A alga vermelha Gracilaria caudata J. Agardh tem sido utilizada no Brasil para a extração de ágar, principalmente no Nordeste do país. Na água do mar, a disponibilidade de nitrogênio é o principal fator abiótico que limita o crescimento de macroalgas. A enzima nitrato redutase (NR) é o ponto chave na regulação da assimilação do nitrogênio em organismos fotossintetizantes. Este estudo descreve o ensaio in vitro para caracterizar a atividade enzimática da NR em termos de constantes cinéticas e estabilidade, avalia sua oscilação ao longo do dia e a influência da glicose na modulação dessa enzima. Picos máximos de atividade da NR foram observados a 20 ºC e pH 8,0. A estabilidade enzimática do extrato bruto armazenado a 3 ± 1 ºC foi significativamente reduzida após 48 horas. As constantes aparentes de Michaelis-Menten (K M) para NADH e nitrato foram 22 µM e 3,95 mM, respectivamente. A atividade da NR apresentou oscilação sob fotoperíodo de 14 horas de luz e10 horas de escuro com três vezes mais atividade durante a fase de luz, apresentando seu máximo após 10 horas de luz. Sob condições ótimas de ensaio, a atividade máxima foi de 92,9 10-3 U g-1. A adição de glicose induziu a atividade da NR durante as fases de luz e de escuro, evidenciando uma via de modulação dessa enzima pela fotossíntese. Essa relação pode ser explicada pela necessidade de esqueletos de carbono, fornecidos pela fotossíntese, para incorporar os metabólitos intermediários da via de assimilação do nitrato, evitando assim a toxicidade intracelular pela acumulação de nitrito e amônio. A otimização dos protocolos de ensaio enzimático para NR é essencial para estabelecer condições apropriadas para estudos nutricionais, comparar diferentes grupos taxonômicos, e entender os mecanismos de sua regulação.
agarófita; Gracilaria caudata; metabolismo do nitrogênio; nitrato redutase
