Embora a infecção por Mycoplasma haemofelis e "Candidatus Mycoplasma haemominutum" tenha sido reportada em felinos selvagens dos Estados Unidos, sua presença entre felinos selvagens de vida livre e de cativeiro no Brasil ainda é desconhecida. Um leão macho, saudável, com 12 anos de idade, residente no Zoológico de Curitiba, Brasil, foi anestesiado para transporte e avaliação dentária. Uma amostra de sangue foi coletada para a realização do hemograma completo e análise pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). O DNA foi extraído e fragmentos do gene 16SrRNA do Mycoplasma haemofelis e "Candidatus Mycoplasma haemominutum" foram submetidos à metodologia da PCR. O hemograma apresentou valores normais. Uma banda de baixa intensidade de aproximadamente 192 pb do "Candidatus Mycoplasma haemominutum" foi detectada, e nenhuma banda foi observada pela PCR na detecção de Mycoplasma haemofelis. A banda de baixa intensidade, o hemograma normal e a ausência de parasitemia e sinais clínicos podem sugerir uma infecção crônica subclínica por "Candidatus Mycoplasma haemominutum". A ausência de sinais clínicos pode também indicar a baixa patogenicidade desse microrganismo; entretanto, a imunossupressão por manejo e/ou tratamento com corticóides podem levar a parasitemia e conseqüente anemia neste animal. Este achado sugere novos estudos em felinos selvagens de cativeiro em zoológicos brasileiros.