et al Plantas medicinais caracterização e cultivo Florianópolis: EPAGRI, 1995. 71 p. Boletim Técnico, 68.

¹

Engenheiro Agrônomo, Mestre, EMBRAPA/CPATU, Belém – PA, Doutorando na Universidade Federal de Lavras (UFLA).

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  19 Maio 2008
• Data do Fascículo
  Mar 1997

Histórico

• Aceito
  25 Set 1996
• Recebido
  11 Jul 1996