Different protein levels in the diet of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) and its effects on the liver tissue

To verify the occurrence of liver morphological changes, bullfrog tadpoles were fed three diets: an experimental diet with 32.68% crude protein and two commercial diets with 37.92% and 57.53% crude protein. Tadpoles were distributed into a completely randomized design (CRD) with three treatments and four replications. Liver samples were collected twice, on the 30th and 60th day of the experiment. Tadpole livers were fixed in Bouin's solution, then subjected to routine histotechnology procedures, and stained with hematoxylin - eosin (HE). Microscopic evaluation of liver tissue showed several morphological changes like disorganization and vacuolization of hepatocytes; periportal, multifocal and diffuse mononuclear inflammatory infiltrate, eosinophilic inflammatory infiltration, congestion, hemorrhage, hemolysis and necrosis. The liver changes found in this study suggest that diets used for bullfrog tadpoles, did not meet their dietary needs, what affected their homeostasis, thus compromising their health.

Index Terms:
Bullfrog; Lithobates catesbeianus; liver histology; protein; hepatocytes; liver morphology; commercial diets

Authorship

Cleber F.M. Mansano ^**Autor para correspondência: clebermansano@yahoo.com.br

Centro de Aquicultura, Universidade Estadual Paulista (Unesp), Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brasil.Universidade Estadual PaulistaBrazilJaboticabal, SP, BrazilCentro de Aquicultura, Universidade Estadual Paulista (Unesp), Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brasil.

Marcelo M. Pereira

Beatrice I. Macente

Departamento de Obstetrícia e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV), Unesp, Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brasil.UnespBrazilJaboticabal, SP, BrazilDepartamento de Obstetrícia e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV), Unesp, Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brasil.

Lilian C. Makino

Departamento de Agronomia e Engenharia de Pesca, Unesp, Av. Nelson Brihi Badur 430, Vila Tupy, Registro, SP 11900-000, Brasil.UnespBrazilRegistro, SP, BrazilDepartamento de Agronomia e Engenharia de Pesca, Unesp, Av. Nelson Brihi Badur 430, Vila Tupy, Registro, SP 11900-000, Brasil.

Ana P.P. Jacintho

Departamento de Patologia Veterinária, FCAV-Unesp, Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brasil.UnespBrazilJaboticabal, SP, BrazilDepartamento de Patologia Veterinária, FCAV-Unesp, Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brasil.

Laura S.O. Nakaghi

Marta V. De Stéfani

*Autor para correspondência: clebermansano@yahoo.com.br

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Fig.1:
Fígado de girinos de rã-touro, Lithobates catesbeianus, no 30º dia do período experimental. (a) Girinos alimentados com dieta experimental (32,68% de proteína bruta), severa degeneração vacuolar, hepatócitos desorganizados e congestão. Infiltrado inflamatório mononuclear periportal (Seta). Veia central do lóbulo (V). Ducto biliar (D). HE, obj. 20x. (b) Girinos alimentados com dieta experimental (37,92% de proteína bruta), hepatócitos hipertrofiados, marginalização do núcleo celular e citoplasma severamente vacuolizado, sugerindo grave quadro de esteatose (setas). HE, obj.40x. (c) Girinos alimentados com dieta experimental (57,53% de proteína bruta), degeneração dos hepatócitos e perda da arquitetura estrutural do órgão; presença de infiltrado inflamatório mononuclear distribuído difusamente por todo o parênquima hepático (setas). Espaço periportal (*). Veia central do lóbulo (V). Ducto biliar (D). HE, obj.20x.

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Fig.2:
Fígado de girinos de rã-touro, Lithobates catesbeianus no 60º dia do período experimental. (a) Girinos alimentados com dieta experimental (32,68% de proteína bruta), com severa congestão e dilatação dos espaços dos sinusoidais, levando a desorganização de hepatócitos (setas). HE, obj.20x. (b) Girinos alimentados com dieta comercial (37,92% de proteína bruta), com infiltrado inflamatório mononuclear multifocal (setas), demonstrando um quadro de hepatite crônica. HE, obj.20x. (c) Girinos alimentados com dieta comercial (57,53% de proteína bruta), com necrose severa e difusa. HE, obj.20x.

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Quadro 1:
Fórmula e composição nutricional da dieta experimental na dieta de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus)

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Quadro 2:
Nível de garantia do fabricante (NGF) e composição centesimal analisada (CCA) da Ração Comercial 1

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Quadro 3:
Nível de garantia do fabricante (NGF) e composição centesimal analisada (CCA) da Ração Comercial 2

Fig.1: Fígado de girinos de rã-touro, Lithobates catesbeianus, no 30º dia do período experimental. (a) Girinos alimentados com dieta experimental (32,68% de proteína bruta), severa degeneração vacuolar, hepatócitos desorganizados e congestão. Infiltrado inflamatório mononuclear periportal (Seta). Veia central do lóbulo (V). Ducto biliar (D). HE, obj. 20x. (b) Girinos alimentados com dieta experimental (37,92% de proteína bruta), hepatócitos hipertrofiados, marginalização do núcleo celular e citoplasma severamente vacuolizado, sugerindo grave quadro de esteatose (setas). HE, obj.40x. (c) Girinos alimentados com dieta experimental (57,53% de proteína bruta), degeneração dos hepatócitos e perda da arquitetura estrutural do órgão; presença de infiltrado inflamatório mononuclear distribuído difusamente por todo o parênquima hepático (setas). Espaço periportal (*). Veia central do lóbulo (V). Ducto biliar (D). HE, obj.20x.

