Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: As mutações IVS-I-1, IVS-I-6 e CD 39 foram estudadas em 14 pacientes portadores de β-talassemia, da população de Fortaleza, capital do Ceará. OBJETIVO: Fornecer informações sobre a caracterização molecular dos pacientes β-talassêmicos de Fortaleza, contribuindo para traçar o perfil das mutações desta hemoglobinopatia na região Nordeste e no Brasil. MÉTODOS: A β-talassemia foi diagnosticada pelo estudo hematológico realizado no contador automático de células sanguíneas, com revisão de lâminas, pelo teste de resistência globular osmótica em NaCl a 0,36% e pela eletroforese em pH alcalino em fitas de acetato de celulose. O DNA foi isolado de leucócitos a partir de amostras de sangue total. A análise das mutações foi realizada por meio da técnica da reação em cadeia mediada pela polimerase alelo-específica (PCR-AE), sendo analisadas as mutações CD 39, IVSI-1, IVSI-6 e IVSI-110 seguindo-se o protocolo do Laboratório de Hemoglobinas e Genética das Doenças Hematológicas (LHGDH) da Universidade Estadual Paulista (UNESP). RESULTADOS: A distribuição das mutações identificadas foi: IVS-I-1 (14,3%), IVS-I-6 (35,7%) e CD 39 (21,4%). Os demais talassêmicos (28,6%) não apresentaram nenhuma das mutações estudadas. A maior frequência da mutação IVS-I-6 está conforme o esperado, uma vez que estudos demonstram que esta mutação está mais presente na região Nordeste, assim como a mutação IVS-I-1 na região Sul e a IVSI-110 e CD39 na região Sudeste do país. CONCLUSÃO: Esses resultados demonstram o perfil das mutações da β-talassemia na região Nordeste, contribuindo, assim, para o estudo da distribuição destas mutações no Brasil.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: IVS-I-1, IVS-I-6 and CD 39 mutations were studied in 14 patients with β-thalassemia from the population of Fortaleza, capital of Ceará. OBJECTIVE: To provide information on the molecular characterization of β-thalassemia patients from Fortaleza, aiding to define the mutation profile of this hemoglobinopathy in the Northeast region and Brazil. METHODS: β-thalassemia was diagnosed by hematological study conducted in automatic blood cell counter, with review of slides through the test of globular osmotic resistance in NaCl 0.36% and the alkaline electrophoresis on cellulose acetate strips. DNA was isolated from leukocytes extracted from whole blood samples. The analysis of mutations was performed using the technique of allele specific polymerase chain reaction. CD 39, IVSI-1-6 and IVSI-110 were evaluated according to the protocol used in the Hemoglobin and Genetics Laboratory of Hematologic Diseases (LHGDH/UNESP). RESULTS: The distribution of identified mutations was: IVS-I-1 (14.3%), IVS-I-6 (35.7%) and CD 39 (21.4%). The other thalassemia patients (28.6%) showed none of the studied mutations. The highest frequency was IVS-I-6 as anticipated, since studies show that this mutation is more prevalent in the Northeast, as well as IVS-I-1 in the South, and IVSI-110 and CD39 in Southeast of the country. CONCLUSION: These results demonstrate the profile of β-thalassemia mutations in the Northeast region, thus contributing to the study of their distribution in Brazil.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: A cistatina C sérica tem sido apontada como um marcador de filtração glomerular. OBJETIVO: Realizar a validação de um método específico e automatizado, a imunonefelometria, mensurando os níveis séricos de cistatina C por meio do nefelômetro da empresa Behring (BN II) e correlacionar resultados obtidos entre pacientes transplantados. O ensaio perfaz o intervalo de referência de 0,23-7,25 mg/l. A imprecisão intra e interensaio foi de 8,73% e 5,38%, respectivamente. A recuperação analítica da cistatina C após adição de controle foi entre 86,7 % e 98% (média 92,3%). A estabilidade da cistatina C à