Importante frequência da infecção por <i>Anaplasma phagocytophilum</i> em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil

Anaplasmaphagocytophilum é responsável pela anaplasmose granulocítica, doença que acomete seres-humanos e várias espécies de animais. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de cães acometidos por A. phagocytophlium em uma área residencial de Belo Horizonte, MG, Brasil. Sessenta e dois cães foram submetidos a testes sorológicos (reação de imunofluorescência indireta - IFAT) e moleculares (PCR). Anticorpos anti-A. phagocytophilum foram detectados em 43,8% dos cães. Sete cães (10,9%) foram positivos no PCR para o gene msp4 de A. phagocytophilum, seis para o gene msp2/p44 A. phagocytophilum e quatro para a região 16S rRNA de Anaplasmataceae granulocíticas. Esse estudo confirma a frequência relativamente alta da infecção por A. phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil e destaca a necessidade de pesquisas para determinar o papel do carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato na transmissão desse microrganismo para cães de áreas urbanas brasileiras.

TERMOS DE INDEXAÇÃO:
Anaplasma phagocytophilum; cães; anaplasmose canina; epidemiologia; IFAT; PCR

Autoria

Júlia A.G. Silveira ^* *Corresponding author: juliaags@yahoo.com.br

Departamento de Parasitologia, Instituto de Ciências Biológicas (ICB), Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Av. Antônio Carlos 6627, Pampulha. Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: lettestevam@hotmail.comUniversidade Federal de Minas GeraisBrazilBelo Horizonte, MG, Brazil Departamento de Parasitologia, Instituto de Ciências Biológicas (ICB), Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Av. Antônio Carlos 6627, Pampulha. Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: lettestevam@hotmail.com

Ilka A. Reis

Departamento de Estatística, Instituto de Ciências Exatas, UFMG, Av. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: ilka@est.ufmg.brUFMGBrazilBelo Horizonte, MG, Brazil Departamento de Estatística, Instituto de Ciências Exatas, UFMG, Av. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: ilka@est.ufmg.br

Letícia G.T.M. Estevam

Marina C.C. Pinto

Laboratório de Leishmanioses, Centro de Pesquisas René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Av. Augusto de Lima 1715, Barro Preto, Belo Horizonte, MG 30190-002, Brazil. E-mails: gustavopaz@cpqrr.fiocruz.br, marinaccorreia@hotmail.comFundação Oswaldo CruzBrazilBelo Horizonte, MG, Brazil Laboratório de Leishmanioses, Centro de Pesquisas René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Av. Augusto de Lima 1715, Barro Preto, Belo Horizonte, MG 30190-002, Brazil. E-mails: gustavopaz@cpqrr.fiocruz.br, marinaccorreia@hotmail.com

Erich Zweygarth

Comparative Tropical Medicine and Parasitology, Ludwig-Maximilians-Universität München, Professor-Huber-Platz 2, 80539 München, Germany. E-mail: zweygarthe@gmail.comUniversität MünchenGermanyMünchen, GermanyComparative Tropical Medicine and Parasitology, Ludwig-Maximilians-Universität München, Professor-Huber-Platz 2, 80539 München, Germany. E-mail: zweygarthe@gmail.com

Lygia M.F. Passos

Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária (EV), UFMG, Av. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-90, Brazil. E-mail: lygiapassos@yahoo.comUFMGBrazilBelo Horizonte, MG, Brazil Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária (EV), UFMG, Av. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-90, Brazil. E-mail: lygiapassos@yahoo.com

Gustavo F. Paz

*Corresponding author:
juliaags@yahoo.com.br

Conflict of interest statement.- The authors declare that they have no competing interests.

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Fig.1
Phylogenetic clustering of the partial msp4 gene of Anaplasma phagocytophilum: The tree was obtained using the Neighbor-joining method and the software package MEGA 6.0 after alignment of consensus sequences of the msp4 genes obtained in this study and sequences of A. phagocytophilum from various sources available in GenBank (accession numbers provided). Distance matrices were calculated using the Kimura two-parameter method. Selected percentage bootstrap values (1000 repeats) are presented at the nodes. Anaplasma marginale was used as outgroup. * Samples from this study.

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Table 1.
Primers used in polymerase chain reactions for the detection of Anaplasma phagocytophilum DNA in blood samples from dogs

Fig.1 Phylogenetic clustering of the partial msp4 gene of Anaplasma phagocytophilum: The tree was obtained using the Neighbor-joining method and the software package MEGA 6.0 after alignment of consensus sequences of the msp4 genes obtained in this study and sequences of A. phagocytophilum from various sources available in GenBank (accession numbers provided). Distance matrices were calculated using the Kimura two-parameter method. Selected percentage bootstrap values (1000 repeats) are presented at the nodes. Anaplasma marginale was used as outgroup. * Samples from this study.

