El objetivo fue investigar cuales eran los esteroides C21 más importantes producidos por los testículos en espermiación de la corvina blanca Micropogonias furnieri (Sciaenidae) para poder identificar los potenciales mediadores de la maduración gamética de los machos de esta especie. Los esteroides producidos por los testículos en espermiación fueron identificados después de su incubación con el precursor 3H-17-hidroxi-4-pregnene-3,20-diona a través de cromatografía de capa fina y cromatografía líquida de alta presión y posteriormente por oxidación enzimática, acetilación e inmunoquímica. Los principales metabolitos producidos por los testículos en espermiación fueron la 17,20β-Dihidroxi-4-pregnen-3-ona (17,20β-P) y la 11β,17,21-Trihidroxi-4-pregnene-3,20-diona (cortisol). Contrariamente a lo esperado, no se encontró el derivado tri-hidroxilado de la progesterona llamado 17,20β,21-Trihidroxi-4-pregnen-3-ona. Los niveles circulantes de 17,20β-P fueron no detectable en los testículos inmaduros y en aquellos en inicios de espermatogénesis, mientras que un aumento claro en las concentraciones circulantes fue detectada en corvinas en plena espermatogénesis y en espermiación (desde no detectable a 1047 pg mL-1). Los resultados obtenidos in vitro junto a los cambios a nivel plasmático sugieren que la 17,20β-P es un buen candidato a proponer como esteroide involucrado en la regulación del proceso de maduración testicular de la corvina. La función del cortisol a nivel testicular debería ser mejor estudiada en las etapas finales del desarrollo testicular de esta especie.
Articles • Neotrop. ichthyol. 13
(03)
• Jul-Sep 2015 • https://doi.org/10.1590/1982-0224-20150013 linkcopiar
17,20β-P and cortisol are the main in vitro metabolites of 17-hydroxy-progesterone produced by spermiating testes of Micropogonias furnieri (Desmarest, 1823) (Perciformes: Sciaenidae)
Autoría
person Denise Vizziano Cantonnet
schoolLaboratorio de Fisiología de la Reproducción y Ecología de Peces, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, Iguá 4225, Montevideo 11400, Uruguay. (DVC) vizziano@gmail.com (corresponding author), (MM) magdalenamateo@hotmail.com, (AA) andresalberro@gmail.comFacultad de CienciasUruguayMontevideo, UruguayLaboratorio de Fisiología de la Reproducción y Ecología de Peces, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, Iguá 4225, Montevideo 11400, Uruguay. (DVC) vizziano@gmail.com (corresponding author), (MM) magdalenamateo@hotmail.com, (AA) andresalberro@gmail.com
person Magdalena Mateo
schoolLaboratorio de Fisiología de la Reproducción y Ecología de Peces, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, Iguá 4225, Montevideo 11400, Uruguay. (DVC) vizziano@gmail.com (corresponding author), (MM) magdalenamateo@hotmail.com, (AA) andresalberro@gmail.comFacultad de CienciasUruguayMontevideo, UruguayLaboratorio de Fisiología de la Reproducción y Ecología de Peces, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, Iguá 4225, Montevideo 11400, Uruguay. (DVC) vizziano@gmail.com (corresponding author), (MM) magdalenamateo@hotmail.com, (AA) andresalberro@gmail.com
person Andrés Alberro
schoolLaboratorio de Fisiología de la Reproducción y Ecología de Peces, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, Iguá 4225, Montevideo 11400, Uruguay. (DVC) vizziano@gmail.com (corresponding author), (MM) magdalenamateo@hotmail.com, (AA) andresalberro@gmail.comFacultad de CienciasUruguayMontevideo, UruguayLaboratorio de Fisiología de la Reproducción y Ecología de Peces, Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, Iguá 4225, Montevideo 11400, Uruguay. (DVC) vizziano@gmail.com (corresponding author), (MM) magdalenamateo@hotmail.com, (AA) andresalberro@gmail.com
person Florencia Barrios
schoolSezione Istologia ed Embriologia Medica. Sapienza Università di Roma Via Antonio Scarpa 16, 00161 Roma, Italy. flor3435@hotmail.comSapienza Università di RomaItalyRoma, ItalySezione Istologia ed Embriologia Medica. Sapienza Università di Roma Via Antonio Scarpa 16, 00161 Roma, Italy. flor3435@hotmail.com
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Sezione Istologia ed Embriologia Medica. Sapienza Università di Roma Via Antonio Scarpa 16, 00161 Roma, Italy. flor3435@hotmail.comSapienza Università di RomaItalyRoma, ItalySezione Istologia ed Embriologia Medica. Sapienza Università di Roma Via Antonio Scarpa 16, 00161 Roma, Italy. flor3435@hotmail.com
Figuras | Tablas
imageFig. 1 Radiochromatogram after TLC analysis of spermiating testes of Micropogonias furnieri males 1, 2 and 3 after toluene/cyclohexane 50/50 v/v (system I) and benzene/acetone 80/20 v/v (system II). The TLC zones further analyzed by HPLC are shown as A, B and C. The peak of precursor is shown as D. The authentic standards used were: 1 = 20-dihydrocortisone; 2 = 17,20,21-P; 3 = 17,20α-P; 4 = 11KT; 5 = 17,20ß-P; 6 = 11ßOH-A; 7 = Ad; 8 = testosterone; 9 = 17-P; 10 = A. open_in_new