Fig.2: Fígado de girinos de rã-touro, Lithobates catesbeianus no 60º dia do período experimental. (a) Girinos alimentados com dieta experimental (32,68% de proteína bruta), com severa congestão e dilatação dos espaços dos sinusoidais, levando a desorganização de hepatócitos (setas). HE, obj.20x. (b) Girinos alimentados com dieta comercial (37,92% de proteína bruta), com infiltrado inflamatório mononuclear multifocal (setas), demonstrando um quadro de hepatite crônica. HE, obj.20x. (c) Girinos alimentados com dieta comercial (57,53% de proteína bruta), com necrose severa e difusa. HE, obj.20x.

Quadro 1: Fórmula e composição nutricional da dieta experimental na dieta de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus)

^a
Umidade (%) = 2,0, Cinzas (%) = 71,6442, Colina (mg/kg) = 30.000, Magnésio (%) = 0,0085, Enxofre (%) = 1,1589, Ferro (mg/kg) = 25.714, Cobre (mg/kg) = 1.960, Manganês (mg/kg) = 13.345, Zinco (mg/kg) = 30.000, Iodo (mg/kg) = 939, Selênio (mg/kg) = 30, Vitamina A (UI/kg) = 600.000, Vitamina D₃ (UI/kg) = 600.000, Vitamina E (mg/kg) = 12.000, Vitamina K₃ (mg/kg) = 631, Tiamina B₁ (mg/kg) = 1.176, Riboflavina B₂ (mg/kg) = 1.536, Piridoxina B₆ (mg/kg) 1.274, Vitamina B₁₂ (mcg/kg) 4.000, Niacina (mg/kg) 19.800, Acido Pantotênico B₃ (mg/kg) = 3.920, Acido Fólico (mg/kg) = 192, Biotina (mg/kg) = 20, Vitamina C (mg/kg) = 40.250. ^b Valores calculados a partir do coeficiente de digestibilidade por Secco et al. (2005)Secco E.M., Stéfani M.V. & Vidotti R.M. 2005. Apparent digestibility of different ingredients in diets for bullfrog Rana catesbiana tadpoles. J. World Aquacult. Soc. 36:135-140..

Quadro 2: Nível de garantia do fabricante (NGF) e composição centesimal analisada (CCA) da Ração Comercial 1

Composição básica da ração: Milho integral moído, farelo de soja, farelo de glúten de milho = 60, farinha de carne e ossos, farinha de penas hidrolisadas, farinha de sangue, gordura vegetal estabilizada, cloreto de sódio (sal comum), cloreto de colina, calcário calcítico. Eventuais substitutivos: sorgo integral moído, quirera de arroz, farelo de milho, farelo de glúten de milho, farelo de trigo, farelo de arroz, levedura seca de cana de açúcar. Suplemento mineral e vitamínico: Vitamina A (min) = 35.000 U.I., Vitamina D₃ (min) = 2.000 U.I., Vitamina E (min) = 120 U.I., Vitamina K₃ (min) = 800mg, Ácido fólico (min) = 10mg, Biotina (min) = 10mg, Tiamina (B₁) = (min) = 25mg, Riboflavina (B₂) (min) = 35mg, Piridoxina (B₆) (min) = 40mg, Vitamina B₁₂ (min) = 100mcg, Niacina (min) = 350mg, Acido Pantotênico (min) = 150mg, Colina (min) = 2.500mg, Cobre (min) = 25mg, Ferro (min) = 150mg, Manganês (min) = 75mg, Selênio (min) = 1mg, Zinco (min) = 140mg, Mananoligossacarídeo (min) = 60mg.

Quadro 3: Nível de garantia do fabricante (NGF) e composição centesimal analisada (CCA) da Ração Comercial 2

Composição básica da ração: Milho integral moído, farelo de soja, farelo de glúten de milho = 60, farinha de carne e ossos, farinha de penas hidrolisadas, farinha de sangue, gordura vegetal estabilizada, cloreto de sódio (sal comum), cloreto de colina, calcário calcítico. Eventuais substitutivos: sorgo integral moído, quirera de arroz, farelo de milho, farelo de glúten de milho, farelo de trigo, farelo de arroz, levedura seca de cana de açúcar. Suplemento mineral e vitamínico: Vitamina A (min) = 35.000 UI, Vitamina D₃ (min) = 2.000 UI, Vitamina E (min) = 120 UI, Vitamina K₃ (min) = 800= mg, Ácido fólico (min) = 10= mg, Biotina (min) = 10mg, Tiamina (B₁) =(min) = 25mg, Riboflavina (B₂) (min) = 35mg, Piridoxina (B₆) (min) = 40mg, Vitamina B₁₂ (min) = 100mcg, Niacina (min) = 350mg, Acido Pantotênico (min) = 150mg, Colina (min) = 2.500mg, Cobre (min) = 25mg, Ferro (min) = 150mg, Manganês (min) = 75mg, Selênio (min) = 1 mg, Zinco (min) = 140mg, Mananoligossacarídeo (min) = 60mg.

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Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA Pesquisa Veterinária Brasileira, Caixa Postal 74.591, 23890-000 Rio de Janeiro, RJ, Brasil, Tel./Fax: (55 21) 2682-1081 - Rio de Janeiro - RJ - Brazil
E-mail: pvb@pvb.com.br

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Different protein levels in the diet of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) and its effects on the liver tissue

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[1] *Autor para correspondência: clebermansano@yahoo.com.br