temperatura ambiente, sob refrigeração e sob congelamento foi testada. A perda mais significativa foi encontrada nas amostras armazenadas à temperatura ambiente, em que foram perdidos até 10% da concentração inicial. Foi encontrado coeficiente de variação de 14,79% para sensibilidade analítica. Durante todo o processo foram comparados os resultados com o controle de qualidade e obtivemos bons resultados. Depois desses testes, nós comparamos as correlações em três grupos de pacientes transplantados renais sob diferentes esquemas de imunossupressão (n = 197) - azatioprina (n = 36), micofenolato mofetil (n = 131) e sirolimus (n = 30) - entre as equações de estimativa de filtração glomerular (Cockroft Gault, Nankivell e Modification of Diet in Renal Disease) e cistatina C sérica ou creatinina sérica. CONCLUSÃO: O ensaio nefelométrico cistatina C pode perfeitamente ser adequado à nossa rotina laboratorial e as correlações entre creatinina sérica e as diferentes equações de estimativa de filtração glomerular são melhores do que quando comparamos as mesmas à cistatina C nos três grupos, independentemente da terapia imunossupressora utilizada.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: Serum cystatin C has been identified as a glomerular filtration marker. OBJECTIVE: To validate immunonephelometry, a specific and automated method, by measuring levels of serum cystatin C through Behring nephelometer (BN II) and correlate results among transplant patients. The assay comprises the reference range of 0:23 to 7:25 mg/l. The intra-assay and inter- assay imprecision rates were 8.73% and 5.38%, respectively. The analytical recovery of cystatin C after addition of control was between 86.7% and 98% (average 92.3%). The stability of cystatin C to room temperature, refrigerated or frozen was tested. The most significant loss was found in samples stored at room temperature, in which up to 10% of the initial concentration was lost. The coefficient of variation was 14.79% for analytical sensitivity. Throughout the process the results were compared with quality control and good results were achieved. After these tests, we compared the correlations between equations for estimating glomerular filtration rate (Cockroft Gault, Nankivell and MDRD) and serum cystatin C or serum creatinine in three groups of kidney transplant patients under different immunosuppressive regimens (n = 197) [azathioprine (n = 36), mycophenolate mofetil (n = 131) or sirolimus (n = 30)]. CONCLUSION: The nephelometric cystatin C assay may be perfectly suitable for our routine laboratory. The correlations between serum creatinine and the various equations for estimating glomerular filtration are better than those between cystatin C and equations for estimating glomerular filtration in the three groups irrespective of the immunosuppressive therapy used.

Resumo em Português:

A validação técnica analítica para determinação de poliaminas em tecido cerebral utilizando cromotografia líquida de alta eficiência (HPLC) e derivação pós-coluna com o-ftaldialdeído é descrita. A separação das poliaminas deu-se em coluna LiChrospher 100 RP18. O gradiente de eluição foi formado por duas fases móveis A (acetato de sódio 0,1M + octanossulfonato de sódio 0,01 M) e B (acetato de sódio 0,2 M + octanossulfonato de sódio 0,01 M)/acetonitrila (10:3), fluxo de 1,2 ml/min. O eluente foi monitorado por fluorescência (excitação, 345 nm; emissão, 455 nm). Além da excelente linearidade (putrescina, r = 0,9816; espermidina, r = 0,9920; espermina, r = 0,9901), a técnica demonstrou adequada precisão intra e interdia (< 20%) e recuperação (espermidina = 92,56%; espermina = 84,47%). Os limites de quantificação foram 0,22 pM para putrescina, 76,44 pM para espermidina e 51,44 pM para espermina. O método demonstrou ser consistente, simples e altamente reprodutível para a determinação proposta.

