Avidez de IgG em amostras coletadas em papel filtro: Importância no diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita

Souza, Jéssica Yonara de; Gomes, Taynara Cristina; Rezende, Hanstter Hallison Alves; Storchilo, Heloisa Ribeiro; Rodrigues, Patrícia Giffron; Castro, Ana Maria de

doi:10.1055/s-0041-1740272

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Revista Brasileira de Ginecologia e Obstetrícia

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Sumário

Original Article, Gynecological Endocrinology • Rev Bras Ginecol Obstet. 43 (12) • Out 2021 • https://doi.org/10.1055/s-0041-1740272 copiar

Avidez de IgG em amostras coletadas em papel filtro: Importância no diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita

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Resumo

Objetivo

O objetivo do presente estudo é padronizar e avaliar a utilização do teste de avidez de anticorpos imunoglobulina G (IgG) em amostras de sangue de recémnascidos (RNs) coletadas em papel filtro para a realização do teste do pezinho visando a implementação nos programas já vigentes.

Métodos

Foram coletadas amostras de sangue de recém-nascidos em papel filtro simultaneamente ao teste do pezinho. Em todas as amostras, foram realizados os testes imunoenzimáticos (ELISA) imunoglobulina M (IgM) e IgG. Dos RNs que apresentaram altos índices de IgG (³3), foi novamente coletado sangue periférico da forma tradicional e em papel filtro. Foram realizadas técnicas padrão para a dosagem de IgG em soro, adaptadas para papel filtro, e a técnica de avidez de IgG em soro e em papel filtro. Os valores obtidos para o teste de avidez foram classificados de acordo com o protocolo de Rahbari.

Resultados

Dentre as 177 recoletas, em 17 amostras foi realizada a coleta simultânea de sangue periférico e papel filtro da mesma criança. Nesta análise, 1 (5,88%) das 17 amostras coletadas em duplicata obteve também baixa avidez de IgG, sugerindo infecção congênita da criança, e houve concordância entre os resultados obtidos em soro e em papel filtro: 16 (94,12%) das amostras apresentaram alta avidez, com concordância de 100% entre os resultados obtidos em soro e em papel filtro.

Conclusão

Os dados do presente trabalho evidenciam que o teste de avidez poderá ser mais um método valioso a ser utilizado no diagnóstico da toxoplasmose congênita em RNs.

Palavras-chave
toxoplasmose; avidez de IgG; papel filtro; triagem neonatal; gravidez

Standard technique to measure serum IgG levels	Technique adapted to measure IgG levels on filter paper	Technique to determine IgG avidity in serum and on filter paper
100 μl of sample diluent + 5 μl of sample	Perforation with specific 5mm diameter perforator + 10 μl of sample diluent	Serum: 100 μl of sample diluent + 5 μl of sample Filter paper: 100 μl of sample diluent + one 5mm diameter filter paper disc
Incubation for 30 minutes at 37°C	Incubation for 30 minutes at 37°C	Incubation for 30 minutes at 37°C
First wash with 300 μl of washing solution previously prepared according to the manufacturer’s instructions	Removal of filter papers and first wash with 300 μl of washing solution previously prepared according to the manufacturer’s instructions	First wash with 300 μl of previously prepared solution of 6M Urea
	Addition of 100 μl of conjugate Incubation for 30 minutes at 37°C Second wash with 300 μl of washing solution previously prepared according to the manufacturer’s instructions Addition of 50 μl of substrate A and 50 μl of substrate B Incubation for 10 minutes at 37°C Addition of 50 μl of stop solution Reading on filters at 450nm and 630nm

Results	Mother		Child
	Absolute number	%	Absolute number	%
Reagent (IgM)	0	0	0	0
Reagent (IgG)	167	94.36	167	94.36
Reactive mother and non-reactive child (IgG)	5	2.82	5	2.82
Non-reactive mother and child (IgG)	5	2,82	5	2,82
Total samples	177	100	177	100

Samples	IgG avidity serum	IgG avidity filter paper	IgG serum (ELISA index)	IgG filter paper (ELISA index)
Patient 1	26%	26%	3.52	3.31
Patient2	52%	56%	2.94	2.75
Patient3	48%	43%	2.65	2.37
Patient4	89%	89%	2.04	1.47
Patient5	61%	87%	1.51	1.71
Patient6	56%	73%	2.0	2.02
Patient7	87%	86%	1.27	0.99
Patient8	95%	77%	16.70	17.21
Patient9	76%	84%	1.24	1.56
Patient10	77%	88%	3.72	2.59
Patient11	81%	91%	5.13	4.60
Patient12	86%	73%	3.44	4.53
Patient13	52%	55%	3.86	3.54
Patient14	72%	81%	2.25	2.18
Patient15	94%	92%	1.88	1.83
Patient16	53%	99%	4.72	2.17
Patient17	52%	55%	3.86	3.54

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[1] Address for correspondence Jéssica Yonara de Souza, 235th Street, Setor Universitário, 74605-050, Goiânia, State of Goiás, Brazil (e-mail: jessica_yonara@hotmail.com).