imageFig. 2 Analysis of zone B of TLC or cortisol area (see Fig. 1) by HPLC using methanol/acetonitrile/water 33/26/41 v/v/v (system III) in Micropogonias furnieri . open_in_new

imageFig. 3 Analysis of zone C of TLC or di-hydroxylated progestins area (see Fig. 1) by HPLC using methanol/acetonitrile/water 33/26/41 v/v/v (system III) in Micropogonias furnieri . open_in_new

imageFig. 4 Plasma level of 17,20ß-P in males at different stages of development sampled at the Río de la Plata estuary. 1: Immature testis; 2: Developing testis (early spermatogenesis); 3: Fully developed testis (whole spermatogenesis), 4: Spermiating testis; 6: Resting testis. n = number of fish collected for each stage. open_in_new

table_chartTable 1
Meaning of common abbreviations used in text following Kime (1995).
| Abbreviation | Full name | Other abbreviations or names |
|---|---|---|
| P | 4-Pregnene-3,20-dione | Progesterone |
| 17-P | 17-Hydroxy-4-pregnene-3,20-dione | 17-Hydroxyprogesterone |
| 17,20ß-P | 17,20ß-Dihydroxy-4-pregnen-3-one | DHP |
| 17,20α-P | 17,20α-Dihyhydroxy-4-pregnen-3-one | |
| 17,21-P | 17,21-Dihydroxy-4-pregnene-3,20-dione | 11-deoxycortisol |
| 17,20,21-P | 17,20β,21-Trihydroxy-4-pregnen-3-one | 20β-S |
| cortisol | 11β,17,21-Trihydroxy-4-pregnene-3,20-dione | Hydrocortisone |
| 3α,17P-5ß | 3α,17α-dihydroxy-5ß-pregnan-20-one | |
| 11-deoxycorticosterone | 21-Hydroxy-4-pregnene-3,20-dione | DOC |
| 11-20ßS | 17,20β,21-Trihydroxy-4-pregnen-3,11-dione | 20-dihydrocortisone |
| E | 17,21-Dihydroxy-4-pregnene-3,11,20-trione | cortisone |
| 11ß-21P | 11β,21-Dihydroxy-4-pregnene-3,20-dione | corticosterone |
| A | 4-Androstene-3,17-dione | Androstenedione |
| T | 17ß-Hydroxy-4-androsten-3-one | Testosterone |
| 11KT | 17ß-hydroxy-4-androstene-3,11-dione | 11-ketotestosterone |
| 11ßOH-A | 11ß-Hydroxy-4-androstene-3,17-dione | 11-betahydroxyandrostenedione |
| Ad | 4-Androstene-3,11,17-trione | Adrenosterone, androstenetrione |
| E2 | 1,3,5(10)-Estratriene-3,17β-diol | 17β-estradiol |
table_chartTable 2
Analysis of metabolites produced by testes fragments of three males of Micropogonias furnieri at spermiating time. System I = toluene/cyclohexane 50/50 v/v; System II = benzene/acetone 80/20 v/v; System III = methanol/acetonitrile/water 33/26/41 v/v/v; System IV = tetrahydrofuran/water 35/65 v/v.
| Metabolite | System I (TLC) | System II (TLC) | System III (HPLC) | System IV (HPLC) | Enzymatic oxydation | Acetylation | Immunochemical |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 17,20ß-P | X | X | X | X | X | - | - |
| cortisol | X | X | X | X | - | X | - |
| 17,20,21-P | X | X | X | X | X | - | X |
| 17,21-P | X | X | X | X | - | - | - |
table_chartTable 3
Cross-reactivity of steroids with the anti-17,20β-P used for radioimmunoassay. Cross-reactivity was determined by comparing the concentrations of unlabeled cortisol and unlabeled competitors for the displacement of 50% of the antibody-bound tritiated cortisol. The full names of steroids are given shown in Table 1.
| Steroids | Cross-reactivity (%) |
|---|---|
| 17,20ß-P | 100 |
| 17,20,21-P | <0.01 |
| 17-P | <0.01 |
| P | <0.01 |
| 17,21-P | <0.01 |
| Cortisol | <0.01 |
| T | <0.01 |
| E2 | <0.01 |
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