Resumo em Inglês:

The validation of the analytical technique for the determination of polyamines in cerebral tissue using HPLC based on o-phthalaldehyde post-column derivatization is described. The polyamines were separated in a LiChrospher100 RP18 column. Elution gradient was formed with two mobile phases: A (sodium acetate 0.1 M + sodium octanesulphonate 0.01 M, pH = 4.5) and B (sodium acetate 0.2 M + sodium octanesulphonate 0.01 M)/acetonitrile (10:3), pH = 4.5) in a 1.2 ml/min flow rate. The derivative eluent was monitored by fluorescence (excitation, 345 nm; emission, 455 nm). Besides excellent linearity (putrescine, r = 0.9816; spermidine, r = 0.9920; spermine, r = 0.9901), the technique demonstrated intra and inter-day precision (< 20%) as well as recovery (spermidine = 92.56%; spermine = 84.47%). Quantification limits were 0.22 pM for putrescine, 76.44 pM for spermidine and 51.44 pM for spermine. The method demonstrated to be robust, simple and highly reproducible for polyamine determination in tissues.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: O cobre é um elemento traço essencial e sua homeostase é importante, principalmente em idosos, uma vez que seu metabolismo está associado a doenças neurodegenerativas e distúrbios na eritropoiese, entre outros. OBJETIVO: O presente estudo avaliou a associação entre cupremia, parâmetros hematológicos e estresse oxidativo. MATERIAIS E MÉTODOS: Amostras de sangue de 39 mulheres idosas (grupo de estudo) e de 20 indivíduos adultos saudáveis (grupo-controle) foram coletadas. As concentrações de cobre sérico foram quantificadas por espectrometria de massa por plasma indutivamente acoplado (ICP-MS), a atividade e o índice de reativação da enzima δ-aminolevulinato desidratase (ALA-D) foram determinados por espectrofotometria e parâmetros sanguíneos foram analisados em sistema automatizado. Os resultados foram expressos em média ± desvio padrão (DP). RESULTADOS: As concentrações de cobre, parâmetros hematológicos e índice de reativação da ALA-D para ambos os grupos encontraram-se dentro dos valores de referência. Porém, a atividade da ALA-D (11,47 ± 2,81 U.L-1) foi significativamente inferior no grupo de estudo em comparação com o grupo-controle. Correlações de Spearman (observadas somente nas mulheres idosas) entre as concentrações de cobre versus hemoglobina, hematócrito e atividade da ALA-D foram -0,384; -0,408 e -0,395, respectivamente (p < 0,05). No entanto, o índice de reativação da ALA não apresentou correlação com a cupremia. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: Os resultados mostraram que o cobre, mesmo estando nos limites considerados valores de referência, pode estar envolvido na inibição da ALA-D, o que pode alterar parâmetros hematológicos, como a síntese de hemoglobina. Neste sentido, sugere-se que os níveis de referência para o cobre em idosos sejam reavaliados.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: Copper is an essential trace element, and its homeostasis is important, mainly among the elderly, since their metabolism is associated with neurodegenerative diseases and erythropoiesis disorders, among others. OBJECTIVE: This study evaluated the association among cupremia, hematological parameters and oxidative stress. MATERIAL AND METHODS: Blood samples from 39 elderly women (study group) and 20 health individuals (control group) were collected. The concentrations of serum copper were quantified by ICP-MS. The activity and enzyme ALA-D reactivation index were determined by spectrophotometry and blood parameters were analyzed in the automated system. The results were expressed as mean ± standard deviation. RESULTS: Concentrations of copper, hematological parameters and ALA-D reactivation were within the reference values in both groups. However, ALA-D activity (11.47 ± 2.81 UL-1) was significantly lower in the study group compared to the control group. Spearman correlations (observed only in elderly women) between copper concentration versus hemoglobin, hematocrit and ALA-D activity were -0.384, -0.408 and -0.395, respectively (p < 0.05). Nonetheless, ALA reactivation index was not related to cupremia. DISCUSSION AND CONCLUSION: The results showed that copper, although it is within accepted reference values, may be involved in ALA-D inhibition, which may affect hematological parameters such as hemoglobin synthesis. Thus, the reference levels for copper in the elderly should be reviewed.