Table 1. Primers used in polymerase chain reactions for the detection of Anaplasma phagocytophilum DNA in blood samples from dogs

Specificity	Primers (5’- 3’)	Target	Name	Size (bp)	References
Anaplasma phagocytophilum
First round	ATGAATTACAGAGAATTGCTTGTAGG	msp4	MSP4AP5	849	de la Fuente et al. 2005De la Fuente J., Massung R.F., Wong S.J., Chu F.K., Lutz H., Meli M., von Loewenich F.D., Grzeszczuk A., Torina A., Caracappa S., Mangold A.J., Naranjo V., Stuen S. & Kocan K.M. 2005. Sequence analysis of the msp4 gene of Anaplasma phagocytophilum strains. J. Clin. Microbiol. 43:1309-1317.
	TTAATTGAAAGCAAATCTTGCTCCTATG		MSP4AP3
Second round	CTATTGGYGGNGCYAGAGT	msp4	msp4f	381	Bown et al. 2007Bown K.J., Lambin X., Ogden N.H., Petrovec M., Shaw S.E., Woldehiwet Z. & Birtles R.J. 2007. High-resolution genetic fingerprinting of European strains of Anaplasma phagocytophilum by use of multilocus variable-number tandem-repeat analysis. J. Clin. Microbiol. 45:1771-1776.
	GTTCATCGAAAATTCCGTGGTA		msp4r
Anaplasma phagocytophilum	ATTGGACTTTTGAGCTGTCTT	msp2/p44	p44F	1082	Lin et al. 2003Lin Q., Rikihisa Y., Ohashi N. & Zhi N. 2003. Mechanisms of variable p44 expression by Anaplasma phagocytophilum. Infect. Immun. 71:5650-5661.
	CAATAGTYTTAGCTAGTAACC		p44R
Anaplasma phagocytophilum	CCAGCGTTTAGCAAGATAAGAG	msp2/p44	msp2-3F	334	Zeidner et al. 2000Zeidner N.S., Burkot T.R., Massung R., Nicholson W.L., Dolan M.C., Rutherford J.S., Biggerstaff B.J. & Maupin G.O. 2000. Transmission of the agent of human granulocytic ehrlichiosis by Ixodes spinipalpis ticks: evidence of an enzootic cycle of dual infection with Borrelia burgdorferi in northern Colorado. J. Infect. Dis. 182:616-619.
	GCCCAGTAACATCATAAGC		msp2-3R
Granulocyte/platelet Anaplasma/Ehrlichia
First round	CACATGCAAGTCGAACGGATTATTC	GE3a	16S rRNA	932	Massung et al. 1998Massung R.F., Slater K., Owens J.H., Nicholson W.L., Mather T.N., Solberg V.B. & Olson J.G. 1998. Nested PCR assay for detection of granulocytic ehrlichiae. J. Clin. Microbiol. 36:1090-1095.
	TTCCGTTAAGAAGGATCTAATCTCC	GE10r
Second round	AACGGATTATTCTTTATAGCTTGCT	GE9f	16S rRNA	546	Massung et al. 1998Massung R.F., Slater K., Owens J.H., Nicholson W.L., Mather T.N., Solberg V.B. & Olson J.G. 1998. Nested PCR assay for detection of granulocytic ehrlichiae. J. Clin. Microbiol. 36:1090-1095.
	GGCAGTATTAAAAGCAGCTCCAGG	GE2
Monocyte Ehrlichia spp. Lineage
First round	ACGGACAATTGCTTATAGCCTT	NS16SCH1F	16S rRNA	1195	Kawahara et al. 2009Kawahara M., Tajima T., Torii H., Yabutani M., Ishii J., Harasawa M., Isogai E. & Rikihisa Y. 2009. Ehrlichia chaffeensis infection of sika deer. Japan. Emerg. Infect. Dis. 15:1991-1993.
	ACAACTTTTATGGATTAGCTAAAT	NS16SCH1R
Second round	GGGCACGTAGGTGGACTAG	NS16SCH2F	16S rRNA	443	Kawahara et al. 2009Kawahara M., Tajima T., Torii H., Yabutani M., Ishii J., Harasawa M., Isogai E. & Rikihisa Y. 2009. Ehrlichia chaffeensis infection of sika deer. Japan. Emerg. Infect. Dis. 15:1991-1993.
	CCTGTTAGGAGGGATACGAC	NS16SCH2R

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