Validação de painel multiplex SSR-tetranucleotídeo para avaliação de parentesco em programas de seleção de tilápias

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi desenvolver ensaios de PCR e combinação de reações e validação de loci SSR de tetranucleotídeos para tilápias, visando minimizar o impacto de inferências errôneas de alelos na determinação dos genótipos deste tipo de marcador. Os microssatélites contendo repetições de tetranucleotídeos foram obtidos da versão 2.1 do genoma de tilápia, evitando a escolha de locus no mesmo grupo de ligação. Primers foram desenhados para diferentes tamanhos de fragmentos e fluorescências adicionadas a cada locus. Um total de 10 loci foram amplificados em separado e em combinações e carregados conjuntamente em um único painel em sequenciador capilar. Os alelos foram amplificados sem stutter e facilmente interpretados. Amplificações de PCR de DNA extraído de amostras repetidas e genotipagem em diferentes rodadas de PCR foram utilizadas para inferência de erros de assinalamento de alelos. O painel obtido neste estudo está sendo empregado na análise de parentesco e correção de pedigree em um programa de melhoramento genético desta espécie.

Palavras-chave:
Genotipagem; Marcadores microssatélites; Variabilidade genética