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: O carcinoma de células renais (CCR) é umas das doenças urológicas de maior malignidade, correspondendo a 1%-3% de todos os tumores sólidos dos adultos. As lesões pré-malignas do CCR ainda não foram totalmente descritas. Achados de displasia intraepitelial tubular renal (DIETR) em áreas próximas ao tumor, livres de neoplasia, sugerem que esta alteração possa ser a precursora biológica de alguns tipos de CCR. O objetivo deste estudo é avaliar a possibilidade do uso de tissue microarray (TMA) no estudo da DIETR e do CCR e os parâmetros para sua utilização imuno-histoquímica (IHQ) utilizando os anticorpos anti-Ki-67 e p53 para confirmar a evidência de DIETR como precursora biológica do CCR. MATERIAL E MÉTODOS: O estudo foi realizado em 10 peças cirúrgicas de nefrectomias realizadas em pacientes com diagnóstico de CCR selecionadas no período de 2000 a 2005, em material arquivado no Instituto Nacional de Câncer (INCA). DISCUSSÃO: A utilização da técnica de TMA permite amostragem de várias áreas e realização da IHQ utilizando apenas duas lâminas, uma para cada marcador. Como não há na literatura descrição de utilização de TMA para estudo da DIETR, foi necessário inicialmente realizar estudo de validação para saber se haveria representatividade de lesões focais no TMA. RESULTADOS: A análise estatística não mostrou diferença entre a utilização de TMA com dois ou quatro cilindros de tecido ou o corte inteiro. CONCLUSÃO: O teste de validação de técnica artesanal de TMA autorizou o uso de dois cilindros de 1 mm² por caso.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION AND OBJECTIVE: Renal cell carcinoma is one of the most malignant urological diseases, corresponding to 1%-3% of solid tumors in adults. The finding of intratubular epithelial dysplasia (IED) next to tumor areas suggests that this can be the biological precursor of some types of renal cell carcinoma (RCC). The objective of this study is to evaluate the use of tissue microarray (TMA) to study IED and RCC by immunohistochemistry (IHC) with Ki-67 and p53 protein to confirm the evidence that IED is the biological precursor of RCC. MATERIAL AND METHOD: This study was performed in archival material from ten nephrectomy surgical specimens from Instituto Nacional de Câncer, between 2000 and 2005. DISCUSSION: TMA technique allows to sample and study several different areas from many patients in the same slide, using just one slide for each IHC marker. Once there was no previous study on IED by TMA, a validation test was needed first. RESULTS: There was no statistical difference between 2 or 4 tissue cores and the whole section analysis. CONCLUSION: TMA validation assay demonstrated that the use of two tissue cores with 1 mm² each was suitable to evaluate RCC and IED.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica caracterizada por manifestações clínicas variadas. Os poucos trabalhos existentes na literatura relatam uma prevalência entre 6,5% e 21% de acometimento bucal. OBJETIVO: Investigar os achados bucais e laboratoriais em pacientes com LES. MATERIAL E MÉTODO: Foram analisados 155 pacientes com diagnóstico de LES, segundo critérios do American College of Rheumatology (ACR). O índice de dentes cariados, perdidos e obturados (CPO-D) foi registrado e avaliou-se a necessidade de tratamento periodontal por meio do índice periodontal comunitário (IPC). Foram realizados esfregaços e biópsias das lesões e bordas laterais de língua para exames citopatológicos. Exames laboratoriais foram correlacionados com os achados bucais destes pacientes. RESULTADOS: Dos 155 pacientes, 94,1% eram mulheres. Altos níveis de anticorpos circulantes (FAN-Hep2) foram observados em todos os pacientes, sendo 41,9% positivos para a pesquisa de anticorpos anti-DNA de fita dupla. O índice CPO-D médio correspondeu a 18,5 e de acordo com o IPC, 18% apresentaram bolsas periodontais de 4-5 mm e 5,9% de 6 mm ou mais. Foram biopsiadas oito lesões bucais, mas somente três casos foram considerados compatíveis com a indicação clínica de LES. Os principais sítios acometidos foram dorso de língua, mucosa jugal e lábios. A prevalência de candidíase correspondeu a 20,1% e a de leucoplasia pilosa oral a 3,7%. CONCLUSÃO: Pacientes com LES apresentam condição periodontal precária e baixa prevalência de lesões bucais e, além disso, a citopatologia mostrou-se importante no diagnóstico de infecções relacionadas com imunossupressão, como candidíase e leucoplasia pilosa oral.