b-galactosidases cotiledonárias foram isoladas e purificadas, parcialmente, de sementes quiescentes de feijão-de-corda (Vigna unguiculata (L.) Walp.) Pitiúba. As etapas de purificação consistiram de precipitação do extrato bruto com sulfato de amônio na faixa de 20-60% de saturação, precipitação ácida, cromatografia de troca-iônica em DEAE-Sephadex e cromatografia de afinidade em Lactosil- Sepharose. Esse processo de purificação deu origem a três frações ricas em b-galactosidases: b-gal I, b-gal II e b-gal III, as quais foram purificadas cerca de 5, 509 e 62 vezes, respectivamente. Elas atingiram máxima atividade enzimática em diferentes faixas de pH: 3,5-4,5 para b-gal I, 3,0-3,5 para b-gal II e 3,0-4,0 para b-gal III. Suas atividades máximas foram alcançadas quando a temperatura do meio de ensaio era 60° C, e a preincubação das enzimas em diferentes temperaturas mostrou que elas eram termoestáveis até 50° C. Não houve diferenças significativas entre as enzimas parcialmente purificadas no que respeita à resposta dos diferentes efetores testados, exceto para Mn2+ e EDTA, que afetaram, diferentemente, b-gal I, b-gal II e b-gal III. Elas foram ligeiramente afetadas por Mg2+, Ca2+, Zn2+, Co2+, tartarato, molibdato, glicose e lactose, fortemente inibidas por Cu2+ e galactose, e inativadas por Hg2+. Essas propriedades químicas e físicas são semelhantes às encontradas para outras b-galactosidases de plantas. Embora, três isoformas dessa enzima tenham sido obtidas através desse processo de purificação, a focalização isoelétrica em placa de gel de poliacrilamida dessas proteinas enzimáticas sugere que cotilédones de sementes quiescentes de feijão-de-corda Pitiúba possuem quatro isoformas de b-galactosidases.
