Pré-isolamento, isolamento e regeneração in vivo de protoplastos de mesofilo foliar de Malus doméstica ‘Anna’ cv.

Resumo

Protoplastos in vivo do mesofilo foliar da cultivar de macieira “Anna” foram isolados de folhas com 15 dias de idade através de plasmólise em meios contendo manitol a 90 g L-1, por meia hora e em seguida a 130 g L-1, pelo mesmo tempo. Anteriormente ao isolamento dos protoplastos foi realizado um pré tratamento com mistura enzimática contendo 1.5 % celulase + 0.5 % pectianase + 1.5 % Macrozyme, a fim de identificar e reduzir compostos fenólicos os quais, durante o ano, estimulam o isolamento de protoplastos. Diversos outros fatores também foram estimados usando as técnicas de isolamento, como por exemplo, pressão osmótica, período de incubação, tamanho do poro da peneira, período de centrifugação e balanço hormonal. A quantidade de células foi calculada por quadrado no hemocitômetro. Um rendimento consideravelmente maior de formação de protoplastos foi observado no meio CPW utilizando um tamanho de poro de 25 µm com período de incubação de 20 horas. Além disso, obteve-se a melhor regeneração de protoplastos com a utilização da densidade de protoplastos de 2.0 x 105 em meio MS suplementado por 1,0 mg L-1NAA e 0,3 mg L-1BAP. Acreditamos que nosso protocolo pode incentivar a recuperação da planta através da utilização de programas de hibridização somática em macieiras.

Termos para indexação
Maçã; Hibridização; Celulase; Pectianase; Macrozyme