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory disease, which is characterized by several clinical manifestations. A few studies in the literature state estimated prevalence of 6.5% to 21% in oral manifestations. OBJECTIVE: To investigate the oral and laboratorial findings in patients with SLE. MATERIAL AND METHOD: One hundred fifty-five patients diagnosed with SLE were analyzed in accordance with the American College of Rheumatology (ACR) criteria. The index of decayed, missed and filled teeth (DMFT) was registered and the necessity of periodontal treatment was evaluated by the Community Periodontal Index (CPI). Furthermore, biopsies and smears of the lateral borders of the tongue were performed for cytopathological exams. Laboratory exams were correlated with patients' oral findings. RESULTS: Ninety-four comma one percent of 155 patients were women. High levels of circulating autoantibodies (ANA-Hep2) were observed in all patients and 41.9% of them were positive for anti-double stranded DNA. Mean DMFT index was 18.5. According to CPI, 18% showed periodontal pockets of 4-5 mm and 5.9% pockets of 6mm or more. Eight oral lesions were biopsied, but only three cases were considered compatible with clinical indication of SLE. The main affected sites were dorsum of the tongue, buccal mucosa and lips. The prevalence of candidiasis and oral hairy leucoplakia corresponded to 20.1% and 3.7%, respectively. CONCLUSION: These data suggest that patients with SLE present low prevalence of oral lesions and poor periodontal conditions. Moreover, the cytopathology showed infections associated with immunosuppression such as candidiasis and oral hairy leucoplakia.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: Técnicas de biologia molecular permitem a identificação de marcadores moleculares como mutações dos genes BRAF e c-Kit em melanomas. Estudos de alterações genéticas em pacientes sul-americanos são escassos. OBJETIVOS: Identificar a incidência de mutações dos genes BRAF e c-Kit em melanomas cutâneos primários em uma série de pacientes brasileiros e avaliar as implicações patogenéticas e prognósticas dessas mutações, correlacionando-as com dados clínicos e histopatológicos. MATERIAL E MÉTODOS: Noventa e seis espécimes cirúrgicos de melanomas cutâneos e 15 metástases correspondentes foram analisados por meio da técnica TaqMan Real-Time polymerase chain reaction (PCR). RESULTADOS: Uma frequência relativamente baixa de mutações BRAF em melanomas cutâneos primarios (39%) e metastáticos (40%) em comparação com os dados da literatura e ausência de mutações c-Kit foi demonstrado. Mutações BRAF surgiram em um estágio inicial da progressão do melanoma e não foram envolvidas na transição de melanomas finos (< 1 mm) para grossos (> 1 mm). Essas mutações estavam presentes em pacientes mais jovens e se correlacionaram com o padrão de exposição solar dos pacientes estudados, mas não houve correlação com nenhum fator prognóstico histológico ou sobrevida global dos mesmos. CONCLUSÃO: A identificação de ambas as mutações (BRAF e c-Kit) não servem como indicadores de prognóstico na população brasileira. Além disso, a baixa frequência de mutações BRAF encontrada neste estudo nos faz questionar se essa mutação realmente tem papel-chave na patogênese do melanoma.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: Molecular biology techniques allow identification of molecular markers such as BRAF and c-Kit gene mutations in melanomas. Studies on genetic alterations in melanomas of South-American patients are sparse. OBJECTIVES: To identify the incidence of BRAF and c-Kit gene mutations in primary cutaneous melanomas in Brazilian patients and to evaluate pathogenetic and prognostic implications of these mutations correlating them with clinical and histopathological data. MATERIAL AND METHODS: Ninety-six surgical specimens of primary cutaneous melanoma and 15 corresponding metastasis were analyzed using TaqMan Real-Time polymerase chain reaction (PCR) assays. RESULTS: In comparison with the medical literature, a relatively low frequency of BRAF mutation in primary (39%) and metastatic (40%) melanomas and complete absence of c-Kit gene mutations were demonstrated. BRAF mutations arose at an early stage during melanoma progression and were not involved in the transition of thin (< 1 mm) to thick (> 1 mm) melanomas. BRAF mutations are related to patients' younger age and to the pattern of sun exposure, although there was no correlation with any histological prognostic factor or overall survival. CONCLUSION: The identification of both BRAF and c-Kit mutation is not a suitable prognostic indicator in the Brazilian population. Moreover, the relatively low frequency of BRAF mutations brings into question if it actually plays a key role in melanoma pathogenesis.

Resumo em Português:

Morte súbita de jovem, sexo masculino, 23 anos, assintomático, suscitou verificação de óbito. Antes queixou-se de cefaleia excruciante, em sala de aula, caindo sobre o computador. Encéfalo apresentou edema e congestão vascular. Sem herniações. Cortes coronais evidenciaram dilatação dos ventrículos laterais e nódulo aderido ao teto do terceiro ventrículo. À microscopia o diagnóstico foi cisto coloide do terceiro ventrículo. A ameaça de morte súbita em portadores de cisto coloide é sério problema diagnóstico na emergência médica. A relevância deste caso está em lembrar aos médicos que esta entidade deve permanecer como diagnóstico diferencial nas cefaleias em crianças, adolescentes e adultos jovens.

Resumo em Inglês:

Sudden death of 23 year-old asymptomatic male patient led to further investigation into its cause. Previously, he had complained of excruciating headache in the classroom, falling on the computer. His brain showed edema and vascular congestion without herniation. Coronal sections showed dilatation of the lateral ventricles and nodule attached to the roof of the third ventricle. The microscopic diagnosis was colloid cyst of third ventricle. The threat of sudden death among colloid cyst patients is a serious diagnostic problem in medical emergencies. The relevance of this case is to remind doctors that this entity should remain as differential diagnosis in headaches among children, adolescents and young adults.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: Mutações do gene BRAF localizado no cromossomo 7q são as mais frequentemente encontradas em melanomas cutâneos (60%-80%). O único estudo que correlacionou padrões histopatológicos de melanomas cutâneos com a presença de mutações BRAF foi realizado por Viros et al., em 2008, que observaram que características morfológicas de melanomas estavam associadas a mutações BRAF. OBJETIVOS: Correlacionar padrões histopatológicos de melanomas cutâneos com a presença de mutações BRAF, a fim de confirmar os achados de Viros et al. MÉTODOS: Espécimes em parafina de 20 casos de melanomas cutâneos primários com mutações BRAF e 20 casos sem mutações foram avaliados independentemente por dois dermatologistas sem o conhecimento da presença ou não das mutações. Os padrões analisados foram formação de "ninhos", circunscrição, presença de melanócitos isolados na lesão, tamanho e forma das células neoplásicas e pigmentação das células tumorais. RESULTADOS: A formação de "ninhos" foi a variável com o maior poder de determinação para melanomas com mutações BRAF para ambos os observadores (r = 0,46; p = 0,04). CONCLUSÃO: Não foi possível confirmar nenhum valor preditivo em relação ao status mutacional de um melanoma para os padrões histológicos circunscrição e presença de melanócitos isolados na lesão, bem como para características citológicas. Dificuldades na interpretação de alguns critérios histológicos foram demonstradas pela variação da concordância entre os observadores. É difícil afirmar se alterações genéticas como as mutações BRAF podem servir como biomarcadores para a classificação de melanomas.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: Mutations on BRAF gene located on chromosome 7q are the most frequently found in cutaneous melanomas (60%-80%). The only study correlating histopathological patterns of cutaneous melanomas with the presence of BRAF mutations was undertaken by Viros et al. in 2008. The authors observed that morphological features of melanomas are associated with BRAF mutations. OBJECTIVES: To correlate histopathological patterns in cutaneous melanoma with the presence of BRAF mutations in order to corroborate the results of the study performed by Viros et al. METHODS: Paraffin embedded surgical specimens of 20 primary cutaneous melanomas with BRAF mutation and 20 specimens without BRAF mutation were evaluated independently by two dermatologists that carried out a blind experiment. The features analyzed were nesting, circumscription, presence of isolated melanocytes in the lesion, size and shape of neoplastic cells, and tumor cell pigmentation. RESULTS: "Nesting" was the most prevalent variable for the determination of melanomas with BRAF mutations according to both observers (r = 0.46; p = 0.04). CONCLUSION: As far as mutational status is concerned, it was not possible to confirm any predictive value for histopathological patterns such as circumscription, presence of isolated melanocytes in the lesion and cytological features. Difficulties in the interpretation of some histological criteria were demonstrated by the variation in the observers' conclusions. It is difficult to state if genetic alterations such as BRAF mutations may serve as biomarkers for melanoma classification.